CENTRO UNIVERSITÁRIO SÃO LUCAS

CURSO DE AGRONOMIA
DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA APLICADA AS CIENCIAS AGRARIAS
PROFESSOR Marcos Pedroza

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO

OBSERVAÇÃO DA COLORAÇÃO DE BACTERIAS GRAM

Elen Cristina Kruguel Tavares

Ji-Paraná, 05 de março de 2020
 1. Introdução:

Coloração de Gram é uma técnica de coloração para

diferenciação de microrganismos através das cores, para serem
observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em
homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram,
por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias, após serem
tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas.  
A técnica de Gram é fundamental para a taxonomia e identificação das
bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em
laboratórios de análises clínicas e microbiologia.

2. Objetivo:

Observar e diferenciar bactérias Gram positivas e Gram negativas

através do método de coloração Gram.

3. Material e Métodos:

i. Alça de platina
ii. Lâmina de vidro
iii. Água destilada
iv. Cristal violeta
v. Álcool absoluto
vi. Lugol
vii. Fucsina fenicada
viii. Papel toalha

Com uma amostra de cada cultura, foi feito um esfregaço no centro de

uma lâmina de vidro com auxílio da alça de platina. Depois a lâmina foi
passada pela face oposta ao esfregaço sobre o fogo para melhor fixação, pois
esse processo retira toda a agua da bactéria. Foi gotejada a solução de cristal
violeta de maneira a cobrir todo o esfregaço e deixou-se corar por um minuto; o
reagente violeta penetrará a parede de ambas bactérias. Após, lavou-se a
lamina com água destilada para retirar todo excesso do cristal. Depois foi
gotejada sobre os esfregaços a solução de lugol e, que penetrará a membrana
celular e citoplasma que acontecerá a fixação do cristal, deixado reagir durante
um minuto. Com a lâmina inclinada, foi aplicado álcool absoluto de forma a
lavar o resíduo de corante. Depois a lâmina foi lavada com água destilada para
retirar excesso dos reagentes. Em seguida, foi gotejada a fucsina fenicada para
percebermos o contraste entre as bactérias Gram positivas e Gram negativas.
Após um minuto, a solução foi lavada com agua destilada. Com auxílio do
papel toalha, retirou-se o excesso da água. As bactérias que tiverem a
característica irão formar cristais violeta em seu interior e se diferenciarão das
demais pela coloração mais acentuada. Depois de seca, a lâmina foi levada e
posicionada ao microscópio e, de início ajustada com a objetiva de 10x e
posteriormente com a objetiva 100x.

4. Resultados:
 O resultado obtido foi:
I. A Pseudomonas é uma bactéria Gram negativa (fig 1).
II. A Staphylococcus é uma bactéria Gram positiva (fig 2).

5. Conclusão:

Figura 1 Bactéria Gram Negativa

Figura 2 Bactéria Gram Positiva