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<a href=Início Usuários Comunidades Documentos Enviar conteúdo Cadastro Login antibiograma Bacteriologia, antibiograma ∑ | outros Cefar Diagnóstica Ltda. Pesquisa e Desenvolvimento de Produtos para Diagnósticos Av: Eng Alberto de Zagottis 635 - Jurubatuba São Paulo - SP - CEP. 04766-050 C.N.P.J. 44.562.700/0001-45 I. Est. 110.411.919.112 Fone: 0XX11 5521.9244 Fax 0XX11 5548.5132 Discos para Antibiograma, Discos para Identificação Presuntiva e Taxonômica Meios de Cultivo Hidratados, Bactérias Padrão, Bioindicadores e Laminocultivos. de Bactérias, Suplementos e Misturas Seletivas , ANTIBIOGRAMA PASSO A PASSO Teste de Sensibilidade por disco difusão (Metodologia de Kirby-Bauer) Etapa 1: Preparação dos Substratos Os discos a serem utilizados devem ter passado por controle de qualidade prévio quanto a sua eficácia para evitar quaisquer desvios na leitura e conseqüente erro ao reportar o status de sensibilidade de um microrganismo. Quanto ao meio de cultura, observar seu estado aparente (descolamento da placa, espessura 4mm, possíveis contaminações etc.) caso esteja pré-pronto. Ao se optar pela fabricação do meio de cultivo in house, deve-se determinar qual o meio mais adequado para o crescimento do microrganismo a ser avaliado. Para testes com microrganismos de crescimento rápido (p. ex. E. coli e Staphylococcus) usar meio de Mueller Hinton não suplementado. Para testes com microrganismos nutricionalmente exigentes (Haemophilus sp., Neisseria sp., pneumococos), usar meio de Mueller Hinton suplementado com sangue e/ou nutrientes específicos para o desenvolvimento do microrganismo. Em todos os casos atentar para a validade dos produtos utilizados. Etapa 2: Preparação do Inóculo O inóculo deverá ser preparado a partir de colônias isoladas e representativas do microrganismo, presentes em placa de isolamento primário. Para tanto, suspender em salina estéril ou caldo de cultivo a colônia a ser testada de forma a obter uma suspensão com turvação equivalente a 0,5 da escala de McFarlland (1,5 x 108 UFC/ml). Essa turvação pode ser obtida por: pré-incubação do inóculo (método do crescimento), onde a colônia isolada e suspendida em meio de cultura e seu crescimento e monitorado até que atinja a concentração desejada, ou por inoculação direta (método da suspensão direta), onde se suspende um número suficiente de colônias para se atingir a " id="pdf-obj-0-13" src="pdf-obj-0-13.jpg">
   
     

antibiograma

Bacteriologia, antibiograma

| outros Cefar Diagnóstica Ltda. Pesquisa e Desenvolvimento de Produtos para Diagnósticos

Av: Eng Alberto de Zagottis 635 - Jurubatuba São Paulo - SP - CEP. 04766-050 C.N.P.J. 44.562.700/0001-45 I. Est. 110.411.919.112 Fone: 0XX11 5521.9244 Fax 0XX11 5548.5132

Discos para Antibiograma, Discos para Identificação Presuntiva e Taxonômica Meios de Cultivo Hidratados, Bactérias Padrão, Bioindicadores e Laminocultivos. de Bactérias, Suplementos e Misturas Seletivas ,

ANTIBIOGRAMA PASSO A PASSO

Teste de Sensibilidade por disco difusão (Metodologia de Kirby-Bauer) Etapa 1: Preparação dos Substratos

Os discos a serem utilizados devem ter passado por controle de qualidade prévio quanto a sua eficácia para evitar quaisquer desvios na leitura e conseqüente erro ao reportar o status de sensibilidade de um microrganismo. Quanto ao meio de cultura, observar seu estado aparente (descolamento da placa, espessura 4mm, possíveis contaminações etc.) caso esteja pré-pronto. Ao se optar pela fabricação do meio de cultivo in house, deve-se determinar qual o meio mais adequado para o crescimento do microrganismo a ser avaliado. Para testes com microrganismos de crescimento rápido (p. ex. E. coli e Staphylococcus) usar meio de Mueller Hinton não suplementado. Para testes com microrganismos nutricionalmente exigentes (Haemophilus sp., Neisseria sp., pneumococos), usar meio de Mueller Hinton suplementado com sangue e/ou nutrientes específicos para o desenvolvimento do microrganismo. Em todos os casos atentar para a validade dos produtos utilizados.

Etapa 2: Preparação do Inóculo

O inóculo deverá ser preparado a partir de colônias isoladas e representativas do microrganismo, presentes em placa de isolamento primário. Para tanto, suspender em salina estéril ou caldo de cultivo a colônia a ser testada de forma a obter uma suspensão com turvação equivalente a 0,5 da escala de McFarlland (1,5 x 108 UFC/ml). Essa turvação pode ser obtida por: pré-incubação do inóculo (método do crescimento), onde a colônia isolada e suspendida em meio de cultura e seu crescimento e monitorado até que atinja a concentração desejada, ou por inoculação direta (método da suspensão direta), onde se suspende um número suficiente de colônias para se atingir a

concentração desejada. A confirmação da concentração do inóculo pode ser feita através do método de comparação visual com padrão de turvação correspondente a 0,5 da escala de McFarlland ou pelo método turbidimétrico, com leitura do inóculo a 625nm. A D.O. (Densidade óptica Espectrofotômetro ) desejada é de 0,08 à 0,10.

Etapa 3: Inoculação na Placa

Imergir um swab estéril na suspensão bacteriana e, retirando o excesso de inóculo através da compressão do swab nas paredes do tubo, semear a placa uniformemente em estrias. A placa é uniformemente semeada por rotações a cada 60 graus.

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Av: Eng Alberto de Zagottis 635 - Jurubatuba São Paulo - SP - CEP. 04766-050 C.N.P.J. 44.562.700/0001-45 I. Est. 110.411.919.112 Fone: 0XX11 5521.9244 Fax 0XX11 5548.5132

Discos para Antibiograma, Discos para Identificação Presuntiva e Taxonômica Meios de Cultivo Hidratados, Bactérias Padrão, Bioindicadores e Laminocultivos. de Bactérias, Suplementos e Misturas Seletivas ,

Etapa 4: Aplicação dos discos de sensibilidade

Os antibióticos a serem utilizados no teste de sensibilidade são definidos um laboratório de referência (p. ex. Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI) através de documentos periodicamente atualizados (p.ex. M100-S16/2006 CLSI). No Brasil o padrão utilizado é o estabelecido pelo CLSI ou pelo FDA (Food and Drug Administration). Os discos poderão ser utilizados de forma individual (Sensifar série básica e complementar, Sensifar-vet) ou em sistema multidisco (Multifar-15 e Multifar-24). Distribuir com o auxílio de uma pinça estéril os discos na superfície do ágar guardando distância aproximada de 24mm de centro a centro. Não remover ou reposicionar os discos após fixação no ágar Posicionar no máximo 12 discos (placas de 150mm) ou 5 discos (placas de 100mm) por placa de teste.

Etapa 5: Incubação das Placas

Após 15 minutos à temperatura ambiente, incubar as placas, invertidas, a 35ºC por 16-18 h. Condições diferenciadas de incubação: Staphylococcus aureus: 24 h ( Vancomicina e Oxacilina ) Haemophilus sp: 20-24 h a 5% CO2 Streptococcus pneumoniae: 18-24 h a 5% CO2

Etapa 6: Leitura da Zona de Inbição

Após o período de incubação, checar a característica do crescimento e o padrão das zonas de inibição ao redor dos discos. Usando um paquímetro, ou halômetro Cefar, medir as zonas de inibição, em milímetros, incluindo o diâmetro do disco. Observações: Discos com crescimento adjacente às bordas devem ser medidos a partir do crescimento externo. Qualquer crescimento dentro dos halos de inibição deve ser subcultivado, reidentificado e retestado. No caso de bactérias hemolíticas, fazer a leitura da zona de crescimento e não da zona de hemólise. No caso de antibiograma para Proteus sp., ignorar o véu formado na zona de inibição e ler normalmente seu diâmetro.

Cefar Diagnóstica Ltda. Pesquisa e Desenvolvimento de Produtos para Diagnósticos

Av: Eng Alberto de Zagottis 635 - Jurubatuba São Paulo - SP - CEP. 04766-050 C.N.P.J. 44.562.700/0001-45 I. Est. 110.411.919.112 Fone: 0XX11 5521.9244 Fax 0XX11 5548.5132

Discos para Antibiograma, Discos para Identificação Presuntiva e Taxonômica Meios de Cultivo Hidratados, Bactérias Padrão, Bioindicadores e Laminocultivos. de Bactérias, Suplementos e Misturas Seletivas , Etapa 7: Interpretação dos Resultados Para limites dos halos de inibição consultar Tabela CLSI M2-A9 ou Tabela de Interpretação do

Antibiograma Cefar. As definições das classificações são: SENSÍVEL: A classificação significa que uma dada infecção causada por tal microrganismo pode ser tratada eficientemente com a dose recomendada do agente antimicrobiano. INTERMEDIÁRIA: Esta classificação inclui organismos com valores de CIM (Concentração Inibitória Mínima) semelhantes àqueles atingidos por antibacterianos no sangue e tecidos e cuja avaliação da resposta venha a ser inferior a isolados sensíveis . A classificação intermediária encontra aplicação clínica em sítios corpóreos onde as drogas são fisiologicamente concentradas (ex: quinolonas e beta-lactâmicos na urina) ou quando uma alta dose de droga pode ser usada (ex: beta-lactâmicos). A classificação intermediária também inclui uma zona tampão que preveniria pequenos fatores técnicos que possam causar diferenças na interpretação, especialmente no caso de drogas com limites estreitos de farmacotoxicidade. RESISTENTE: Tal microrganismo não é inibido pelas concentrações usuais do antibiótico testado.

Principais Fatores de Erro na Técnica

Erro na transcrição de dados Erro na leitura dos halos de inibição Erro na padronização do inóculo Contaminação ou alteração na cepa-controle (ensaio qualitativo de controle de qualidade) Padrão velho da escala de McFarlland (suspensão de sulfato de bário) Espectrofotômetro não calibrado Temperatura ou atmosfera impróprias para incubação Semeadura não homogênea no ágar Variações no desempenho do meio de cultivo Perda de potência do disco durante o armazenamento (excesso de umidade, temperatura inadequada, expiração do prazo de validade) Qualquer dúvida ou para solicitação de material técnico, consulte-nos! e-mail: sacc@cefar.com.br Telefone: 5521-9244

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Shirley

29/10/2009

Faculdade: UEM Curso: Farmácia e Bioquímica Grupos de Estudo: conhecimentos avançados, Tamanho do arquivo: 43 kb Palavras chave:bacteriologia, analises clinicas,

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