Investigações clínicas orais

https://doi.org/10.1007/s00784-019-03147-w

ARTIGO ORIGINAL

Um novo método para a colheita de fibrina concentrado rico em plaquetas (PRF-C) com um
aumento de 10 vezes nas plaquetas e leucócitos rendimentos

Richard J. Miron 1,2 & Jihua Chai 1 & Peng Zhang 1 & Yuqing Li 1 & Yunxiao Wang 1 &
Carlos Fernando de Almeida Barros Mourão 3 & Anton Sculean 2 & Masako Fujioka Kobayashi 4 & Yufeng Zhang 1,5

Recebidos: 10 de setembro de 2019 / Accepted: 06 de novembro de 2019

# Springer-Verlag GmbH Germany, parte da Springer Nature 2019

Abstrato
Contexto e objectivos plaquetas líquido rico fibrina (PRF, muitas vezes referido como PRF injectável) tem sido utilizada como uma formulação injectável de PRF que é capaz de

estimular a regeneração de tecidos. O nosso grupo de pesquisa descobriu recentemente que seguindo protocolos padrão L-PRF (2700 RPM, durante 12 minutos), um aumento maciço

em plaquetas e leucócitos foi observado directamente dentro da camada de buffycoat directamente acima da camada de células vermelhas do sangue. O objectivo deste estudo foi

desenvolver uma técnica nova colheita para isolar PRF líquido directamente a partir desta camada buffy coat e para comparar esta técnica com a norma i-PRF.

materiais e métodos Os protocolos padrão i-PRF alta força-g L-PRF e da força-g baixo foram utilizados para as camadas de sangue separados. Acima da camada corpúsculo de sangue

vermelho, sequencial 100- μ L camadas de plasma foram colhidas (12 camadas no total, ou seja, de 1,2 ml, o que representa o volume total de i-PRF), e 3 camadas (3 × 100 μ L) foram colhidas

a partir da camada de células vermelhas do sangue para quantificar as células sanguíneas. Cada camada aquosa foi, em seguida, enviado para análise da contagem sanguínea completa

(CBC), e os números de células foram quantificados incluindo as células vermelhas do sangue, leucócitos, neutrófilos, linfócitos, monócitos e plaquetas. A PRF líquido que foi recolhido

directamente a partir da camada buffycoat seguindo protocolos L-PRF foi referido como PRF concentrado (C-PRF).

Resultados O protocolo de i-PRF tipicamente produziu um aumento de 2 a 3 vezes nas plaquetas e um aumento de l.5-vezes na concentração de leucócitos a partir da camada de plasma de 1

a 1,2 mL em comparação com as concentrações de linha de base no sangue total. Embora quase não há células foram encontrados na primeira camada de 4 ml de L-PRF, uma acumulação

maciça de plaquetas e leucócitos foi encontrada directamente dentro da camada buffy coat demonstrando concentrações extremamente elevadas de células neste 0,3 - 0,5 mL (camada

aumenta ~ 20 vezes). Por isso, proposto a colheita desta camada 0,3- e 0,5-ml directamente acima da camada de corpúsculos de glóbulos vermelhos como líquido de C-PRF. Em geral, o

i-PRF foi capaz de aumentar o número de plaquetas por ~ 250%, ao passo que um 1200 - aumento de 1700% em números de plaquetas pode ser facilmente conseguida por meio da colheita

desta 0,3 - 0,5 ml de C-PRF (concentrações totais de plaquetas de> 2000 - 3000 × 10 9 células / L).

Conclusão Embora os protocolos de i-PRF convencionais aumentar o rendimento de plaquetas por 2-3 vezes e rendimento de leucócitos em 50%, que convincentemente demonstrada a

capacidade de plaquetas concentrado e leucócitos mais de 10 vezes por meio da colheita a 0,3 - 0,5 ml de C-PRF dentro da camada leucocitia seguindo protocolos L-PRF.

Relevância clinica Estudos anteriores demonstraram apenas um pequeno aumento em concentrações de plaquetas e de leucócitos em i-PRF. O presente estudo descreve uma

técnica de recolha de novo com mais um aumento de 10 vezes nas plaquetas e leucócitos que pode ser ainda utilizado para a regeneração dos tecidos.

Palavras-chave Fibrina. plaquetas sanguíneas .Wound cura. fibrina rico em plaquetas

Richard J. Miron e Jihua Chai contribuíram igualmente para este trabalho.

2 Departamento de Periodontia da Universidade de Berna, Berna, Suíça

* Richard J. Miron
richard.miron@zmk.unibe.ch 3 Departamento de Cirurgia Oral, Faculdade de Odontologia, Universidade Federal Fluminense

Universidade, Niterói, Rio de Janeiro, Brasil

1 A Base de Dados de Laboratório Key State Breeding da ciência básica de 4 Departamento de Cirurgia Maxilofacial, Inselspital, da Universidade de Berna,

Estomatologia (Hubei-MOST) & Key Laboratório de Biomedicina Ministério Oral da Berna, Suíça
Educação, Escola e Hospital de Estomatologia, Universidade de Wuhan, Wuhan, China 5 Departamento de Implantologia Dentária, Escola e Hospital de

Estomatologia, Universidade de Wuhan, Wuhan, China


Introdução
concentrados de plaquetas têm sido utilizados em odontologia e medicina por mais
de três décadas, devido à sua capacidade de liberar doses supra-fisiológicas de
fatores de crescimento autólogos [ 1 ,
2 ]. -Plasma rico em plaquetas (PRP) foi desenvolvido inicialmente para uso em odontologia
regenerativa, mas seu uso também é comum em cirurgia maxilo-facial, cirurgia ortopédica e
medicina estética devido à sua capacidade de estimular rapidamente neoangiogênese
tecido [ 3 - 7 ]. protocolos apropriados utilizando PRP envolvem tipicamente a utilização de
anticoagulantes e elevadas forças g de glóbulos camada selectivamente com base na
densidade. Devido a estas elevadas forças-g, uma camada pobre em plaquetas superior
(acelulares) é tipicamente produzido dentro da camada superior, seguida por uma camada
rica em plaquetas (buffy coat; camada do meio), e camada de uma célula de sangue
vermelho inferior (corpúsculo) . Uma vez que os anticoagulantes são utilizados, as camadas
celulares são separados, sem medo de coagulação, e ciclos de centrifugação típicos variam
tipicamente from15min a 1 h. Apesar do sucesso do PRP, várias preocupações foram
levantadas devido ao seu uso de anticoagulantes que têm sido mostrados para
negativamente a regeneração dos tecidos impacto [ 3 , 8 , 9 ].
fibrina rico em plaquetas (PRF), foi, por conseguinte, desenvolvido com o
objectivo de eliminar os anticoagulantes [ 10 ]. Como resultado, os ciclos de
centrifugação são tipicamente muito mais curto. A seguir à centrifugação, uma matriz
de fibrina tridimensional é produzido que pode servir como um andaime para
engenharia de tecidos diversos procedimentos médicos que exigem tanto soft- ou
difíceis de regeneração de tecidos [ 11 - 13 ]. Só em odontologia, PRF tem sido utilizada
para o tratamento de cavidades de extracção [ 14 - 17 ], [recessões gengivais 18 - 20 ], O Todos os pacientes incluídos foram sistemicamente saudável, não-fumantes, e não
fechamento da ferida palatino [ 21 - 23 ], A regeneração de defeitos periodontais [ 24 ], E
os tecidos gengivais hiperplásicas [ 25 ]. Em outras áreas médicas, PRF tem sido
utilizada para a gestão bem sucedida de difícil de curar úlceras de perna, incluindo
úlceras de pé diabético, úlceras venosas e úlceras crônicas de perna [ 26 ]. As
vantagens incluem relatados de cura mais rápido, aumentos na angiogénese, os
custos mais baixos (quando comparado ao PRP), e biocompatibilidade imune
completa [ 27 - 30 ].
Através da utilização de ciclos de centrifugação ainda mais curtos e
bymodifying os tubos de centrifugação, o nosso grupo demonstrou as vantagens
de uma PRF injectável (denominado i-PRF) em comparação com PRP [ 31 ]. Além
disso, uma série de estudos tenham ainda demonstrado que a actividade celular
de i-PRF é superior à de PRP [ 31 - 34 ].
Recentemente, o nosso grupo de pesquisa desenvolvida uma nova técnica para
quantificar as células dentro de concentrados de plaquetas seguintes centrifugação
pipetando sequencialmente camadas de 1 ml de sangue após centrifugação [ 35 ]. Este
método de quantificação altamente eficaz revela a concentração exacta / localização de
várias células sanguíneas seguintes centrifugação e permite uma investigação directa de
protocolos PRF com base na composição final de células. Surpreendentemente, seguindo
protocolos de L-PRF, um grande número de células acumuladas no interior da camada
leucocitia directamente acima da camada de células vermelhas do sangue (amostra de 1
ml), com muito poucas células
Clin Invest oral
encontrados em todo o coágulo superior PRF [ 35 ]. Por conseguinte, destinada ao
endereço duas questões específicas no presente estudo: (1) O que foi o volume total
acima da camada corpúsculo vermelhas do sangue e no interior da camada leucocitia
em que a maioria destas células estavam localizados; e (2) o que concentração final de
plaquetas e leucócitos podem ser recolhidas por recolha selectivamente as células
encontradas dentro desta “ buffy-coat ” regionwhen comparado com os protocolos i-PRF
convencionais.
materiais e métodos
Preparação de PRF
Amostras de sangue foram coletadas com o consentimento informado dos seis
doadores voluntários. Todos os procedimentos realizados neste estudo envolvendo
participantes humanos foram realizados de acordo com os padrões éticos do comitê
de pesquisa institucional e / ou nacional e com os 1964 Declaração de Helsinki e
suas alterações posteriores ou padrões éticos comparáveis. Sem avaliação interna
placa (IRB) foi necessário para este estudo porque as amostras de humanos não
foram identificados [ 31 ]. Os factores que afectam a fibrina formação e estrutura do
coágulo incluem factores genéticos, factores adquiridos (tais como uma
concentração anormal de trombina e do factor XIII no plasma, o fluxo de sangue, a
activação de plaquetas, o stress oxidativo, hiperglicemia, hiper-homocisteinemia,
medicamentos, e fumo de cigarro), e outros parâmetros (tais como microgravidade,
pH, temperatura, agentes redutores, e a concentração de iões de cloreto e cálcio) [ 36
]. Foram excluídos todos os pacientes com qualquer uma das condições acima.
tomar qualquer medicação.
Os seguintes dois dispositivos de centrifugação, foram utilizadas neste estudo:
um dispositivo IntraSpin (IntraLock, Boca Raton, Florida, EUA) e um Duo Quattro
(Processo para a PRF, Nice, França). Dois protocolos separados foram testados.
No dispositivo Intraspin, um ~ 700 RCF-max (~ 400 RCF-coágulo) durante 12 min
foi utilizado para o protocolo de L-PRF, ao passo que um ~ 60 RCF-max durante 3
minutos foi utilizada para o protocolo i-PRF.
Cada um dos seis voluntários doado três tubos de recolha de sangue (10 ml) para
tubos de plástico cada um dos dois grupos de teste, para um total de seis tubos por
participante. Além disso, uma amostra de sangue foi recolhido para controlo Quantify
sangue total. tubos plásticos hidrofóbicos específicos (Chixin Biotech, Wuhan, China)
foram utilizados para prevenir a coagulação durante a centrifugação.
Para um participante, um adicional de dois tubos foram colhidas para demonstrar a
localização geral de células seguintes centrifugação usando a L-PRF e i-PRF
protocolos, utilizando o método sequencial de pipetagem 1 mL anteriormente proposto [ 35
] (Apresentada nas Figs. 1a e 2 ). Uma vez que observamos anteriormente uma
acumulação maciça das células no interior da camada leucocitia numa gama de
amostra de 1 ml seguindo o protocolo L-PRF, o nosso objectivo de investigar
precisamente o volume no qual estas células estavam localizados
Clin Invest oral

Figura 1 ( a) Ilustração
demonstrando o novo método proposto para
tipos de células Quantificar seguintes
centrifugação. Actualmente, uma limitação
relatada com métodos de quantificação
padrão é que o sangue total é comparado
com a concentração total de plasma após
centrifugação. Isso, no entanto, não dá a
devida

representação da localização das células após a

centrifugação. Através da utilização da técnica
proposta neste estudo e sequencialmente
pipetando um volume de 1 ml a partir da camada
superior para baixo em movimento, é possível
realizar a análise CBC em cada uma das 10
amostras e para determinar com precisão a
localização precisa de cada tipo de células após
centrifugação com vários protocolos. Uma
camada (neste caso, a camada 5) vai conter
algum plasma amarelo e células vermelhas do
sangue. Este é normalmente a localização da
camada leucocitia, onde uma maior
concentração de plaquetas / leucócitos está
tipicamente localizado. ( b) A concentração dos
tipos de células em cada uma das camadas a
partir de 1 ml para baixo para a amostra de 10 ml
utilizando o protocolo LPRF (2700 RPM, durante
12 minutos; ~ 700 g). A maioria das plaquetas,
leucócitos e monócitos acumulados na quinta
camada da camada leucocitia. As primeiras
quatro camadas desta camada de plasma foram
tipicamente desprovida de todas as células.
Reproduzido com permissão [ 35 ]

dentro desta camada de 1 mL directamente por cima da camada de corpúsculos de glóbulos 100- sequencial μ L camadas. Para protocolos de L-PRF, um tubo foi utilizado para a

vermelhos. Assim, desenvolvemos uma abordagem metodológica romance em que 100- μ L colheita de 0,5 mL de concentrado PRF (definida como a

camadas sequenciais foram pipetados a partir de ~ 1,2 a 1,5 ml camadas acima da camada
leucocitia, até atingir a camada de glóbulos vermelhos (Figs. 3a e 4a , Descrito como a
camada de +1 e + 12). Além disso, três camadas foram colhidas a partir da camada de
células vermelhas do sangue para determinar o número de células em esta camada (Figs. 3a e
4a , Descrito como o - 1 a - 3 camada). Cada um destes 100- μ camadas L foi enviada para
análise CBC.
O segundo tubo a partir de cada grupo foi utilizado para determinar a
concentração final a partir da versão de líquido a camada de plasma amarelo
i-PRF e comparados com os da média
0,5 mL de camada leucocitia directamente acima da de glóbulos vermelhos do
sangue). Esta camada é referida como PRF concentrado (C-PRF) ao longo deste
artigo, porque foi colhido a partir da camada buffy-coat concentrada. De modo
semelhante, 0,3 ml de C-PRF líquido foi colhida a partir desta camada bem. A
colheita de sangue para a 100- μ L análise sequencial foi realizada com
anticoagulantes para permitir amostras de sangue para ser enviada para análise
CBC, durante o qual o número total de leucócitos, eritrócitos, plaquetas, neutróf
ilos, linfócitos e monócitos foi determinada em cada amostra. Depois disso, os
dados de cada uma das amostras
 Clin Invest oral

Figura 2 A concentração dos tipos de células

em cada uma das camadas a partir de 1 ml para
baixo para a amostra de 10 mililitros do
protocolo i-PRF injectável (800 RPM durante 3
min; ~ 60 g). Houve muito pouca mudança na
plaquetas ou leucócitos acumulação utilizando
este protocolo de centrifugação. No entanto, um
ligeiro aumento em plaquetas e leucócitos foi
observado na parte superior 1 -

2-camadas mL em comparação com o

controle

foram apresentados graficamente usando GraphPad Prism 8.0 software e
foram analisados ​com ANOVA one-way (GraphPad Software, Inc., La Jolla,
CA, EUA).
Dentro desta camada, um aumento geral de 3 a 5 vezes na concentração de células
foi observada em comparação com o que em todo o controle amostra de sangue
(Fig. 1b ). Em contraste, o protocolo i-PRF demonstrou um aumento médio de 1,5 a
2,5 vezes em vários tipos de células em camadas 1 - 2 (fig. 2 ). Uma vez que o
protocolo de i-PRF gerada uma maior concentração de plaquetas e leucócitos do

Resultados que o protocolo de L-PRF (porque o volume de i-PRF era ~ 1 -

Comparação de separação celular após 1,3 ml vs a 4,5 - 5 mL de volume em L-PRF), que, por conseguinte, procuraram precisamente

centrifugação de L-PRF e i-PRF Recolher a camada no interior da camada leucocitia do protocolo L-PRF (zona 5), ​onde um

aumento massivo no número de células foi observada directamente no interior da camada

Em primeiro lugar, um novo método para investigar tipos de células após a leucocitia.

centrifugação, utilizando um mL de pipetagem sequenciais foi usada para investigar

quais camadas continha os vários tipos de células após a centrifugação, tanto de pipetagem seqüencial de 100- μ L camadas em i-PRF e L-PRF
alta (L-PRF) e g forças baixa (i-PRF) (Figs. 1b e 2 ). Curiosamente, no protocolo de
L-PRF, a maioria das plaquetas e leucócitos (monócitos e linfócitos) acumuladas na
camada 5, representando a transição de camada leucocitia entre a camada de A primeira questão que o nosso grupo destinada ao endereço foi o volume total do

plasma e camada de células vermelhas do sangue. líquido rico em células acima da camada leucocitia na qual as plaquetas e leucócitos

foram localizados na sequência da L-PRF

Clin Invest oral

A Fig. 3 ( a) Uma segunda ilustração metodológico

que descreve a técnica de colheita sequencial.

Resumidamente, tal como a maioria das culas

foram encontrados a acumular-se dentro de 1 mL

da camada leucocitia, procurou-se investigar com

precisão o volume total de líquido (ml) acima da

camada leucocitia na qual as células foram

concentradas. Seguindo o protocolo L-PRF, a parte

superior 3,5 mL foi retirado, seguido por sequencial

100- μ G pipetagem camada e análise CBC. Três

camadas da camada de células vermelhas do

sangue foram também colhidas. b A concentração

dos tipos de células em cada uma das 12 camadas

(100 μ L cada) acima da camada de células

vermelhas do sangue a seguir o protocolo de

L-PRF. Houve um grande aumento do número de

plaquetas (aproximadamente um aumento de 20

vezes especificamente na camada buffy coat, entre

as camadas de células de sangue vermelhas e

amarelas). Curiosamente, todas as células

pareciam se acumular dentro de 3 - 5 camadas (300 - 500

μ G) acima do corpúsculo vermelho sangue

protocolo. Para resolver esta questão, o primeiro 3,5 ml da camada de plasma superior a camada de células de glóbulos vermelhos contido (Fig. 3a ). Além disso, 300

foi removida (camada acelular) a partir do tubo (deixando 1,0 - 1,5 ml de amostra acima da μ L da camada corpúsculo vermelhas do sangue também foi colhido e quantificada em

camada de células vermelhas do sangue). Depois disso, um método de pipetagem 100- μ L camadas sequenciais (Fig. 3a ). Em contraste, toda a camada de i-PRF foi

sequenciais foi uma vez mais utilizada de novo a partir do topo para baixo com recolhido a partir da parte superior 100- μ A camada L e foi pipetada sequencialmente

sequencial 100- μ camadas L de determinar com precisão as camadas acima howmany até que todas as camadas de plasma foram recolhidas (Fig. 4a ). Mais uma vez, 300 μ eu

era
 Clin Invest oral

A Fig. 4 ( a) Uma segunda ilustração metodológico

que descreve a técnica de colheita sequencial.

Semelhante a L-PRF, todas as camadas de plasma

do protocolo IPRF também foram colhidas em 100- μ l

camadas sequenciais. Três camadas de células

vermelhas do sangue (100 μ L cada) foram também

recolhidos. ( b) A concentração de tipos de células

em cada camada from100- μ L camadas em i-PRF e

três camadas na camada de células vermelhas. Um

2 típico - Observou-se aumento de 3 vezes nas

plaquetas, enquanto que apenas um ligeiro

aumento nos leucócitos e outros tipos de células foi

observada directamente na camada de separação

entre o plasma e as camadas de células vermelhas

do sangue

sequencialmente pipetados em 100- μ L camadas da camada corpúsculo de sangue vermelho. linha de base de 220 a ~ 550 ~ 10 × 9 plaquetas / l) em plaquetas em todos os 13

camadas (1,3 mL, ou seja, 100- treze μ L amostras) foi observada, com apenas um ligeiro

Figura 4b demonstra os resultados do sequencial 100- μ L camadas do aumento na concentração de leucócitos.

protocolo i-PRF. Na camada 13, houve um aumento de 3 vezes (de 5 a 15 × 10 9
células / L) em leucócitos directamente na camada buffy-coat 13 (representada
pelas setas). Houve também um aumento de 5 a 6 vezes em monócitos.
Seguindo o protocolo i-PRF, um aumento de 2,5 vezes (a partir de um
Em contraste, a Fig. 3b mostra os resultados do sequencial 100- μ L camadas
acima da camada vermelha do sangue que foram encontrados seguindo o protocolo
L-PRF. Interessantemente, quase todas as células acumuladas dentro de três
camadas (ou seja, 300 μ G) acima do corpúsculo vermelhas do sangue (Fig. 3b ). A
maioria
Clin Invest oral

tabela 1 Propriedades das células sanguíneas

Surpreendentemente, dentro desta camada, um grande aumento do número de
plaquetas, foi observado monócitos, leucócitos e linfócitos. Por exemplo, um
As plaquetas WBC RBC
aumento 225-6000 × 10 9 plaquetas / L foi observado, o que representa um
aumento> 25 vezes na concentração de plaquetas em comparação com que no Densidade (kg / m 3) 1040 - 1065 1055 - 1085 1095 - 1100

início do estudo; este especificamente ocorreu dentro de 100 μ G acima da camada Frequência (1 / μ EU) 200.000 5000 5.000.000

de células vermelhas do sangue. superfície ( μ m 2) 28 330 140

Raio ( μ m) 11,5 5 - 7,5 4

Com base nestes resultados, assumimos que um 0.3- para Volume ( μ m 3) 14 200 92
camada de 0,5 mL de concentrado PRF (C-PRF) poderiam ser Forma disco irregular Esférico bicôncavo
preferencialmente recolhidas dentro desta camada leucocitia directamente
acima da camada de glóbulos vermelhos (Fig. 5a ). Figura 5b demonstra que
enquanto o protocolo i-PRF aumenta os números de leucócitos 1,23 vezes, foi Discussão
observado um aumento marcado e significativo da concentração de leucócitos
(4.62- e 7,34-de dobragem aumentos) em ambos os 0,5 ml e Desde aproximadamente 2014 - 2016, foi acreditado o conceito de centrifugao a
baixa velocidade (também referido como o LSCC) para isolar o número máximo

0,3 ml C-PRF, respectivamente. Ainda mais surpreendentemente, enquanto de células e a maioria dos factores de crescimento após a centrifugação, devido à

protocolos i-PRF tipicamente têm sido mostrados para aumentar o rendimento das força-g relativa reduzida aplicada durante a centrifugao (isto é, menos células

plaquetas entre 200 e 300%, os protocolos C-PRF massivamente rendimentos foram empurrado em direcção o fundo dos tubos de centrifugação). Ao investigar

aumentados de plaquetas 1,138% e 1,687%, respectivamente (Fig. 5c ). Também foi full-sized membranas PRF ou camadas de plasma, isto provou ser verdadeiro e foi

observada uma tendência semelhante para monócitos (Fig. 5d ). O total depois confirmado em numerosos estudos desde [ 37 - 40 ]. Além disso, o nosso grupo

calculando a média dos dados de seis pacientes estão resumidas na Tabela 1 . demonstrou ainda que a centrifugação, que utilizou as velocidades de
centrifugação inferiores

A Fig. 5 ( a) Método proposto para colheita concentrada PRF (C-PRF). Seguindo protocolos
L-PRF, visto que todas as células acumuladas em 300 - 500
μ G acima da camada de células vermelhas, foi proposto para recolher 0,3 - 0,5 ml do líquido de C-PRF
directamente acima da junção célula vermelha para se obter uma camada de plasma líquido com
plaquetas e leucócitos altamente concentradas. ( b - d)
Concentração de ( b) leucócitos, ( c) plaquetas, e ( d) monócitos
após centrifugação, utilizando protocolos de i-PRF versus a recolha de
0,3 - 0,5 mL de PRF concentrado (C-PRF). Enquanto i-PRF pode tipicamente atingir um aumento de 1,2 a
2,5 vezes em vários tipos de células seguintes centrifugação, até um aumento de 15 vezes na
concentração de plaquetas pode ser conseguida com o C-PRF. (* Representa uma diferença
significativa em comparação com i-PRF; ** representa significativamente mais elevada do que todos os
grupos, p < 0,05)

(Agora denominado PRF avançado) libertado níveis mais elevados de factores de
crescimento total, como PDGF, TGF- β 1, VEGF, EGF, IGF e, em comparação com o
controlo G-PRF [ 41 , 42 ].
Os resultados do presente estudo representam uma mudança na nossa
compreensão da PRF líquido e a capacidade de plaquetas concentrado e leucócitos para
utilização injectável líquida. Anteriormente, o trabalho comparando i-PRF e PRP
conduzido pelo nosso grupo encontrados níveis semelhantes de liberação do fator de
crescimento entre os dois protocolos, com pouca compreensão dos resultados
anteriormente observados. Os resultados do presente estudo representam um avanço na
compreensão das diferenças entre relatados PRP, i-PRF, e C-PRF no que diz respeito
aos rendimentos de plaquetas. Muitos médicos acreditam que os rendimentos de
plaquetas para cima de 1500 × 10 9 células / L são ideais para efeitos de regeneração,
ainda protocolos i-PRF foram tipicamente encontrado para células isoladas na gama de
concentrações de 500 - 600 × 10 9 células / L, e muitos clínicos considerados esta
concentração muito baixa. Uma das principais vantagens da i-PRF é que, devido à sua
falta de anticoagulantes, a coagulação ocorre logo após a injecção ou durante a mistura
com biomateriais, assim, favorecendo uma libertação mais longa e mais gradual de
factores de crescimento ao longo do tempo em comparação com PRP [ 41 ]. No entanto,
um estudo comparativo entre i-PRF e PRP demonstrou libertação de factor de
crescimento muito semelhante ao longo do tempo, com alguns factores de crescimento a
ser libertado mais em i-PRF, ao passo que outros foram libertados em níveis mais
elevados em PRP [ 31 ].
Ao longo dos últimos meses, uma metodologia de pipetagem sequenciais foi
desenvolvido para quantificar com precisão o efeito de protocolos de centrifugação
na separação de camadas de células. Este método foi desenvolvido para identificar
com precisão a localização de células seguindo vários protocolos de centrifugação.
Enquanto protocolos APRF, que envolvem centrifugação a 200 RCFmax (em
oposição a 700, em protocolos de L-PRF), têm sido mostrados para mais
uniformemente distribua em plaquetas superiores as camadas 4 mL de plasma [ 35 ],
Foi interessante notar que uma acumulação massiva de leucócitos e plaquetas foi
observada directamente acima da camada de células vermelhas do sangue a seguir
protocolos L-PRF. Nós portanto destinado a investigar (1) na qual o volume que a
maioria destas células estavam localizados e (2) o que era a concentração máxima
de leucócitos e plaquetas em PRF que poderiam ser obtidos por meio da colheita
esta região específica de células concentradas (C-PRF) .
Uma das descobertas surpreendentes foi concentrada como as várias células estavam na
camada leucocitia directamente acima da camada de células vermelhas do sangue a seguir
protocolos L-PRF. Em todas as amostras, as células foram rotineiramente situado dentro de 0,3 -
0,5 mL acima do corpúsculo de células vermelhas do sangue, com a grande maioria localizado
0,1 -
0,2 mL dentro da camada leucocitia acima da camada de células vermelhas do sangue.
Notavelmente, um grande número de leucócitos e monócitos foram localizados no
primeiro 100- μ G camada de células vermelhas do sangue, e isso será interessante
determinar se este 100 μ L de células vermelhas do sangue deve ser recolhido e incluído
dentro formulações líquido-PRF, devido à sua grande incorporação de vários glóbulos
brancos. Em contraste, embora a L-PRF tem também sido referido
Clin Invest oral
Como “ leucócito ” e rico em plaquetas de fibrina (ou seja, L-PRF), é interessante notar
que a concentração de leucócitos em L-PRF é realmente menor do que o que é
encontrado no sangue total padrão [ 35 ]. Isto significa que, seguindo o protocolo de
centrifugação para produzir coágulos L-PRF, um decréscimo efectivo no número de
leucócitos é observado [ 35 ]. O protocolo com a maior capacidade de leucócitos
concentrado (i-PRF) só aumenta a sua concentração por cerca de 50%. No âmbito
do presente estudo, foi demonstrado pela primeira vez que uma capacidade de
leucócitos de concentrado entre 500 e 750%, em comparação com as concentrações
no sangue total, utilizando o método de colheita C-PRF descrito neste estudo. Nós
também demonstraram a capacidade de plaquetas concentrado mais de 15 vezes
comparativamente à linha de base, enquanto que os protocolos de i-PRF única
concentrar as plaquetas por dois - 3fold (Tabela 1 ; FIG. 5 ). Para o melhor destes
autores ' conhecimento, esta é a concentração mais elevada de ambos os plaquetas
e leucócitos observada até à data em qualquer preparação PRF.
Um fenômeno interessante esquerda para investigar a possibilidade de uma maior
otimização do protocolo C-PRF. Em geral, os protocolos de L-PRF são conhecidos
para concentrar a maioria dos leucócitos e outras células brancas do sangue (maiores
do que 50%) na camada de células vermelhas do sangue (não incluído na camada de
PRF). Portanto, seria interessante avaliar ainda mais se um melhor rendimento de
plaquetas e leucócitos podem ser obtidas por posterior modificação dos protocolos de
centrifugação. Um outro desenvolvimento recente interessante foi a melhoria na
capacidade de camadas separadas de células (com base na densidade) utilizando
uma centrifugadora horizontal que resultou em um aumento de até 4 vezes, a
concentração de células [ 35 ]. Por conseguinte, é necessário futuros estudos
comparando centrifugação horizontal contra centrifugação de ângulo fixo para a
colheita de C-PRF. Em resumo, os resultados do presente estudo relatam o
desenvolvimento de um novo método para colher a porção enriquecida (mais
plaquetas / leucócitos) directamente a partir da camada de líquido directamente acima
da camada de células vermelhas do sangue no interior da camada leucocitia para a
recolha de um injectável líquida PRF altamente rico em plaquetas e leucócitos.
Conclusão
O presente estudo descreve uma nova técnica para investigar a acumulação de
células directamente acima da camada de células vermelhas do sangue no interior da
camada leucocitia. Amassive acumulação de leucócitos, plaquetas, andmonocytes foi
localizado specificallywithin esta camada de 0,3- a 0,5 ml quando se utiliza protocolos
de alta força g (L-PRF). Embora os protocolos de i-PRF convencionais são capazes de
concentrado de leucócitos até 1,5 vezes e plaquetas dois - 3 vezes, demonstrou-se que
havia um> 500% de aumento em leucócitos e a> 1500% de aumento do número de
plaquetas para a utilização deste novo concentrada PRF técnica de recolha (C-PRF).
Outros estudos pré-clínicos e clínicos comparativos são agora necessários para
examinar o potencial regenerador adicionado de C-PRF comparado com os protocolos
i-PRF convencionais.
Clin Invest oral
informações sobre financiamento Este trabalho foi apoiado por fundos do Programa de Key R
& D Nacional da China (2018YFC1105300 para Yufeng Zhang).
Conformidade com as normas éticas
Conflito de interesses Os autores declaram que não têm nenhum conflito de interesse.
Aprovação ética Sem aprovação ética foi necessário para este estudo, as amostras humanas não
foram identificados.
consentimento informado Para este estudo, consentimento informado por escrito foram fornecidas para conduzir
as experiências descritas antes para a colheita de sangue.
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