Biología General

Blga. Patricia Hancco Bustinza

Escuela Profesional de Tecnologia Medica

Practica
ENZIMAS: RECONOCIMIENTO DE CATALASAS

Introducción

Se llaman enzimas las proteínas específicas que poseen función catalítica. Con participación de las
enzimas se verifican numerosos procesos químicos, el conjunto de los cuales constituye la esencia del
metabolismo. Influyendo en la velocidad de las reacciones metabólicas, las enzimas son capaces de
regular efectivamente los procesos de vitalidad. Semejantemente a los catalizadores inorgánicos, las
enzimas aumentan la velocidad de las reacciones químicas a cuenta de la disminución de la energía de
activación. Sin embargo, los catalizadores biológicos poseen una eficiencia mayor en la disminución
de la energía de activación y, como regla general, desempeñan su función a una temperatura
moderada, presión baja y unos valores de pH cercanos al neutro. Al mismo tiempo, las enzimas son
sensibles a las variaciones de las condiciones del medio en que están funcionando y tienen una serie
de particularidades relacionadas a su naturaleza proteínica.

Una enzima es una proteína que cataliza las reacciones químicas en los seres vivos. existen dos
factores que alteran o modifican la actividad enzimática: la temperatura y el pH.
La catalasa es un enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales y también
en microorganismos. Su función es descomponer una molécula tóxica, el peróxido de hidrógeno
(H2O2) resultante del metabolismo celular, en agua y oxígeno.
Catalasa
2H2O2 2H2O + O2

Fue una de las primeras enzimas purificadas y ha sido muy estudiada. Es una de las enzimas más
eficientes con una enorme velocidad de transformaciones por segundo y subunidad.
Esta proteína es un tetrámero formado por cuatro subunidades idénticas y cada monómero contiene
un grupo Hemo en el centro activo (estructura similar a la hemoglobina). En algunas especies
también contiene una molécula de NADP por subunidad cuya función es proteger a la enzima de la
oxidación por su sustrato H2O2.

La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como
desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patógenas son
anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con el desprendimiento de oxígeno que se produce
cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada.

Objetivos.−
• Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y
vegetales.
• El alumno demostrará in vitro la actividad enzimática de los Peroxisomas en
diferentes células.

I. Revisión Bibliográfica
De acuerdo al tema como mínimo tres bibliografías.

II. Materiales y métodos

4.1 Materiales

Muestras

• Hígado de pollo
• Riñon de pollo
• Corazón de pollo
• Rama de apio
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• Papa
• Saliva
Materiales de laboratorio
• HCl
• Alcohol
• Hidróxido de sodio
• Peróxido de hidrógeno
• 15 tubos de ensayo
• 1 gradilla
• 1 estuche de disección
• 2 cajas de petri
• 5 vasos precipitados de 100ml
• 1 vaso precipitado de 400ml
• 1 pipeta de 10 ml
• 1 Mechero
• 1 Mortero con pistilo
• Soporte con tubos de ensayo.
• Infernilla.
• Termostato (37 °C).
• Cloruro sódico, disolución al 0.3%.
• Almidón, disolución al 1% en disolución do cloruro sódico al 0,3%.
• Reactivo do Lugol.
• Agua destilada

II.2 Métodos

a).- Determinación de la catalasa

Los perixosomas se denominan así porque generalmente contienen una o más enzimas que
utilizan oxígeno molecular para eliminar átomos de hidrógeno a partir de substratos
orgánicos específicos a través de una reacción oxidativa que produce peróxido de
hidrógeno.
• Primeramente corta pequeños trozos de cada muestras, hígado, riñón, corazón, apio y
papa)
• Cojer 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de apio, colócalo en hielo.
• Cojer 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de papa, colócalo en hielo.
• Cojer 6 cubos de aproximadamente 1 cm3 de carne (hígado, riñón y corazón), colócalo
en hielo.
• Enumera los tubos del 1 al 6 y adiciona 2 ml de peróxido de hidrógeno( Precaución)
• A cada tubo adiciona el tejido tal como se anota en la tabla por cada muestra

TUBO AL MOMENTO DE AGREGAR (H2O2)

1 Machacado
2 Cocido
3 Con HCl
4 Con Etanol
5 Con NaOH
6 Sin ninguna alteración

• En cada uno de los tubos se debe determinar la presencia o ausencia de 02,

inmediatamente después de adicionar el tejido tapa el tubo con el dedo pulgar y coloca
en la boca del mismo tubo, un palillo en punto de ignición (no acerques los tubos a tu
cara o a la de tus compañeros)
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• Repite los pasos 4 a 6 para los otros tejidos.

b).- Determinar la labilidad térmica de las enzimas

La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. La temperatura óptima
para la acción de enzimas es la temperatura de cuerpo de los animales que oscila en el intervalo
de 36 a 41 °C. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleración de la
reacción a consecuencia de la activación de las moléculas de sustrato. A la vez, incluso un
aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la
conformación de la molécula de enzima, necesaria para la manifestación de su actividad
catalítica. Empieza, gradualmente, la desnaturalización de la enzima que se acelera bruscamente
a la temperatura que sobrepase 50°C. La inactivación de la enzima con aumento de la
temperatura del medio es irreversible. Al bajar la temperatura la enzima disminuye su actividad
también. El mecanismo de este proceso no está claro. Sin embargo, el enfriamiento no causa
desnaturalización de la enzima y por lo tanto su inactivación puede ser reversible.

• Primeramente se colecta saliva diluida (se enjuaga la boca con agua destilada y luego, al
tomar en la boca de 20 a 25 ml de agua, la colectan en un vasito).
• En tres tubos de ensayo se vierten de 2 a 3 ml de saliva diluida (amilasa) en cada uno
• La saliva en el tubo de ensayo 1 se hierve durante 1 min.
• Luego en todos los tubos de ensayo se añaden 4 ml de disolución de almidón.
• Los tubos de ensayo 1 y 2 si colocan en el termostato (37DC), donde se mantienen 10
mín.
• El tubo de ensayo 3 se sumerge en hielo y se tiene durante 10 min.
• Al transcurrir este tiempo, en el tubo de ensayo se añade 1gota de reactivo de Lugol.
• Los resultados del experimento se anotan en la tabla de lab] térmica de las enzimas y se
sacan conclusiones: Número del tubo de ensayo

Enzima Condición del Sustrato Incubación Coloración

experimento con iodo
1 Amilasa Enzima Almidón 10min 37ºC
desnaturalizada
2 Amilasa Enzima nativa Almidón 10min 37ºC
3 Amilasa Enzima Almidón

III. Resultados y Discusiones

Reportar los resultados obtenidos y discutir con los datos obtenidos en la revisión bibliográfica,

IV. Conclusiones
De acuerdo a los resultados y discusiones, mencionar las conclusiones para obtener el fenómeno
de osmosis y difusión

V. Bibliografía

CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la estructura y función de los peroxisomas?
2. ¿Qué es la enzima y como se relaciona con las peroxisomas?
3. ¿Cuál son los efectos del etanol y ácido clorhídrico sobre las enzimas?
4. Al cocinar los alimentos demasiado ¿Cómo influye en la actividad de las enzimas?
en lista las enzimas presentes en el peroxisoma
5. Anota las enzimas características de los glioxisomas, que no están presentes en los
peroxisomas?
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