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A B C
Catalizador ou enzima
Características Gerais das Enzimas
• São proteínas globulares (sofrem desnaturação),
• São catalisadores orgânicos verdadeiros, pois não são afetadas pela reação que
catalisam,
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ENZIMAS - HISTÓRICO
Históriada Enzimologia à História da Bioquímica
1700 - Catálise biológica
◦ digestão da carne: secreções do estômago
Década de 50
◦ 75 enzimas → isoladas
◦ Ficou evidenciado caráter protéico
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Toda enzima é proteína?
◦ Ribozinas
moléculas de RNA que possuem a capacidade de atuar
como catalisadores
Hexoquinase
Estrutura de enzimas
Sítio ativo: cavidade da enzima
onde ocorre a catálise.
◦ Região pequena da molécula
Como?
B1
Coenzimas
Vitaminas
Originam coenzimas
Complexo B
Produtores
Fungos
Plantas
Microorganismos
ENZIMAS – ESTRUTURA
Estrutura Holoenzima
Enzimática
Proteína Cofator
• molécula orgânica
Coenzima
Se covalente
Grupo Prostético
Vitaminas são precursoras de coenzimas
Composta de carbono, hidrogênio e oxigênio
Lipossolúveis
Hidrossolúveis.
Lipossolúveis
◦ A (Retinol),
◦ D (Calciferol),
◦ E (Tocoferol) e
◦ K (Menaquinona)
Hidrossolúveis
◦ B1(Tiamina),
◦ B2 (Riboflavina), Por serem hidrossolúveis são perdidas na urina.
◦ B6 (Piridoxina), Ingestão diária.
◦ B12 (Cianocobalamina) e
◦ Vitamina C (Ácido Ascórbico)
◦ B3 (Niacina),
◦ B9 (Ácido Fólico),
◦ B7 (Biotina),
◦ B 5 (Ácido Pantotênico),
◦ Colina.
A Tiamina origina a TPP (tiamina pirofosfato)
vitamina B1
vitamina B2
Conzimas da
Glicólise
Ciclo do Ac. Cítrico
Cadeia transportadora
de elétrons
Ácido Pantotênico faz parte da Coenzima A
Vitamina B5
Coenzima A
Identificação de enzimas
Classificação numérica
Nomenclatura
◦ 4 números da Comissão de
◦ Sufixo –ase Enzimas
Urease ◦ E. C. 2.7.1.1
Hidrolase de uréia
Remove átomos de
Reações de óxido- Desidrogenase hidrogênio
1-Oxirredutases
redução
Hidrólise de
Reações de Glicosidases
3 - Hidrolases carbiodratos e
hidrólise e proteases
proteínas
Rompimento de
4 – Liases descarboxilase Remove CO2 CO2
ligações duplas
CO2
Definição:
◦ Catalisadores biológicos;
◦ Aumentam a velocidade de reação, mas não são consumidos
◦ Longas cadeias de pequenas moléculas (aminoácidos).
Função:
◦ Viabilizar a atividade das células, quebrando ou juntando moléculas para formar
novos compostos e fazendo transferência de grupos químicos.
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Estrutura de enzimas
Sítio ativo: cavidade da enzima
onde ocorre a catálise.
◦ Aas da enzima interagem com o
substrato
◦ Região pequena da molécula
Aminoácidos “chave”
◦ Interações fracas
FORÇAS DE VAN DER WAALS;
INTERAÇÕES ELETROSTÁTICAS;
LIGAÇÕES DE HIDROGÊNIO
INTERAÇÕES HIDROFÓBICAS
◦ Mudanças conformacionais
A enzima quimotripsina e seu substrato (em
vermelho) ligado. Transferências de grupos
Rompimento de ligações
Proteínas
A seqüência de aas do sítio
ativo é muito importante
Enzima Fosfolipase A2
Sítio ativo
α-hélices hidrofóbicas
Asp 49 - Resíduos de aas altamente conservados
Especificidade ao substrato
§ O sítio ativo ocupa uma parte relativamente pequena do volume total de uma enzima.
§ O sítio catalítico é tridimensional, e consiste em um sulco na superfície da enzima.
§ Os substratos ligam – se as enzimas por múltiplas interações fracas.
§ A complementaridade entre as enzimas e seus substratos é a base do modelo chave –
fechadura, proposto por Emil Fisher em 1894 ( a).
§ Os sítios ativos das enzimas são pré-formados, mas sofrem mudanças conformacionais no
momento de se ligar ao substrato (fenômeno designado ajuste induzido). (B).
A B
ð Emil Fischer (1894) propôs a teoria “Chave-Fechadura”
• Estado de transição
• S ßà P
Energia de
ativação
ΔG = negativo
Necessidade de menos energia
Velocidade maior de reação
E + S ßà ES ßà EP ßà E + P
Intermediários
◦ ES e EP
◦ Não são espécies químicas
Momento molecular
Quebra de ligações
Formação de novas ligações
Desenvolvimento de cargas
Importância da energia de ativação
Estabilidade das moléculas
Se não existisse a barreira da energia de
ativação as moléculas se desorganizariam
◦ Moléculas complexas nunca seriam estáveis
A vida não existiria
v A relação k2 + k3/k1 foi definida por Michaelis – Menten como uma nova
constante de velocidade: Km.
Km = k2 + k3 V0 = Vmax . [S]
k1 Km + [S]
Km é numericamente igual a [ S ]
onde ½ da Vmax é atingida
Quando a Km=[S]
Y = ax + b
x
Aprendendo a calcular KM e Vmax
A velocidade de uma reação enzimática foi determinada em várias
concentrações de substrato. Calcule o Km e Vmax da reação.
Cálculo de concentração do
[S]
uM
V0
uM/S
substrato e da velocidade.
0,25
0,75
0,5
1,20
1,0
1,71
2
2,18
4
2,53
diisopropilfluorofosfato inseticidas
Aspirina
A ácido acetil salicílico é outro exemplo de inibidor irreversível.
Transfere irreversivelmente seu grupo acetil para o grupo OH de um resíduo de
serina da molécula de cicloxigenase (enzima regulatória da síntese de
prostaglandinas – substâncias reguladoras de processos inflamatórios).
B1) Inibição Reversível Competitiva.
O inibidor compete com o substrato pela ligação no sítio ativo da enzima; mas uma
vez ligado, não pode ser transformado por ela.
Valor de Km é alterado
§ A inibição competitiva pode ser revertida ou diminuída quando se aumenta a [s].
§ Os inibidores competitivos, em geral, apresentam estrutura tridimensional semelhante à do
substrato.
Inibidores competitivos
Inibição Reversível Não-competitiva.
O inibidor não competitivo se liga à enzima em um domínio diferente do sítio ativo, alterando a
conformação da enzima e causando uma inativação reversível do sítio catalítico. A ligação do
inibidor não bloqueia a ligação do substrato, e vice – versa.
Os inibidores reversíveis não-competitivos sempre diminuem a Vmax obtida com uma dada
quantidade de enzima, mas não afetam o km.
Fatores que afetam a
atividade enzimática
Temperatura
Em baixas temperaturas, as reações são mais lentas devido à queda da energia cinética do
sistema.
Porém, como as enzimas são proteínas, o aumento da temperatura não causa apenas o
aumento da velocidade de reação mas, sim, dois efeitos opostos:
Isso acontece porque as enzimas são proteínas e como tal, podem ser desnaturadas. Ou seja,
a partir de uma determinada temperatura, as enzimas perdem sua estrutura nativa, o que leva
à perda de função.
EFEITOS DO pH
Δ no pH muda as cargas dos
grupos R dos aas
Fosforilação
Grupo fosfato muito negativo
Causa mudanças drásticas na enzima
ativando
inativando
b) ENZIMAS MODIFICADAS POR LIGAÇÃO COVALENTE.
Uma variedade de grupos químicos são usados na modificação covalente, reversível de
enzimas regulatórias para causar mudança de atividade.
Em geral, a ligação do modulador à enzima regulatória é catalisada por uma enzima e sua
retirada por outra.
c) ZIMOGÊNIOS OU PRÓ – ENZIMAS.
Algumas enzimas são sintetizadas numa forma inativa, designada proenzima ou
zimogênio, que depois é ativada por clivagem de uma ou mais ligações peptídicas
específicas.
Proteases