AISLAMIENTO, SELECCIÓN, MANTENIMIENTO Y CONSERVACION DE

CEPAS MICROBIANAS

I. FUENTES DE SU OBTENCION
Suelo y agua (mayor almacén)
Fermentaciones naturales
Animales y plantas en caso de las vacunas
Colecciones internacionales de cultivo

II. AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS

Aislamiento
La muestra de suelo se resuspende en agua estéril
Se aíslan colonias separadas de distinta morfología y se purifican por
resiembra
Los cultivos puros se mantienen en tubos de ensayo como cultivos en medio
solido listos para realizar las pruebas de selección

Selección
Scrreening: Detección y aislamiento de microorganismos de interés industrial
de entre una población compleja de organismos utilizando procedimientos
selectivos.
Screening primario: Detección y aislamiento de microorganismos
potencialmente útiles.
Primero se realiza una suspensión del 10% de la fuente, generalmente el
suelo, de esta forma se separa las bacterias que estaban unidas a las
partículas del suelo y se quedan en la suspensión.
A continuación se realizan diluciones seriadas (1/10) para aislar las colonias y
se realiza el recuento para ver ufc/g.

Screening secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el

screning primario para separar los que tienen interés potencial de los que
tienen interés real.
Para conseguir pasar el microorganismo de la escala piloto a la escala
industrial tenemos que:
 Diseñar medios de cultivo a escala industrial
 Realizar una mejora genética de las sepas obtenidas
 Desarrolla los sistemas de producción industrial
 Hacer un análisis económico final

Selección de microorganismos productores de antibióticos

Sembramos el microorganismo en estría en una placa donde hay otro
microorganismo contra el que queremos que actúe el antibiótico; ambos van a
crecer; si el que hemos sembrado en estría produce antibiótico contra el que
ésta sembrado en la placa, este no va crecer alrededor de la estría.
Cuantificación: cultivamos ambos microorganismos, el que produce antibiótico
y sobre el que queremos actuar. En el cultivo del productor de antibiótico
separamos las células del sobrenadante de cultivo y nos quedamos con este
(ahí está el antibiótico)

III. MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN DE SEPAS MICROBIANAS

El mantenimiento implica cortos periodos de tiempo, y la conservación largos
periodos de tiempo.
Conservar y mantener una bacteria:
 Diseñar medios de cultivo a escala industrial
 Realizar una mejora genética de las sepas obtenidas
 Desarrollar los sistemas de producción industrial
 Hacer un análisis económico final

Técnicas de mantenimiento y conservación

1. Subcultivo seriado: consiste en resembrar el microorganismo cada
cierto tiempo en su medio adecuado
2. Desecación: consiste en eliminar el agua evaporándola; es un
mecanismo valido para microorganismos esporulados que aguantan
altas temperaturas. Puede ser en:
 En suelo, arena, silicagel
  En papel filtro
 En bolitas de alginato
 En sal

3. Congelación
Factores que afectan la viabilidad y estabilidad:
 Edad de las células
 Velocidad de congelación y descongelación
 Temperatura de almacenamiento
 Agentes crioprotectores
Para la congelación se usan tres temperaturas. (-30°C) (-70°C) (-196°C)

4. Liofilización: se elimina el agua congelando y sublimando por el vacío

Factores:
Los crioprotectores
El tipo de microorganismo
El número de células
La temperatura de sublimación
Grado de deshidratación
Condiciones de almacenamiento

IV. CONSERVACIÓN DE DIFERENTES GRUPOS MICROBIANOS

Técnicas:
Algas: subcultivo, desecación, congelación.
Bacterias: congelación, liofilización, desecación.
Hongos: desecación, liofilización.
Virus: congelación