UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Laboratorio de Bioquímica
Práctica 1: Buffers
I. Objetivos
1. El alumno aprenderá a preparar una solución buffer acetato 0.10M pH 5.0
tomando como referencia la ecuación de Henderson-Hasselbach.
2. El alumno comprobará la capacidad amortiguadora del buffer preparado
titulándolo con HCl e NaOH.
3. El alumno determinará si el suelo de cultivo, un extracto de hojas de alfalfa
tienen capacidad buffer.
II. Procedimiento
CALIBRACION DEL pH METRO: el alumno usara un pH metro portátil, al
cual previamente se le han activado los electrodos por inmersión, doce horas,
en una solución de HCl 1N. Se retira el pH metro de la solución acida y se
lava, a chorro, con agua destilada. Luego se introduce en una solución de
Buffer estándar pH7.0 y se abre el circuito, si el pH metro no marca 7.0 con el
selector de ajuste de pH se lleva a 7.0.
PREPARACIÓN DE BUFFER ACETATO: de la ecuación de Henderson-
Hasselbach calculamos el volumen de acido acético 0.1M que debe mezclarse
con acetato de sodio 0.1M para obtener 100mL de un buffer acetato 0.1M pH
5.0:
pH=pk + log ([sal]/[ácido])
Siendo el valor de pK para el acético de 4.76, se resuelve:
5.0=4.76 + log ([sal]/[ácido])
0.24= log ([sal]/[ácido])
El antilog de 0.24=[sal]/[ácido]=1.7378
La sal debe añadirse en 1.7378 veces la [ácido], si se quiere preparar 100 mL,
añadimos en un beacker de 250mL, 35 mL de ácido acético 0.10M y 61 mL de
acetato-Na y se añade 4 mL de agua destilada para completar los 100 mL.
Para volúmenes pequeños, por ejemplo 20 mL, se mezclarán 7 mL de acido
con 12.2 mL del acetato y se completa a 20 mL con agua destilada.
EVALUACION DE LA CAPACIDAD BUFFER: el buffer preparado (20
mL) se titulará con HCl 1M y/o NaOH 1M, para ello el alumno agregará de
100 en 100 µL el acido o la base, midiendo el pH, anotando la variación del
pH. En otro beacker colocará 20 mL de agua destilada y agregará solo 100 µL
de acido o base y podrá comprobar que se produce de inmediato una gran
variación de pH porque el agua no es un sistema buffer
¿TIENE EL SUELO CAPACIDAD BUFFER?: el alumno colocará 10g de
suelo de cultivo, en una probeta de 100 mL, completará con agua destilada
hasta los 100 mL, mezclará y después de dejar reposar unos minutos o filtrar,
tomará 20 mL medirá el pH luego añadirá 100 µL de HCl o NaOH, medirá el
pH y comprobará si la solución de suelo amortiguó el pH.
¿TIENE EL EXTRACTO DE HOJAS DE ALFALFA CAPACIDAD
BUFFER?: el alumno triturará en un mortero 10g de hojas de alfalfa y le
añadirá 20 mL de agua destilada, triturará las hojas hasta obtener un extracto
de 10g para un volumen final de 100 mL, filtrará, tomará 20 mL, medirá el pH
del extracto, luego comprobará la capacidad buffer añadiendo 100 µL de acido
o base, medirá el pH y deducirá la variación.
3. Resultados: mostrar en tablas o gráficos.
4. Discusión y conclusiones: analizar y comprender la validez de los
resultados.
5. Referencias: citar que libros o revistas consultó para elaborar el informe
[autor(es). Año. Titulo. Edición. Editorial. Lugar. Numero de páginas]
Cuestionario:
1. Describa un pH metro y analice su fundamento.
2. Haga una tabla de cómo preparar 100 mL de buffer fosfato 0.1M a los
siguientes pH: 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5.
3. ¿Cómo medir el pH de una solución estéril, a la que se quiere evaluar el pH
en una semana?