A princípio, acreditava-se que os domínios – Bacteria, Archaea e Eukarya – divergiram a partir de um ancestral em

comum. Na linhagem Bacteria encontram-se as bactérias consideradas verdadeiras. Na linhagem Archaea encontrasse as
arqueobactérias, que são aquelas que mantiveram características de suas ancestrais e não causam doenças, por isso tem menor
importância. Na linhagem Eukarya encontram-se todos os outros seres vivos.

Bacteriologia
|1| CARACTERÍSTICAS GERAIS

São microscópicas (0,15 a 4 micrômetros), unicelulares, procariontes, capazes de multiplicar-se fora de uma célula viva,
responsáveis por inúmeras doenças e quando cultivadas em laboratório, em meio sólido formam colônias.

|2| CLASSIFICAÇÃO BACTERIANA

A classificação é feita através dos seguintes critérios: morfologia, metabolismo, sorotipagem e genética.

Classificação Bacteriana – Morfologia

 A classificação morfológica das bactérias divide-se em duas: colonial e microscópica.

Classificação Quanto a Colônia

- Tamanho;
- Cheiro;
- Cor;
- Tamanho, elevação e forma.

Classificação Bacteriana - Forma e Arranjo

 Cocos: forma esférica.
- Cocos: coco isolado;
- Diplococos: dois cocos;
- Estreptococos: cocos em cadeia;
- Tétrade: quadrado cocos;
- Sarcinas: oito cocos;
 Estafilococos: cocos formando massas irregulares;
 Bacilos: forma cilíndrica.
- Bacilos: bacilo isolado;
- Diplobacilos: dois bacilos;
- Estreptobacilos: bacilos em cadeia;
- Cocobacilos: bacilos pequenos que se assemelham a cocos;
- Paliçadas: bacilos agrupados lado a lado.
 Espiralados: forma de bacilos torcidos.
- Espirilos: espiral rígido que se movem à custa de flagelos externos;
- Espiroquetas: espiral flexível que se movem à custa de contrações do citoplasma;
 Vibrião: são espirilos muito curtos, que tomam formato de vírgula.
 Pleomórficas: são bactérias que variam sua forma.
- Forma de estrela.
- Forma retangular.

Cocobacilos e Vibriões são formas de transição.

Classificação Bacteriana – Metabolismo
 Uso de O2;
 Necessidade de nutrientes;
 Produtos metabólicos;
 Enzimas produzidas.

Classificação Bacteriana – Sorotipagem

 Se usa ou não anticorpos para identificação de bactérias.

Classificação Bacteriana – Genética

 Se é específico ao DNA de determinada espécie;
 PCR;
 Hibridização de ácidos nucléicos.

|3|ESTRUTURAS DE CÉLULAS PROCARIONTES

As estruturas que podem ser encontradas em células bacterianas são:

- Estruturas externas: cápsula, parede celular, membrana plasmática, flagelos, pilis e fímbrias;
- Estruturas internas: citoplasma, nucleoide, ribossomos e plasmídeos.

ESTRUTURAS DE CÉLULAS PROCATIONTES – INTERNAS

Citoplasma
O citoplasma é composto por água, compostos de baixo peso molecular, macromoléculas, íons inorgânicos. É o local
onde ocorrem reações químicas vitais para a célula, entre elas a fabricação de moléculas que irão constituir as estruturas
celulares. Também é responsável pelo armazenamento de substâncias de reserva.

Inclusões/Grânulos de Reserva
São grânulos de reserva de energia e nutrientes, que encontra-se envolvido por uma membrana.

Nucleoide e Cromossomos
 O nucleoide é a estrutura responsável por armazenar os cromossomos bacterianos;
 O cromossomo bacteriano é composto de DNA circular (dupla hélice), que contém informações necessárias à
sobrevivência da célula, como a capacidade de replicação.

Ribossomos
São estruturas com função de síntese de proteínas. Em células bacterianas são do tipo 70s (em eucariontes são do tipo
80s) por possuírem uma subunidade de 50s e outra de 20s. Eles são alvos de drogas antibacterianas com função de parar a síntese
proteica.
 Coeficiente de Sedimentação

Os ribossomos classificam-se conforme o seu coeficiente de sedimentação que é a medida da velocidade de

sedimentação de uma substância ou partícula, geralmente através de algum tipo de gradiente em centrifugação. Nas células
procariontes eles se sedimentam a 70S e, suas subunidades a 30S e 50S. Quanto maior o coeficiente de sedimentação mais longe
uma molécula se move durante um dado período de centrifugação e fracionando o conteúdo conseguimos determinar a posição
relativa das moléculas separadas.

Plasmídeos
São moléculas pequenas e circulares, que possuem seu próprio material genético. Encontram-se mais em bactérias
gram-negativas e conferem vantagem seletiva às bactérias (resistência a antibióticos).
 Resistência a antibióticos: por possuir o seu próprio DNA, eles podem conter genes relacionados com a resistência aos
antibióticos, garantindo a sobrevivência da bactéria. Essa condição torna algumas infecções por bactérias difíceis de
serem controladas.

Endospóros
São estruturas desidratadas formadas por alguns organismos gram-positivos em resposta a condições adversas. O
endospóro contém o DNA bacteriano circundado por um revestimento espesso, semelhante à queratina, que confere resistência
ao calor, desidratação, radiação e produtos químicos. Não é metabolicamente ativo e pode permanecer inativo por anos. Após a
exposição à água e nutrientes, o endósporo pode voltar a ser metabolicamente ativo, germinando no estado vegetativo.

ESTRUTURAS DE CÉLULAS PROCATIONTES – EXTERNAS

Flagelos
São apêndices filiformes formados pela proteína estrutural flagelina, encontrados fixos na parede celular, onde podem se
apresentar em diferentes partes e em diferentes números. Sua função principal é levar a bactéria a local com nutrientes,
movimentando-se por meio da quimiotaxia.
 Quimiotaxia: é a movimentação exercida pelo flagelo quando provocado por um estímulo químico. Esse estímulo químico
podem ser substâncias atraentes ou repelentes.

Fímbrias e pilis
 Fímbrias: essas estruturas podem ocorrer nos polos ou em toda superfície bacteriana, de forma numerosa (de 1000 ou
mais em cada célula). São pequenas, delgadas e constituídas da proteína pilina. Normalmente, possui em sua
extremidade uma proteína chamada de adesina, que media a adesão específica da célula bacterina em diferentes
substratos. Dessa forma, elas têm como função a adesão de bactérias patogênicas às células superficiais do trato
respiratório, intestinal ou genital, prevenindo que as células bacterianas sejam retiradas do local pelo fluxo de muco ou
outros fluídos corporais e permite o início da infecção.
 Pilis: essas estruturas são mais longas e em número menor que as fímbrias (1 a 2 por célula).
- Pili sexual: é um dos tipos de pili, que é chamada dessa forma, por estar envolvida na transferência de DNA de uma
célula para outra no processo de conjugação.
- Virulência: pilis são responsáveis pela virulência de muitas bactérias, pois aumentam a capacidade de ligação aos tecidos
corporais, que aumenta as taxas de replicação e a capacidade interação com o organismo do hospedeiro.
Cápsula/ Glicocálice
Essa estrutura é formada por uma camada viscosa de polissacarídeos que confere proteção contra a desidratação de
bactérias, pois, quando presente, se encontra na parte mais externa da bactéria. Sua principal função é a aderência em
superfícies, onde em bactérias patogênicas está relacionada ao fator de virulência, pois atrapalha o processo de fagocitose das
células de defesa.

 Fator de Virulência: são estruturas, produtos ou estratégias que as bactérias utilizam para “driblar” o sistema de defesa
do hospedeiro e causar uma infecção. Dessa forma, uma bactéria encapsulada é mais virulenta que um não capsulada.

Parede Celular
A parede celular bacteriana é uma estrutura rígida formada de peptídeoglicanos, que fornece a forma geral da célula e a
proteção contra o choque osmótico. Esses peptídeoglicanos encontram-se ligados a cadeias laterais de aminoácidos. Essa
composição geral (componentes da parede + estruturas associadas) varia entre as bactérias.

Peptídeoglicanos ou Mureína

Os peptídeoglicanos são formados da junção de unidades repetidas de dissacarídeos e polipeptídeos.

 Os dissacarídeos (dois açucares ligados) são: N-acetilglucosamina (NAM) e ácido N-acetilmurâmico (NAG).
 Os polipeptídeos (cadeias de aminoácidos) são do tipo D e L: L-alanina, D-alanina, ácido D-glutâmico e L-lisina.

Existe uma enzima chamada de lisozima, que possui origem natural, pois é encontrada em diversos fluidos corporais e
secreções externas do corpo, como lágrimas, saliva, suor, secreção nasal, etc. Ela possui uma relação próxima à camada de
peptídeoglicano das bactérias, pois ela digere-a. Ela age mais em bactérias gram + pois sua camada de peptídeoglicano está mais
exposta ao meio externo, em relação as gram – que possuem uma camada exterior a de peptídeoglicano, conferindo maior
proteção.

Bactérias Gram-Positivas e Gram-Negativas

Bactérias gram-positivas e gram-negativas diferenciam-se pela constituição da parede celular.

 Gram-positivas: A parede celular dessas bactérias é composta por uma camada espessa de peptídeoglicanos (cerca de
90%) e possui também polissacarídeos de ácido teicóico (ácido lipoteicóido e ácido teicóico). Esses ácidos são carregados
negativamente, oque ajuda no transporte de íons positivos e no armazenamento de fósforo.

A composição da estrutura externa dessas bactérias segue a seguinte ordem (externo para interno): camada de peptídeoglicanos
e membrana plasmática.

 Gram-negativas: As paredes celulares dessas bactérias são mais complexas quimicamente apesar de serem mais finas.
Elas não possuem ácido teicóico, mas possuem uma membrana externa à parede celular.
- Membrana Externa:
Essa membrana atua como barreira de permeabilidade de moléculas e é composta por dois folhetos:
- Folheto Interno: é semelhante à membrana citoplasmática, pois é composta por fosfolipídeos e lipoproteínas.
- Folheto Externo: é composto de lipopolissacarídeos (LPS), que são constituídos de três partes - lipídeo A (é liberado na
morte da bactéria, causando inflamação, febre, choque e etc, pois funciona como uma endotoxina), polissacarídeo cerne
(tem função estrutural) e antígeno O (funciona como antígeno e é útil na tipagem da bactéria).

A composição da estrutura externa dessas bactérias segue a seguinte ordem (externo para interno): membrana externa,
camada de peptídeoglicanos e membrana plasmática. Existe ainda um espaço entre essas camadas, que é chamado de espaço
periplasmático.
Membrana Plasmática
A membrana citoplásmica das bactérias é uma bicamada fosfolipídica semelhante às membranas eucarióticas, exceto que
as membranas eucarióticas contêm esteróis e as bactérias, com a exceção dos micoplasmas, não contêm, fazendo com que sejam
menos rígidas.
A membrana é responsável por processos essenciais para as células, pois é uma barreira para a maior parte das
moléculas solúveis em água, e é muito mais seletiva do que a parede celular. Ela também contém várias enzimas, onde algumas
delas participam na produção de energia e síntese da parede celular.

 Funções da Membrana Plasmática

- Barreira de Permeabilidade: atua como uma porta para o transporte de nutrientes para dentro e fora da célula.
- Tipos de Transporte Através da Membrana:
Ancoragem de Proteínas: é sítio de muitas proteínas envolvidas no transporte, bioenergética e quimiotaxia.
Conservação de Energia: sítio de geração e utilização da força próton motiva.

|5| LÂMINAS E COLORAÇÃO

 Preparação do Esfregaço: Todo o procedimento deve ser realizado atrás da chama. Começa-se acendendo o bico de
Bunsen e colocando a chama azul; Com a pinça de madeira flâmbar a lâmina em ambos os lados; Com a pipeta de
Pasteur pingar duas gotas de solução salina ou soro fisiológico no centro da lâmina; Flambar a alça de platina até ficar
rubra; Com a alça de platina pegar o microrganismo que está na placa de petri e espalhar sobre toda a lâmina; Flambar
novamente a alça de platina até ficar rubra e flambar o fundo da lâmina até secar.
 Coloração Simples: Com a pipeta de Pasteur pegar o azul de metileno e espalhar sobre todo o esfregaço, enxaguar e
secar delicadamente com papel higiênico.
 Coloração de Gram: Com a pipeta de Pasteur colocar o cristal violeta, esperar um minuto e enxaguar; Colocar o Lugol,
esperar um minuto e enxaguar; Colocar álcool-acetona e enxaguar; Colocar a fucsina, esperar 30 segundos, enxaguar e
secar delicadamente com papel higiênico.
- As bactérias que forem gram+ ficaram com cor roxa e as gram- ficaram com cor rosa.
 Coloração de BAAR (Ziehl-Neelsen): Com a pipeta de Pasteur colocar a fucsina sobre todo o esfregaço; Flambar o fundo
da lâmina e enxaguar; Colocar o álcool-ácido e enxaguar; Colocar o azul de metileno, enxaguar e secar com papel
higiênico.
 Metabolismo Microbiano
O metabolismo é um conjunto de reações químicas, catalisadas por enzimas, que ocorrem nas células de organismos
vivos. Essas reações podem necessitar de energia ou liberar energia, fazendo com que o metabolismo seja um tipo de
balanceamento energético que permite que essas células sobrevivam, dividam-se e cresçam.

|1| TIPOS DE REAÇÕES QUÍMICAS NO METABOLISMO & MOEDA ENERGÉTICA

As reações químicas que ocorrem no metabolismo podem ser divididas em dois tipos: anabólicas e catabólicas.

Anabolismo: refere-se às reações anabólicas e que precisam de energia para ocorrer (endergônicas). Nesse tipo de reação, há
construção de moléculas complexas a partir de moléculas simples e envolve reações de síntese por desidratação (reações que
liberam água).

Catabolismo: refere-se às reações catabólicas e que liberam energia em meio ao processo (exergônicas). Nesse tipo de reação, há
quebra de moléculas complexas em moléculas mais simples e envolve reações hidrolíticas (reações que utilizam água e nas quais
ligações químicas são quebradas).

A moeda energética desses processos é o ATP (Trifosfato de Adenosina).

O ATP consiste em uma adenina, uma ribose e três grupos fosfato. Quando o grupo fosfato terminal é retirado do ATP através do
catabolismo, difosfato de adenosina (ADP) é formado, e a energia é liberada para dirigir as reações anabólicas.

|2| ENZIMAS NO METABOLISMO

A teoria de colisão dita que todos os átomos, íons e moléculas estão em movimento constante e que, portanto, colidem
constantemente uns com os outros. A energia transferida pelas partículas na colisão pode romper suas estruturas eletrônicas o
suficiente para quebrar as ligações químicas ou formar novas ligações. Dito isso, existem dois conceitos importantes para o
entendimento de como as reações ocorrem: energia de ativação e taxa de reação.

 Energia de ativação: é a quantidade de energia necessária para romper a estabilidade da configuração eletrônica de
qualquer molécula específica para que os elétrons possam ser reorganizados.
 Taxa de Reação: é a frequência de colisões que contém energia suficiente para que uma reação aconteça, dependendo
do número de moléculas reagentes que estejam no nível da energia de ativação ou acima dela.

Conceitos Gerais

As Enzimas compõem um grupo pertencente às proteínas, com função catalizadora, ou seja, de acelerar reações químicas
biológicas. Como catalisadoras, as enzimas são específicas, pois sua molécula possui um sítio ativo, região que interage com uma
substância química específica, chamada de substrato, onde cada substrato catalisa apenas uma reação.

Composição

Embora algumas enzimas consistam inteiramente de proteínas, a maioria apresenta uma porção proteica chamada de
apoenzima e um componente não proteico que pode ser uma molécula inorgânica (íons de ferro, zinco, magnésio ou cálcio) ou
uma molécula orgânica, chamada de coenzima. As apoenzimas são inativas sozinhas; elas devem ser ativadas pelo componente
não proteico. A junção de uma apoenzima com uma coenzima forma uma holoenzima. Se a coenzima for removida, a apoenzima
não funcionará.
Mecanismo de Ação

A superfície do substrato entra em contato com o sítio ativo; Um composto intermediário temporário é formado,
chamado de complexo enzima-substrato; A molécula de substrato é transformada pelo rearranjo dos átomos existentes, pela
quebra da molécula de substrato, ou pela combinação com outra molécula de substrato; As moléculas de substrato
transformadas – os produtos da reação – são liberadas da molécula da enzima porque elas não se encaixam mais no sítio ativo da
enzima; A enzima inalterada está agora livre para reagir com outras moléculas de substrato. Isso ocorre, sem que haja mudança
de temperatura no sistema vivo. Essa não mudança de temperatura é crucial, pois um aumento significativo da temperatura
poderia destruir as proteínas celulares.

dito isso, as vias metabólicas das células (sequências de reações químicas) são determinadas por suas enzimas, que por sua vez são
determinadas pela constituição genética da célula.

Fatores que Afetam a Atividade Enzimática

 Temperatura: A temperatura ideal para uma bactéria no corpo humano é entre 35ºC e 40ºC. Se a temperatura passar
dessa faixa ideal, a velocidade da reação diminui drasticamente, pois há desnaturação enzimática (quebra de ligações
não covalentes que mantêm a proteína em estado funcional e na sua configuração tridimensional).
 pH: As enzimas possuem um valor de pH em que sua atividade é máxima. Se houver aumento ou diminuição nesse valor,
a atividade enzimática e a velocidade de reação diminuem.
 Concentração do Substrato: Para que a enzima esteja trabalhando em velocidade máxima, a concentração do substrato
tem que estar extremamente alta (saturadas). A velocidade da reação é alterada quando essa concentração é alterada
(para menos).

|3| OXIDAÇÕES BIOLÓGICAS (REAÇÕES REDOX)

As reações de oxidação biológica consistem na remoção de elétrons (e-) de um átomo ou

molécula, produzindo energia necessária para a célula trabalhar. Elas são conhecidas
como reações redox, pois ao mesmo tempo que há oxidação de uma molécula, há
redução de outra. Nessas reações, há participação de enzimas e coenzimas.

a energia liberada nas reações redox é armazenada na célula na forma de ATP. Isso ocorre através da fosforilação da molécula de
ADP.
|4| FOSFORILAÇÃO E MECANISMOS DE FOSFORILAÇÃO

Fosforilação consiste na adição de um grupo fosfato (p) a compostos químicos. Na formação do ATP, um grupo fosfato é
adicionado à molécula de ADP junto à energia liberada nas reações redox. Quando a ligação é quebrada, a energia utilizável é
liberada.

Fosforilação em Nível de Substrato

Fosforilação ao nível de substrato é a formação direta de ATP pela transferência direta de um grupo fosfato para o ADP, vindo de
outra molécula fosforilada.

Fosforilação Oxidativa

A fosforilação oxidativa é a junção da cadeia transportadora de elétrons e a quimiosmose. Ela ocorre na membrana plasmática
dos procariotos e na membrana mitocondrial interna dos eucariotos. Na cadeia transportadora de elétrons, os elétrons são
passados entre proteínas e moléculas orgânicas por meio de reação redox, liberando energia que é capturada para produzir ATP
na quimiosmose. Junto com a energia, a molécula de ADP recebe o grupo fosfato.

Fotofosforilação

A fotofosforilação ocorre em células fotossintéticas, onde a energia luminosa excita e desprende elétrons da clorofila (ou outros
pigmentos) existentes nas plantas. A energia associada aos elétrons produz ATP e NAHPH, num processo que produz o ATP a
partir do ADP e fosfato inorgânico. O ATP produzido é usado na síntese de moléculas orgânicas. Há, também, cadeia
transportadora de elétrons.

|5| METABOLISMO DE BACTÉRIAS

Todas as bactérias patogênicas são heterotróficas, elas obtêm energia através da oxidação de moléculas orgânicas e o
metabolismo destas moléculas (carboidratos, lipídeos e proteínas) fornece a energia (adenosina trifosfato - ATP) necessária para
as bactérias desenvolverem suas funções vitais.
O metabolismo pode ser aeróbio, em que o aceptor final de elétrons é o oxigênio, ou anaeróbio, em que o aceptor final
de elétrons é uma molécula inorgânica. As bactérias aeróbias produzem 38 moléculas de ATP a partir de uma molécula de glicose.
Enquanto que as bactérias anaeróbias produzem apenas 2 moléculas de ATP.
O metabolismo anaeróbio, apesar de ser menos eficiente que o metabolismo aeróbio, é realizado em condições onde os
substratos estão mais facilmente disponíveis.
A exigência pela presença do oxigênio durante o metabolismo pode ser
obrigatória ou facultativa, sendo assim alguns organismos conseguem alternar entre a
respiração aeróbia e anaeróbia.

|5| CATABOLISMO DO CARBOIDRATO

A maioria dos microrganismos oxida carboidratos como sua fonte primária de energia celular. Para isso, eles utilizam a respiração
celular e a fermentação. Tanto a respiração celular quanto a fermentação iniciam-se com a glicólise, mas seguem vias posteriores
diferentes. A respiração celular segue com o ciclo de Krebs e a cadeia transportadora de elétrons e a fermentação transforma o
produto final da glicólise em álcool ou ácido lático, sem passar por alguma outra via. Dessa forma, o rendimento de ATP na
fermentação é menor comparado com o da respiração celular.
 Crescimento Microbiano
“O crescimento microbiano é definido não em termos de tamanho celular, mas como o aumento do número de células, que
ocorre por divisão celular”.

|1| FATORES DE CRESCIMENTO

Os fatores necessários para o crescimento microbiano podem ser divididos em duas categorias principais:
 Físicos: temperatura, pH e pressão osmótica;
 Químicos: fontes de carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo, oxigênio, micronutrientes e fatores orgânicos de crescimento
(vitaminas, aminoácidos, purinas, pirimidinas).

Fatores de Crescimento Físico – Temperatura

A maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres humanos. Contudo, certas bactérias são capazes
de crescer em extremos de temperatura que certamente impediriam a sobrevivência de quase todos os organismos eucarióticos.
Dessa forma, eles são classificados em três grupos principais com base em sua faixa preferida de temperatura:
 Psicrófilos: crescem em baixas temperaturas;
 Mesófilos: crescem em temperaturas moderadas;
 Termófilos: crescem em altas temperaturas.

Cada espécie bacteriana cresce a uma temperatura mínima, ótima e máxima específica:
 Temperatura Mínima: menor temperatura na qual a espécie pode crescer;
 Temperatura Ótima: temperatura na qual a espécie cresce melhor. Ela está normalmente deslocada para perto da
variação máxima de temperatura;
 Temperatura Máxima: maior temperatura na qual o crescimento é possível. Acima dessa temperatura, o fator de
crescimento decresce rapidamente, provavelmente pela inativação dos sistemas enzimáticos.

Conservação de Alimentos

A refrigeração é o método mais comum de preservação dos alimentos. Esse método tem como base o princípio de que as
velocidades de reprodução microbiana decrescem em baixas temperaturas. Embora os micro-organismos sobrevivam mesmo em
temperaturas próximas do congelamento (podem ficar totalmente dormentes), eles gradualmente diminuem seu número.

 Psicrotróficos: não crescem bem em temperaturas baixas, exceto quando comparados com outros micro-organismos,
mas conseguem ser capazes de deteriorar lentamente o alimente, torando forma de micélio fúngico, limo na superfície
do alimento ou alterações de sabor ou cor nos alimentos;
 Mesófilos: incluem a maioria dos organismos patogênicos e deteriorantes.

Fatores de Crescimento Físico – pH

A maioria das bactérias cresce melhor em uma faixa estreita de pH perto da neutralidade, entre pH 6,5 e 7,5. Poucas bactérias
crescem em um pH ácido abaixo de 4. No entanto, algumas bactérias, chamadas de acidófilas, são resistentes à acidez.

Quando bactérias são cultivadas no laboratório, elas com frequência produzem ácidos que algumas vezes interferem com seu
próprio crescimento. Para neutralizar os ácidos e manter o pH apropriado, tampões químicos são incluídos no meio de cultura. As
peptonas e os aminoácidos atuam como tampões em alguns meios, e muitos meios também contêm sais de fosfato. Os sais de
fosfato têm a vantagem de exibir o seu efeito de tampão na faixa de pH de crescimento da maioria das bactérias. Eles também
não são tóxicos; de fato, eles fornecem fósforo, um nutriente essencial.
Fatores de Crescimento Físico – Pressão Osmótica

Os microrganismos são compostos de 80% a 90% de água, pois necessitam dela para crescer (obtêm a maioria de seus nutrientes
dela). A pressão osmótica, causada pelo movimento de água através da membrana torna-se então, um dos fatores envolvidos no
processo de crescimentos desses organismos.
 Pressão osmótica elevada retira água da célula: quando células microbianas estão em soluções com grande concentração
de solutos, a água viaja de dentro dela, para fora dela, a fim de diluir a solução concentrada. Isso causa a plasmólise da
célula (encolhimento), que inibe o crescimento da célula.
 Pressão osmótica baixa leva água para dentro da célula: alguns microrganismos posem sofrer lise em situações como essa,
por possuírem parede celular relativamente frágil.

 Halófilos Extremos/ Obrigatórios: microrganismos adaptados a concentrações elevadas de sais. Requerem sua presença
para crescer.
 Halófilos Facultativos: microrganismos que não requerem concentrações elevadas de sal, mas são capazes de crescer em
concentrações de até 2% de sal, o que inibe o crescimento de muitos organismos. Algumas espécies de halófilos
facultativos podem tolerar mesmo 15% de sal.

|2| OXIGÊNIO X CRESCIMENTO MICROBIANO

Formas Tóxicas do Oxigênio

 
1 –
Oxigênio Singlet ( O2 ): oxigênio molecular normal (O2) que foi induzido a um estado de alta energia sendo
extremamente reativo;

–
Radicais Superóxidos (O2 )/ Ânions Superóxidos: são formados em pequenas quantidades durante a respiração normal
dos organismos que utilizam o oxigênio como aceptor final de elétrons, produzindo água. Na presença de oxigênio, os
anaeróbicos obrigatórios parecem formar também alguns radicais superóxidos, que são tão tóxicos para os componentes
celulares que todos os organismos tentando crescer no oxigênio atmosférico devem produzir uma enzima, a superóxido-
dismutase (SOD), para neutralizar esses radicais. Sua toxicidade é causada por sua grande instabilidade, que faz com que
sejam retirados elétrons das moléculas vizinhas, produzindo um efeito de remoção de elétrons em cascata. Os aeróbicos,
os anaeróbicos facultativos crescendo aerobicamente e os anaeróbicos aerotolerantes produzem SOD, com a qual eles
convertem o radical superóxido em oxigênio molecular (O2) e peróxido de hidrogênio (H2O2); Anaeróbicos obrigatórios
NÃO produzem SOD nem catalase;

2-
Peróxido de Hidrogênio: contém o ânion peróxido O2 , que também é tóxico. Como o peróxido de hidrogênio produzido
durante a respiração aeróbica normal é tóxico, os micro-organismos desenvolveram enzimas para sua neutralização. A
mais comum é a catalase, que converte o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio;
 Radical hidroxila (OH): é outra forma intermediária do oxigênio, sendo provavelmente a mais reativa. Ele é formado no
citoplasma celular por radiação ionizante. A maioria da respiração aeróbica produz traços de radicais hidroxila, mas eles
são transitórios.

Essas formas tóxicas do oxigênio são um componente essencial de uma das mais importantes defesas do corpo contra os
patógenos, a fagocitose, onde os patógenos ingeridos são mortos pela exposição ao oxigênio singlet, aos radicais superóxidos,
ânions peróxidos do peróxido de hidrogênio, radicais hidroxila e outros compostos oxidativos relacionados.

|3| BIOFILMES

Na natureza, os micro-organismos raramente vivem em colônias isoladas de uma única espécie, como vemos no laboratório. Mais
tipicamente, eles vivem em comunidades chamadas de biofilmes, que:
 Residem em uma matriz, feita essencialmente de polissacarídeos que contém DNA e proteínas, chamada de limo; essa
matriz pode ser considerado um hidrogel - polímero complexo contendo uma quantidade de água que corresponde a
várias vezes seu peso seco;
 Possui comunicação química entre as células/ quorum sensing, que permite às bactérias coordenarem sua atividade e se
agrupar em comunidades que fornecem benefícios;
 Geralmente são fixados em superfícies como uma pedra em um lago, um dente humano;
 Dentro da comunidade as bactérias são capazes de compartilhar nutrientes e são protegidas de fatores danosos do
ambiente, como a dissecação, os antibióticos e o sistema imune corpal. A proximidade estreita entre os microrganismos
dentro do biofilme também pode ter a vantagem de facilitar a transmissão de informação genética.

|4| MEIOS DE CULTURA

O meio de cultura é o material nutriente preparado para o crescimento de micro-organismos em um laboratório. Algumas
bactérias podem crescer bem em qualquer meio de cultura, outras requerem meios especiais, e outras ainda não podem crescer
em qualquer dos meios não vivos até agora desenvolvidos.
 Inóculo: microrganismos introduzidos em um meio de cultura para iniciar o crescimento;
 Cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam dentro ou sobre um meio de cultura

Critérios para Cultivo de Culturas

 Deve conter os nutrientes adequados para o micro-organismo específico que queremos cultivar;
 Deve conter uma quantidade de água suficiente, um pH apropriado e um nível conveniente de oxigênio ou nenhum;
 O meio deve ser estéril – isto é, deve inicialmente não conter micro-organismos vivos – dessa forma a cultura conterá
somente os micro-organismos (e sua descendência) que foram introduzidos.
 A cultura em crescimento deve ser incubada em temperatura apropriada.

Classificação dos Meios de Cultura – Quanto ao Estado Físico

 Líquido: acondicionado em tubos de ensaio.
 Semi-Sólido: acondicionado em tubos de ensaio.
 Sólido: preparado adicionando-se ágar ao meio líquido e posterior colocação em tubos de ensaio ou placas de Petri, onde
o meio se solidifica.

Classificação dos Meios de Cultura – Quanto à Composição Química

 Meio Quimicamente Definido: aquele no qual todos os constituintes são conhecidos.
  Meio Complexo: aquele no qual a exata constituição não é conhecida e podem conter extratos moídos ou digeridos de
animais, peixes, leveduras e vegetais, que fornecem os nutrientes, as vitaminas e os minerais necessários.
 Meio Seletivo: Permite o crescimento de certos tipos de microrganismos e inibe o crescimento de outros
microrganismos. Ele contém inibidores, geralmente antibióticos, que tornam inviável o crescimento de certos
microrganismos, sem inibir o crescimento do microrganismo alvo.
 Meio Diferencial: Utilizado para diferenciar microrganismos ou grupos de microrganismos em um meio. A presença de
determinados corantes ou de produtos químicos nos meios produzirão certas alterações características ou padrões de
crescimento que são utilizados para a identificação ou a diferenciação de microrganismos.
 Meio Enriquecido: Caldo ou meio sólido contendo um grande suprimento de nutrientes que promove o crescimento dos
microrganismos fastidiosos. Geralmente são meios que foram suplementados com materiais altamente nutritivos.

Obtenção de Culturas Puras

 Método de Esgotamento por Estrias
- Uma alça de inoculação estéril é mergulhada dentro de uma cultura mista, que contém mais de um tipo de
microrganismo, e é semeada em estrias na superfície de um meio nutritivo. Ao longo da estria, as bactérias são
depositadas quando a alça entra em contato com o meio. As últimas células depositadas na alça são afastadas o
suficiente para crescer em colônias isoladas. Essas colônias podem ser repicadas com uma alça de inoculação e
transferidas para um tubo de ensaio com meio nutritivo para a obtenção de uma cultura pura contendo somente um
tipo de bactéria.
- O método de esgotamento por estrias funciona bem quando o organismo a ser isolado está presente em grande
número em relação à população total. Contudo, quando o micro-organismo a ser isolado está presente em um número
muito pequeno, sua quantidade pode ser aumentada por enriquecimento seletivo antes do isolamento com o método de
esgotamento por estrias.

|5| CRESCIMENTO DE CULTURAS BACTERIANAS

Reprodução Bacteriana
As bactérias normalmente se reproduzem por fissão binária:

Fases do Crescimento
Quando algumas bactérias são inoculadas em um meio líquido de crescimento e a população é contada em intervalos regulares, é
possível representar graficamente a curva de crescimento bacteriano, que mostra o crescimento das células em função do tempo.

 Fase Lag: A população microbiana passa por um período de intensa atividade metabólica, envolvendo principalmente a
síntese de enzimas e várias moléculas. Sendo assim, não há reprodução, pois elas não se reproduzem imediatamente em
um novo meio.
 Fase Log: A fase log é o momento de maior atividade metabólica, sendo o preferido para fins industriais, pois o produto
precisa ser produzido de maneira eficiente.
 Fase Estacionária: A velocidade de reprodução se reduz, o número de mortes microbianas é equivalente ao número de
células novas, e a população se estabiliza. A causa da interrupção do crescimento exponencial não é sempre clara,
podendo ser o esgotamento dos nutrientes, o acúmulo de resíduos e mudanças no pH.
 Fase de Morte Celular: O número de mortes ultrapassa o número de células novas formadas, e a população entra na fase
de morte ou declínio logarítmico. Essa fase continua até que a população tenha diminuído para uma pequena fração da
população da fase anterior ou morre totalmente. Algumas espécies passam por toda a sequência de fases em somente
poucos dias; outras mantêm algumas células sobreviventes indefinidamente.
 Controle de Crescimento Microbiano
Porque controlar o crescimento microbiano?
 Prevenção e controle de infecção hospitalar (inclui antissepsia);
 Limpeza e desinfecção de materiais hospitalares;
 Controle de qualidade em indústrias (alimentos, medicamentos, cosméticos, água, etc);
 Laboratórios de pesquisa;
 Laboratório de Análises Clínicas;
 Preparo de alimentos.

|1| TERMOLOGIA

 Limpeza: Remoção mecânica da sujeira; Retira os compostos que poderiam ser usados como nutrientes pelos
microrganismos;
 Desinfecção: Processo de eliminação das formas vegetativas de praticamente todos os microrganismos patogênicos de
superfícies inertes (não garante a eliminação de todos os microrganismos, nem endósporos);
 Antissepsia: Desinfecção em tecidos vivos;
 Degerminação: Remoção de microrganismos de uma área limitada (ex.: antes de aplicar injeção);
 Sanitização: Tratamento que reduz a contagem microbiana de utensílios alimentares a níveis seguros de saúde pública;
 Esterilização: Destruição de todas as formas de vida microbiana (incluindo os vírus);
 Agente anti-séptico: Agente antimicrobiano que visa a destruição de microrganismos patogênicos em tecidos vivos (baixa
toxicidade para células eucarióticas);
 Agentes bactericida, fungicida e viricida: Matam bactérias, fungos e vírus, respectivamente;
 Agentes bacteriostático, fungistático e viriostático: Inibem o crescimento de bactérias, fungos e vírus, respectivamente;
 Sepse: Indica contaminação bacteriana;
 Assepsia: Ausência de contaminação significativa;
 Esterilização comercial: Tratamento de calor suficiente para matar os endósporos de Clostridium botulinum nos alimentos
enlatados.

|2| FATORES QUE INFLUENCIAM A EFETIVIDADE DOS ANTIMICROBIANOS

 O número de Microrganismos: Quanto ↑ o número, ↑ tempo para eliminar toda a população;
 Influências Ambientais: Presença de matéria orgânica pode inibir a ação de antimicrobianos químicos;
 Tempo de Exposição: Antimicrobiano químico requer ↑ tempo para eliminar endósporos, por exemplo;
 Características Microbianas: Se a bactéria é Gram + ou Gram –, micobactérias, vírus...

|3| AGENTES DE CONTROLE MICROBIANO

Ao selecionar o agente de controle microbiano devem-se levar em consideração os efeitos desses agentes sobre outras coisas
além dos microrganismos.

 Agentes Físicos: Alteram a permeabilidade da parede celular ou membrana citoplasmática;

 Agentes Químicos: Causam danos às proteínas e ácidos nucléicos.