Pontifícia Universidade Católica de Goiás

Graduação em Biomedicina
1º Período / Matutino
Relatório de Bioquímica e Biofísica
Profª: Landia Fernandes de Paiva Soares
Acadêmico: Edivan de Souza Lima

HIDRÓLISE ENZIMÁTICA DO AMIDO – INFLUÊNCIA DA

TEMPERATURA E DO PH SOBRE AS REAÇÕES CATALISADAS
POR ENZIMAS

Para cada enzima existe um pH ótimo e uma temperatura ótima em que a velocidade da
reação é máxima. Para a amilase salivar esta temperatura é de 37°C e o pH é de 6,8. Dentro
dessas condições o amido é hidrolisado, pela ação da amilase salivar, até a condição de
dextrinas. Fora dessas condições a hidrólise pode ser inibida ou retardada por esses fatores
influenciando na velocidade da reação enzimática.

O objetivo desta aula é identificar se a enzima amilase salivar perde sua atividade biológica
sobre o substrato através do aumento de temperatura e mudança brusca de pH.

Na técnica utilizamos o lugol, uma substância a base de iodo. Esse iodo detecta a ligação
glicosídica do amido. Na presença desta ligação, a reação dá positiva com a ligação 1-4 α
glicosídica, apresentando coloração azul.

Procedimento Técnico

1.Colher em um béquer aproximadamente 5,0 ml de saliva.

2.Diluir a saliva acrescentando aproximadamente 30 ml de água destilada.
3.Tomar quatro tubos de ensaio, limpos e secos e identificá-los (A, B, C e D).

Materiais: pipetas; amido 0,4g/l; tubo de ensaio; micropipetas; saliva; ácido clorídrico
concentrado; lugol; tampão fosfato pH 6,8..

Reagente A B C D
1 Saliva diluída (2,0ml) X X X
2 Fervura (5’) X
3 Ácido clorídrico concentrado (5 gotas) X
4 Tampão fosfato pH 6,8 (1,0 ml) X X X X
5 Solução de amido a 1g% (3ml) X X X X
6 Homogeneizar os tubos X X X X
7 Incubar em banho-maria a 37°C (5’) X X X X
8 Lugol (2 gotas) X X X X

Resultados observados:

Tubos Reagentes Conclusão

A Tampão fosfato pH 6,8 + Solução de amido a 1g% + Lugol Positivo (azul)
 B Saliva diluída + Tampão fosfato pH 6,8 + Solução de amido a 1g% Positivo (azul)
+ Lugol (obs.: Fervura)
C Saliva diluída + Ácido clorídrico + Tampão fosfato pH 6,8 + Positivo (azul)
Solução de amido a 1g% + Lugol
D Saliva diluída + Tampão fosfato pH 6,8 + Solução de amido a 1g% Negativo
+ Lugol

O lugol age na ligação glicosídica da amilase, com isso:

Tubo A:

Resultado positivo, pois não tínhamos a presença da enzima amilase salivar para quebrar o
amido, com isso o lugol detectou a ligação glicosídica facilmente.

Tubo B:

Resultado positivo, pois mesmo com a presença da enzima amilase salivar, a solução foi
aquecida em uma temperatura acima de 37°C, desnaturando a enzima. Com isso, enzimas
desnaturadas perdem a conformação do seu sítio de ligação enzima/substrato. Assim o amido
não é quebrado, apresentado a ligação glicosídica para o lugol se ligar.

Tubo C:

Resultado positivo, nele obtivemos a presença da enzima amilase salivar, mas foi
acrescentado uma solução de ácido clorídrico concentrado, causando uma desnaturação
enzimática e posteriormente a perda da conformação do sítio ativo da ligação
enzima/substrato. Assim o amido não é quebrado, apresentado a ligação glicosídica para o
lugol se ligar.

Tubo D:

Reação negativa, pois neste pusemos a enzima amilase salivar em uma temperatura e pH
ótimos para sua reação catalítica. Com isso, a enzima quebrou o amido em dextrinas, não
apresentando após essa quebra a ligação glicosídica para o iodo do lugol detectar.