Universidade Federal de Goiás

Departamento de Biomedicina
Campus Jataí-GO

Revisão: Biologia Molecular

P R O FA . M A . M A I S A R I B E I R O
 Introdução

 Estudo molecular das células

Genoma dos organismos

DNA
 Conjunto informações genéticas – codificadas

 Avanços biomol eucariotos – entendimento etiológico doenças humanas

 Técnicas recombinação ácidos nucleicos – identificar genes responsáveis doenças
hereditárias, avaliar mecanismos de infecção (microorganismos), conhecer
processos proliferação e diferenciação celular.
 Aplicação pesquisa marcadores genéticos – diagnóstico laboratorial
 Sequências DNA diferentes: úteis na analises forenses, testes paternidade,
antígenos anti-histocompatibilidade, alelos mutantes, gêneros e espécies
 Introdução
Moléculas celulares

 Biomol: macromoléculas
 Proteínas – cadeia de aminoácidos
 Ácidos nucléicos (DNA ou RNA) – cadeia de nucleotídeos

 Sequência monômeros – identidade e funcionalidade à macromolécula

 Mudança sequencial (aminoácidos ou nucleotídeos) – inativar ação biológica dos

compostos

Moléculas informacionais
 Introdução
Moléculas celulares

 Constituição química células: Água, sais min.

inorgânicos e orgânicos Carboidratos,
lipídeos, proteínas
e ácidos nucléicos

 Biologia molecular: ácidos nucléicos e proteínas – moléculas lineares

 Alterações genicas – mudança conformação e funcional proteína

 Erro - mutação
Introdução
Dogma central biologia molecular
 Define paradigma da biologia molecular: informação perpetuada replicação DNA traduzida
através: Transcrição (DNA – mRNA) e Tradução (mRNA – proteínas)
 Replicação
Perpetuação da informação genética

Fases: Iniciação – Alongamento e Término

Replicação
Moléculas envolvidas


Helicase Topoisomerases

SSBP (single strand

binding protein) DNA Polimerase (I, II e III)

Primase Ligase
Replicação
Moléculas envolvidas

 Helicase
Realiza a abertura das fitas – rompem as pontes de hidrogênio
 SSBP (single strand binding protein)
Evita reassociação da fita
 Topoisomerase
 Tipo I
 Topo I
 Relaxamento de superenrolamento positivo e negativo
 Topo III
 Relaxamento de superenrolamento negativo
 Tipo II
 Topo II ou DNA-girase
 Adiciona superenrolamento negativo
Replicação
Moléculas envolvidas


Replicação
Moléculas envolvidas

 DNA Polimerase
Síntese nova fita – adicionando nucleotídeos

 Primase
Sintetiza o “Primer” – sequência RNA

 Ligase
Liga os fragmentos de Okazaki
Replicação
Moléculas envolvidas

 Local dupla hélice desenrolada – produzindo dois filamentos únicos (moldes)

 DNA Polimerase: Adiciona desoxirribonucleorídeos ponta 3’ cadeia crescente – molde único

filamento DNA exposto
 Substratos – forma trifosfato dATP, dGTP, dCTP e dTTP
 Pol I: Exonuclease 5’-3’ – degrada dupla hélice DNA – remoção primers RNA
 Pol II: Exonuclease 3’-5’ – remove pareamento errado de base
 Pol III: Atividade polimerase - catalisa crescimento cadeia 5’ – 3’

Necessitam de um primer – 3’ OH livre

Replicação
Moléculas envolvidas

 Primase:
Complexo proteico – PRIMOSSOMO
Adiciona segmentos RNA – extremidade 3’ OH livre

 DNA-ligase:
Cataliza ligação fosfodiéster – segmentos adjacentes DNA
Replicação
Mecanismo iniciação

 Primeiro: Abertura duas fitas – Helicase

 Manter as fitas desenroladas – proteínas SSBP (proteína de estabilização de DNA fita simples)
 Superenrolamento – Topoisomerases diminuem a tensão
Replicação
Mecanismo - Alongamento

 Síntese nova fita – DNA Polimerase

Necessita Primer – RNA

 Adiciona nucleotídeos – 5’ → 3’
Replicação
Mecanismo – Término

 Fragmentos de Okazaki
Transcrição
Síntese mRNA
Introdução
RNA
 Cadeia nucleotídeos unifilamentar – mais flexível, variedade formas moleculares
tridimensional
Pareamento intramolecular

 Presença hidroxila C2 – facilita ação RNA processos celulares

 Ligações açúcar-fosfato – 5’ e 3’
 Introdução
RNA

U–AeG
U-G dobramento RNA
Estruturas complexas

Ribozima – catalisar
reações biológicas
Introdução
Classes RNA
 RNA mensageiro (mRNA):
- Codificam informação necessária – cadeia polipeptídica
- Intermediário síntese proteínas

 RNA funcionais
- Não codifica informação
- RNA produto final – múltiplas funções
- Transferência informação DNA – proteína
- Processamento e regulação outros RNA
 Introdução
Classes RNA funcionais
 Procariotos e eucariotos:
 RNA transportador (tRNA) – levar aminoácido processo tradução
 RNA ribossômico (rRNA) – composição ribossomos – guiam a tradução

 Eucariotos específicos:

Processamento
 Pequenos RNA nucleares (snRNA) – Sistema processa RNA transcrito – spliceossomo (snRNA
RNA + proteínas = complexo ribonucleoproteico – remove íntrons mRNA)
 MicroRNA (miRNA) – papel amplo regulação quantidade proteínas produzidas – gene
Regulação
da  Pequenos RNA interferência (siRNA) – proteção integridade genoma – inibem produção
expressão virus e impedem dispersão transposons loci cromossômico
gênica
Transcrição
Visão geral Filamento codificante

 1ª etapa transferência da informação gene – proteína

Filamento RNA complementar ao DNA – modificado = RNA transcrito

 Apenas um filamento DNA molde

 Sentido transcrição – 3’DNA e 5’RNA
 Genes transcritos sentidos diferentes – molde
 oposto
Transcrição
Etapas

Como o segmento apropriado é

transcrito, visto que o gene é um
segmento pequeno inserido no
cromossomo ????

 1ª Iniciação  Transcrição gênica Eucariotos mais complexa

que Procariotos
 2ª Alongamento
-Maior número de genes
 3ª Término RNA polimerase I – transcreve genes
-Menor densidade gênica rRNA
-Mais íntrons RNA polimerase II – todos os genes
codificantes (mRNA) e snRNA
RNA polimerase III – genes pequenos
RNA funcionais (tRNA e snRNA)
Transcrição
Inicialização
 Eucariotos: requer motagem proteínas no promotor – antes RNA polimerase II
Fatores gerais de transcrição (GTF) – reconhecem sequência promotora
+
Cerne RNA polimerase II

Complexo pré-iniciação (PIC) – muitas proteínas

Promotor – localizado lado 5’- ponto de início transcrição

Sequência TATA boxe (-30 pb) – ponto de início
Transcrição
Alongamento e Término
 RNA polimerase II se move – desenrola DNA frente / reenrola já transcrito = bolha
de transcrição (região unifilamentar DNA)
 Transcrição continua – região 3’ não traduzida (3’ UTR) – RNA polimerase II reconheça
sequencias término = libera RNA nascente e enzima
-Mecanismo intrínseco – sequencia rica GC formando grampo e sequencia de U
-Mecanismo dependente de Rô – proteína fator Rô reconhece sinais (sequencia rica em
C) término.
 Transcrição
Processamento pré-mRNA

 Tipo co-transcricional – processamento durante a transcrição

-Revestimento – pontas 5’ = cap – Protege RNA degradação

-Cauda poli(A) – ponta 3’ = sinal de poliadenilação

-Recomposição (splicing) – remoção íntrons e união éxons – RNA colinear

a proteína
Tradução
Síntese das proteínas
Introdução
Tradução
 Converte informação – trincas de nucleotídeos em aminoácidos (COLINEARIDADE)

 GENES (DNA) – FILEIRA NUCLEOTÍDEOS – SEQUÊNCIA AMINOÁCIDOS

Introdução
Tradução
 Local: Ribossomo (subunidade menor 40S e subunidade maior 60S)
 Inicio: Subunidade menor – liga-se codon iniciação AUG (metionina)
 Met-tRNA e subunidade maior – complexo subunidade menor + mRNA
 Fatores iniciação (proteínas – garantem interação ribossomo + mRNA sequência iniciadora
Tradução
Iniciação
 Ribossomo reconhece trinca iniciadora – pareamento sequência rRNA 16S (subunidade
menor)
 Com mRNA – proximo início (Sequência Shine-Delgarno)

 Alinhamento sequência iniciadora + tRNA

 Complexo de iniciação unido (ribossomo 80S)

Tradução
Alongamento
 mRNA mapa – entrega tRNA cognatos carregando aminoacyl (ligado ponta 3’ tRNA)
 Aminoácido adicionada cadeia polipeptídica – tRNA reciclado

Códon fim UGA,

UAA ou UAG
Fatores de
liberação
Tradução
Término
 Fatores liberação (RF1, RF2 e RF3) – reconhecem sequência término UGA, UAA ou UAG
OBRIGADA!!