ARTIGO original ISSN 2238-1589

PERFIL BIOQUÍMICO DOS ANIMAIS DE LABORATÓRIO DO

BIOTÉRIO DA FACULDADE DE MEDICINA DA USP
Marilda Osti Spinelli1, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy1, Milena Coutinho da Motta1,
Robison José da Cruz1, Mara de Souza Junqueira1, Juliana Bortolatto1

Objetivo: 1 Diretoria Técnica de Apoio ao Ensino e à

RESUMO

Pesquisa da Faculdade de Medicina da

Universidade de São Paulo

Autor para correspondência:

Ma- Marilda Osti Spinelli
teriais e Métodos marilda@biot.fm.usp.br

Recebido para publicação: 10/09/2011

Aceito para publicação: 24/11/2011

-
Resultados:

Conclusão: -

Palavras-chave:

1 Introdução -

-
4.

-
1. -
-

.
-
.

76 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 76-81, jan./fev./mar. 2012

 Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Milena Coutinho da Motta, Robison José da Cruz, Mara de Souza Junqueira, Juliana Bortolatto

7.

-
-

. .

2.3 Análise Bioquímica

-
pool

- -

-
-

2 material e método

2.1 Animais -
-

hamsters
3 resultados

ad libitum.

4 discussão
2.2 Coleta de Sangue

µ -

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 76-81, jan./fev./mar. 2012 77

PERFIL BIOQUÍMICO DOS ANIMAIS DE LABORATÓRIO DO BIOTÉRIO DA FACULDADE DE MEDICINA DA USP

- -
17

Tabela 1 -

Linhagem C57BI/6 Balb/c Swiss

Biotério CB FMUSP CB FMUSP CB FMUSP
Parâmetros Sexo
Idade > 10 sem > 10 sem > 10 sem > 10 sem > 10 sem > 10 sem
Unidade Resultados

78 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 76-81, jan./fev./mar. 2012

 Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Milena Coutinho da Motta, Robison José da Cruz, Mara de Souza Junqueira, Juliana Bortolatto

- -

Tabela 2 -

Linhagem Wistar Golden New Zeland

Biotério CB FMUSP CB FMUSP CB FMUSP
Rato
Sexo
Idade > 10 sem > 10 sem > 10 sem > 10 sem > 10 sem > 10 sem
Parâmetros Unidade Resultados

--- --- --- ---

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 76-81, jan./fev./mar. 2012 79

PERFIL BIOQUÍMICO DOS ANIMAIS DE LABORATÓRIO DO BIOTÉRIO DA FACULDADE DE MEDICINA DA USP

11 10 14
14 20
5 10.
10 11.

5.

11 e
14
17.

- -
-
10
21 22 -
-

Biochemical profile of laboratory animals of the

Medical School USP

Objective
ABSTRACT

Materials and Methods:

80 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 76-81, jan./fev./mar. 2012

 Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Milena Coutinho da Motta, Robison José da Cruz, Mara de Souza Junqueira, Juliana Bortolatto

tometer (Cobas Mira) and Bioclin kits, and Labtest Biosystems. Results: Presented by
the means and standard errors of the concentrations of analytes in plasma, grouped by

ABSTRACT
sex. Conclusion: We determined the biochemical profiles of mice, rats, hamsters and
rabbits conventional Biotery FMUSP Center, offering a valuable tool for researchers to
analyze their experimental results. Certified No. 251/11 CEUA HCFMUSP.

Keywords: Animals, Laboratory. Mice. Rats. Hamsters. Rabitts. Biochemistry. Animal

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RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 76-81, jan./fev./mar. 2012 81

 BREVE COMUNICAÇÃO ISSN 2238-1589

PRESERVAÇÃO QUÍMICA DE CADÁVERES DE SUÍNOS: reduzir e

reciclar sem perder a qualidade no ensino
Sueli Blanes Damy1, Ruth Neves dos Santos2, Roberto de Souza Camargo1, Luiz Alberto Soares1,
Junko Takano Osaka1, Cláudio Antonio Vidotti1, José Pinhata Otoch1

Este artigo tem como objetivo descrever a preocupação da Faculdade de Medicina da 1 Disciplina de Técnica Cirúrgica e Cirurgia
RESUMO

Universidade de São Paulo em reduzir o número de animais usados no ensino. De- Experimental FMUSP/LIM 26 - Laboratório
zesseis suínos, adquiridos de fornecedor comercial, com aproximadamente 20 quilos, de Investigação Médica.
receberam pré-anestésico, intramuscularmente, cloridrato de cetamina (15 mg/kg) e 2 Centro de Saúde Samuel Barnsley Pessoa
(CSEB), FMUSP
cloridrato de xilazina (2mg/kg); indução com Tiopental sódico (10 mg/kg) endovenoso,
veia marginal da orelha, utilizando cateter 22G; manutenção pela infusão de 100 ml
Autor para correspondência:
Sueli Blanes Damy
Intubação com sonda endotraqueal, com auxílio de laringoscópio, permanecendo E-mail: damy@usp.br
conectados ao respirador. Tiveram cateterizadas a carótida, para infusão de solução
Recebido para publicação:
potássio após aprofundamento do plano anestésico, para eutanásia. Quando o líquido Aceito para publicação:

ml/kg). Paralelamente, foram utilizados conjuntos torácicos: laringe, traqueia, pulmões,

coração; e conjuntos digestivos, desde a porção do esôfago torácico até o ílio. Tanto
as carcaças inteiras como os conjuntos foram mantidos a -20ºC e descongeladas, à
temperatura ambiente, 48 horas antes de serem utilizadas. As carcaças mantiveram
características físicas. Os modelos alternativos aos animais apresentados foram
utilizados com sucesso em inúmeras práticas em treinamento das habilidades dos
graduandos e residentes da FMUSP, e outras áreas para estudos prévios de cirurgias
experimentais, permitindo a redução, a reciclagem e a reutilização de carcaças suínas
º 0828/08 HCFMUSP.

Palavras-chave: Suínos. Embalsamamento. Ensino. Técnica Cirúrgica.

graduandos em cirurgia e ortopedia, bem como

1 Introdução
A evolução dos conhecimentos anatômicos está
intimamente ligada à técnica de preservação de
cadáver, que desde o século 17, com a injeção de
cera e turpentina em vísceras, até as mais moder-
1, con-
tribuiu para o aperfeiçoamento do entendimento
das estruturas anatômicas e suas interrelações2.
A possibilidade de utilizar cadáveres de animais
conservados para os primeiros treinamentos de
para testar hipóteses de aperfeiçoamento de téc-
nicas e estudos de dissecções para reconstrução
foram utilizados pioneiramente pela Faculdade
de Medicina Veterinária da Universidade de São
Paulo, com o aproveitamento de cães mortos por
causas naturais3.
Na docência da medicina, particularmente
naquelas disciplinas em que é de absoluta neces-
sidade o exercício prático, ou seja, nas quais o
objetivo não se resume ao aprendizado e sim ao
aprimoramento, bem como nas áreas em que se

82 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 82-86, jan./fev./mar. 2012

 Sueli Blanes Damy, Ruth Neves dos Santos, Roberto de Souza Camargo, Luiz Alberto Soares, Junko Takano Osaka, Cláudio Antonio Vidotti, José Pinhata Otoch

desenvolvem habilidades psicomotoras, o uso de

animais sempre foi muito intenso. Intubação com sonda endotraqueal, com auxílio
Na Faculdade de Medicina da USP, a Discipli- de laringoscópio, permanecendo conectados ao
na de Técnica Cirúrgica e Cirurgia Experimental
- Procedeu-se à abertura das vias de acesso e
aproveitar animais utilizados em alguns projetos
de pesquisa ou mesmo em cirurgias não invasivas
praticadas pelos residentes. Entretanto, preocupa-
da com a redução do número de animais neces-
sários para aulas práticas, lançou mão da técnica
de preservação química e física, buscando assim, -
otimizar o uso dos animais.
Em cirurgia, cadáveres tratados com produtos
- -
bilidade e plasticidade dos tecidos são utilizados
para ensino e treinamento de pós-graduandos em
abordagens laparoscópicas, artroscópicas e cirur-
gias torácicas e abdominais, com a vantagem de
manter os pulmões ventilados durante a cirurgia . Os suínos foram mantidos sob ventilação me-
Dessa forma, este artigo tem como objetivo des- cânica durante todo o processo de perfusão, para
crever nossa experiência na redução do número impedir acúmulo de líquido nos pulmões, realizada
de suínos através do uso de peças embalsamadas. -

a solução drenada tornava-se clara, procedeu-se à

2 MATERIAL E MÉTODOS

Todos os procedimentos descritos abaixo foram

realizados segundo princípios éticos internacionais
e aprovados pela Comissão de ética para análise

nº

2.1 Embalsamamento do suíno inteiro

Dezesseis suínos, adquiridos de fornecedor

receberam pré-anestésico, intramuscularmente,

todo o período cirúrgico recebendo infusão de so-

Figura 1 - Aspecto da abertura das vias de acesso na
carótida e de drenagem na jugular externa
Cálculo para velocidade de infusão de Tiopental

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 82-86, jan./fev./mar. 2012 83

PRESERVAÇÃO QUÍMICA DE CADÁVERES DE SUÍNOS: reduzir e reciclar sem perder a qualidade no ensino
3,
fechando-se o
cateter conectado à jugular e infundindo-se vaga-
Os animais foram acondicionados em sacos
plásticos brancos, após higienização,
com uma etiqueta registrada com a data, proce-
dimento cirúrgico a que foram submetidos, nome
e o descongelamento na temperatura ambiente
3 RESULTADOS
As alterações de pele, articulação, musculatura
quanto à consistência, elasticidade e cor.
As carcaças embalsamadas inteiras possibilita-
ram estudos pilotos em cirurgias experimentais nas
áreas de ortopedia, otorrinolaringologia, cabeça e
pescoço. O conjunto torácico, conectado a um res-
pirador mecânico através de um tubo introduzido
na traqueia, permitiu o treinamento de anastomo-
Figura 2 - Cirurgia experimental da coluna vertebral em carcaça de suíno embalsamada (foto esquerda); conjunto torácico com
84 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 82-86, jan./fev./mar. 2012
O conjunto digestivo, acondicionado em caixa de
polipropileno, foi utilizado para treinamento de
colicistectomia, gastroenteroanastomose, gastrec-
tomia, piloroplastia, anastomose de alças intesti-
nais, pancreatectomia e esplenectomia tanto para
cirurgias tradicionais como para videocirurgias,
com detalhes relatados em outro estudo*.
4 DISCUSSÃO
Os dilemas bioéticos sobre o uso de animais
em ensino e pesquisa têm originado diversas
iniciativas para criação de modelos substitutivos.
modelo biológico e a relevância do estudo devem
ser aspectos fundamentais para a decisão de um
pesquisador realizar um projeto utilizando animais.
A Disciplina de Técnica Cirúrgica e Cirurgia Ex-
o uso de animais por alternativas que estão sendo
validadas e incorporadas às aulas práticas**, com
As carcaças de suínos embalsamadas represen-
taram o início das pesquisas para adequação às exi-
gências éticas internacionais de reduzir o número
de animais, utilizando técnicas mais avançadas
para treinamento dos alunos, que seria traduzido
por tempos cirúrgicos menores, minimizando os
traumas e a recuperação pós-operatória, dando aos
 Sueli Blanes Damy, Ruth Neves dos Santos, Roberto de Souza Camargo, Luiz Alberto Soares, Junko Takano Osaka, Cláudio Antonio Vidotti, José Pinhata Otoch
Nos resultados do presente estudo, as carcaças
dos suínos embalsamadas e congeladas apresen-
consistência semelhante à encontrada no animal
músculos, a cor próxima à da musculatura do animal
vivo, conservando os contornos e a arquitetura. As
vísceras mantiveram as características físicas. Re-
sultados semelhantes foram obtidos por Silva et al3,
utilizando a mesma solução preservativa em cães.
No ensino, a carcaça embalsamada permitiu a
sua utilização em práticas de sutura de pele e de
tendão, sendo que as vísceras formaram um inte-
ressante modelo não somente quando utilizadas
na carcaça inteira, como quando os conjuntos
digestivos e respiratórios foram acondicionados
em caixas de polipropileno para treinamento de
colicistectomia, gastroenteroanastomose, gas-
trectomia, piloroplastia, anastomose de alças in-
testinais, pancreatectomia, esplenectomia, sutura
pulmonar e sutura cardíaca, tanto para cirurgias
tradicionais como para videocirurgias.
O treinamento de alunos em cirurgias tradi-
cionais não possui muitas alternativas, devido ao
uso de modelos inanimados não permitir a prática
de hemostasia. No entanto, o modelo apresenta-
do neste trabalho permite o aprendizado e o seu
controle pelos professores, dando oportunidade
de repetições das tarefas, proposição de procedi-
mentos mais complexos e abrangentes, permitindo
criar práticas deliberadas para o desenvolvimento
de habilidades5.
Toda inovação na área médica deve ser rigo-
rosamente avaliada. Alguns autores relatam a
considerado, acompanhando-se o desenvolvimen-
to de habilidades dos alunos desde o terceiro ano,
passando pelo quinto ano até a residência médica.
Dessa forma, o uso de carcaça embalsamada de
suínos no ensino de técnicas cirúrgicas representa
não somente um avanço para o aperfeiçoamento
dos alunos de medicina nessa área, como uma eco-
nomia substancial para a instituição, uma vez que
o mesmo modelo pode ser utilizado em diferentes
procedimentos.
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 82-86, jan./fev./mar. 2012 85
Em cirurgia experimental, os suínos foram tes-
tados em inúmeras áreas, como em transplantes de
órgãos procedimentos de parada cardíaca e ressus-
citação , existindo grande interesse pelas diferentes
especialidades em sua utilização. A carcaça de suíno
embalsamado serviu tanto para o estudo da anato-
mia comparada, como para experimentos pilotos
de implantação de novas técnicas, trazendo ainda a
possibilidade de o pesquisador ter sempre disponí-
vel o modelo para o desenvolvimento de seu projeto
5 conclusão
As carcaças preservadas quimicamente permiti-
ram a reutilização por quatro semanas, em rotinas
de congelamentos e descongelamentos, sem per­
e cor, representando uma economia oito vezes
inferior aos custos da utilização de animais vivos
para cada procedimento.
A alternativa aos animais vivos apresentada
foi utilizada com sucesso em inúmeras práticas
em treinamento das habilidades dos graduandos
e residentes da FMUSP, bem como permitiram o
compartilhamento com outras áreas para estudos
prévios de cirurgias experimentais, contribuindo
com a redução do número de animais vivos, a re-
ciclagem pela reutilização de carcaças de suínos
agradecimentos
Agradecemos ao técnico Ourisval Santana pela
colaboração nas diferentes etapas para realização
deste trabalho.
-
gia - encaminhado para publicação.
uso de animais no ensino de técnica cirúrgica -
encaminhado para publicação.
 PRESERVAÇÃO QUÍMICA DE CADÁVERES DE SUÍNOS: reduzir e reciclar sem perder a qualidade no ensino

PRESERVATION OF CORPSES OF CHEMICAL PIGS: reduce and

recycle without loss of quality in teaching

ABSTRACT
Paulo, to reduce the number of animals used in teaching. Sixteen pigs, purchased

drainage. Euthanasia was performed with anesthesia overdose and supersaturated

thoracic esophagus to the ilium. Both sets as whole carcasses were kept at -20°C and
-

in numerous practices in skills training of graduate students and residents of FMUSP,

CEUA 0828/08 HCFMUSP.

Keywords: Swine. Embalming. Teaching. Surgical Techniques.

REFERêNCias

Saudi Gen.

The embalmed cadaver vs the fresh transplantation of the uterus in the

cadaver. domestic pig (Sus scrofa

Dec 3.

AACM. Preservation of cadavers for analogical transfer and problem

surgical technique training. Vet Surg. solving. Acad Med.

7. Osman M. Positive transfer and

86 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 82-86, jan./fev./mar. 2012

BREVE COMUNICAÇÃO ISSN 2238-1589

Detecção de Mycoplasma pulmonis no trato respiratório

superior em roedores através da técnica de PCR
Milena Coutinho da Motta1, Jussimara Félix Sartorelli1, Marilda Osti Spinelli1,
Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy1, Mara de Souza Junqueira1, Robison José da Cruz1,
Flávio Martins Ferreira1, Selmo Vicente Bernardino da Silva1, Leandro Iannuzzi1, Juliana Bortolatto1

1 Diretoria Técnica de Apoio ao Ensino e à Objetivo: apresentar a técnica de PCR para a detecção de Mycoplasma pulmonis das

RESUMO
Pesquisa da Faculdade de Medicina da colônias convencionais de camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e
Universidade de São Paulo heterogênica Swiss, e ratos Wistar. Material e Métodos: A extração do DNA foi realizada
a partir de fragmento de traqueia, utilizando para a reação de PCR os oligonucleotí-
Autor para correspondência:
Milena Coutinho da Motta
deos iniciadores F: 5’- CA TGT TCT TGG CCA CCTAT - 3’ e R:5’ - ATC CCT CAA TGA
E-mail: milena@biot.fm.usp.br
separados por eletroforese em gel de agarose. A visualização e fotodocumentação
Recebido para publicação: 09/08/2011 Resultados e conclusão
Aceito para publicação: 18/12/2011

de Mycoplasma pulmonis º

Palavras-chave: Camundongos. Ratos. PCR. Mycoplasma pulmonis.

de fusão, os componentes do micoplasma são

1 Introdução
Os micoplasmas fazem parte de um grande
grupo de microorganismos procariotos com mais
de 190 espécies1, distinguindo-se dos demais por
ser a menor bactéria autoreplicante2, apresentar
diminuto genoma3 e ausência de parede celular.
liberados dentro da célula hospedeira e afetam
as funções normais da célula, devido à ação de
enzimas bacterianas, dentre as quais as nucleases4,
que podem degradar o DNA da célula hospedeira.
Os micoplasmas interagem com os fagócitos
mononucleares, estimulando a síntese de citocinas
5, excretam peróxido de hidrogê-

Devido a sua limitada capacidade de biossíntese, nio e radicais superóxidos, possibilitando lesões na
algumas espécies são parasitas de hospedeiros e membrana das células hospedeiras onde se aderem
2.

Permanece ainda a dúvida se micoplasmas
aderem à superfície das células ou as invadem2. A
falta de parede celular permite um contato íntimo
entre a membrana do micoplasma e a membrana
da célula hospedeira e, em condições apropriadas,
pode ocorrer fusão celular1. Durante o processo
nos resultados experimentais quando presente nos
animais de laboratório6.
Por serem ubíquos no reino animal, poten-
cialmente os mamíferos, aves, répteis, anfíbios
e peixes podem ser portadores de espécies de
2. Os biotérios conven-

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 87-91, jan./fev./mar. 2012 87

Detecção de Mycoplasmapulmonisno trato respiratório superior em roedores através da técnica de PCR
cionais apresentam alta prevalência desse agente
infeccioso7,8 usualmente na forma subclínica,
porém quando os animais encontram condições
ambientais desfavoráveis, tais como aumento
do hospedeiro, estresse experimental, por exem-
plo, podem desenvolver sintomas clínicos, como
pneumonia e otite8.
O diagnóstico da infecção por Mycoplasma pul-
monis pode ser realizado utilizando métodos so-
rológicos como teste imunoenzimático (ELISA) e
in vitro é um processo demorado e esses métodos
sorológicos frequentemente dão resultados incor-
retos devido às reações cruzadas entre diferentes
espécies de micoplasmas. São exames de baixa
sensibilidade, pois, no início da infecção ou em
a sua detecção. A reação em cadeia de polimerase
o resultado não será comprometido se a infecção
estiver em um estágio precoce ou se o animal for
6.
Com o intuito de ampliar as informações no
contexto do monitoramento sanitário de animais
de laboratório, o Laboratório de Biologia Mole-
Medicina da Universidade de São Paulo implantou
a técnica de PCR para a detecção do Mycoplasma
pulmonis, devido a sua alta sensibilidade e espe-
9.
Dessa forma, o objetivo deste trabalho é apre-
sentar a técnica de PCR para a detecção do Myco-
plasma pulmonis das colônias convencionais de
camundongos das linhagens isogênicas C57BL/6,
BALB/c e heterogênica Swiss e de ratos Wistar.
2 material e métodos
2.1 Animais
sexos, com idade entre 10 e 11 semanas, das
88 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 87-91, jan./fev./mar. 2012
linhagens isogênicas C57BL/6, BALB/c e da
linhagem heterogênica Swiss e de ratos Wistar,
-
de de Medicina da Universidade de São Paulo,
criados em condições convencionais, protegidos
com barreiras sanitárias, no período de janeiro de
2008 a dezembro de 2010, dentro do programa de
Controle Sanitário da unidade. Todos os procedi-
mentos foram realizados de acordo com princí-
pios internacionais de ética e bem-estar animal e
aprovados pelo Comitê de Ética do complexo HC/
º 251/11.
2.2 Coleta de Amostras
Os animais foram eutanasiados em câmara de
CO2 e, após a assepsia com etanol 70%, em ca-
a retirada de um fragmento de aproximadamente
0,5 mm. O material coletado foi colocado em
um microtubo e mantido a -80ºC até o momento
do uso.
2.3 Extração de DNA
A extração do DNA foi realizada como descrito
por Ausubel10 -
sumidamente, a solução de lise é preparada com
os seguintes reagentes Tris-HCL 0,5M; NaCl 5M;
SDS 10%; EDTA 0,5M; Proteinase K, diferen-
ciando da original que utiliza fenol/clorofórmio/
álcool isoamílico.
2.4 Reações em cadeia da polimerase (PCR)
Para a reação de PCR, foram utilizados 100
ng de DNA; 0,2 mMdNTPsmix (desoxiribonu-
cleotídeos trifosfato); 1X tampão da Taq DNA
polimerase; 2,0 mM MgCl2; 1U (unidade) de
AmpliTaq DNA polimerase Platinum; água milli-
1 reação de 20 mL e 0,5 µmol/L de cada oligo-
152 pb. Os primers foram desenhados utilizando
 Milena Coutinho da Motta, Jussimara Félix Sartorelli, Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Mara de Souza Junqueira, Robison José
da Cruz, Flávio Martins Ferreira, Selmo Vicente Bernardino da Silva, Leandro Iannuzzi, Juliana Bortolatto

o Primer 3 Software frodo.wi.mit.edu/primer3 e

www.ncbi.nlm.nih.gov/blast, sendo que a região

do genoma bacteriano inicia-se em 96732 e ter-
mina em 96883.

minutos; 35 ciclos de 95ºC por 1 minuto, 58ºC por

Figura 1 - Mycoplasma pulmonis em diferentes

4ºC. Os produtos obtidos pela PCR foram separa- linhagens de camundongos e rato, analisados
dos por eletroforese em gel de agarose (Invitrogen
ultrapura) 1,5% contendo brometo de etídio. O
marcador de peso molecular utilizado foi 50 pb
DNA Ladder (Invitrogen).
A visualização e fotodocumentação foi reali-
zada sob luz ultravioleta no BioDoc-It Imaging
System - UVP.

de animais positivos para Mycoplasma pulmonis

detectados por meio da utilização da técnica de
La-
boratório de Controle de Qualidade Sanitária do uma amostra por espécie/linhagem por canaleta.
CEMIB/UNICAMP, bem como controles negati- O M.pulmonis foi detectado em camundongos
vos (água e reagentes). isogênicos C57BL/6, BALB/c e heterogênicos
Swiss, nas percentagens de 38, 24 e 14, respec-
tivamente, e em ratos Wistar, na percentagem de
52 (Tabela 1).
3 resultados

Os resultados obtidos pela PCR espécie-especí-

Mycoplasma pulmonis em
camundongos e ratos mantidos em sistema con-
vencional podem ser observados na tabela 1. Os
produtos da PCR para Mycoplasma pulmonis estão
4 discussão
A infecção por M. pulmonis afeta de maneira
distinta as espécies de roedores de laboratório.

Tabela 1 -

Espécie Camundongos Rato

Linhagem C57BL/6 BALB/c Swiss Wistar
Positivos/Total de animais
% positivos 38

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 87-91, jan./fev./mar. 2012 89

Detecção de Mycoplasmapulmonisno trato respiratório superior em roedores através da técnica de PCR
Penetrando pelas vias respiratórias, inicia a
colo­nização pela cavidade nasal, com provável
progressão para ouvido médio, laringe, traqueia
e pulmões. A evolução depende de fatores do
hospedeiro (idade, linhagem e estado sanitário) e
do ambiente, como altas concentrações de amô-
bacteriana. Algumas linhagens de camundongos
são altamente resistentes, sendo geralmente as-
sintomática. Quando se manifesta clinicamente,
pode provocar a doença crônica respiratória, com
broncopneumonia aguda em combinação com
outras infecções pneumotrópicas ou fatores ex-
trínsecos. Em jovens, geralmente é inaparente. Em
ranger os dentes, dispneia, perda de peso, letargia,
pelos arrepiados, movimentos giratórios quando
suspensos pela cauda, cabeça inclinada, perda de
redor dos orifícios nasais e dos olhos. Pode ainda
provocar infecção no trato genital com redução
da fertilidade11.
Neste estudo, a pesquisa de Mycoplasma pul-
monis possibilitou a detecção de camundongos
positivos, sendo 38% da linhagem C57BL/6,
24% da linhagem BALB/c e 14% do heterogênico
Swiss; 52% de ratos Wistar.
Pesquisas sorológicas realizadas em outros
países registraram uma prevalência de 69% de
M. pulmonis em camundongos de diferentes
biotérios na Coreia, em levantamento feito de
1999 a 200312. Em Taiwan, mais que 20% das
colônias de camundongos estavam contaminadas
em 200713.
controlado no Brasil, 57% de positividade M.
pulmonis em camundongos, isolados por cultu-
ra. Enquanto que o diagnóstico sorológico, por
ELISA, constatou 92% de positividade da mesma
colônia, mostrando que a sensibilidade do ELISA
foi maior do que a do isolamento por cultura14.
Em ratos, houve a constatação de 75% infec-
tados em biotérios da Coreia e 40% em biotérios
de Taiwan12,13. Na Europa Ocidental, M .pulmonis
foi o agente infeccioso mais prevalente em mais
de 100 colônias analisadas entre 2007 e 200815,16.
90 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 87-91, jan./fev./mar. 2012
foram detec- 17,
tadas 64,58% de amostras positivas de 240 ratos
Wistar convencionais, provenientes de 8 biotérios
diferentes.
recomenda 18,19
a triagem periódica dessa bactéria nas colônias de
camundongos e ratos. O diagnóstico de infecção
por micoplasma é geralmente realizada por de-
terminação sorológica ou isolamento por cultura.
Porém, no diagnóstico sorológico pode ocorrer
frequentemente reações cruzadas entre espécies,
enquanto, no cultivo, é muito demorado para al-
guns micoplasmas exigentes15. Sendo assim, no
foi implantada como rotina do programa de con-
trole sanitário a técnica de PCR para a detecção
de Mycoplasma pulmonis, por tratar-se de um
-
ção desse agente etiológico, além de apresentar
uma economia nos custos de aproximadamente
40%, quando comparado aos custos do teste de
ELISA, segundo a avaliação realizada em nosso
laboratório.
As diferentes taxas de contaminação encon-
tradas pelos diversos autores, provavelmente,
deve-se ao fato de as colônias convencionais
terem origens e manejo diversos, além de terem
sido detectados por diferentes métodos. Os re-
sultados apresentados neste artigo referem-se a
animais de laboratório mantidos há mais de 30
anos em condições convencionais, data do início
de Medicina da USP, com as barreiras sanitárias
sendo introduzidas ao longo dos anos.
5 conclusão
Os resultados deste estudo sugerem que o
emprego da técnica de PCR constitui uma ferra-
infecções por Mycoplasma pulmonis em colônias
de camundongos e ratos.
 Milena Coutinho da Motta, Jussimara Félix Sartorelli, Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Mara de Souza Junqueira, Robison José
da Cruz, Flávio Martins Ferreira, Selmo Vicente Bernardino da Silva, Leandro Iannuzzi, Juliana Bortolatto

Mycoplasma pulmonis detection in the rodents

respiratory tract by PCR

Objective: To introduce the PCR technique for detection of Mycoplasma pulmonis in

ABSTRACT
rats. Methods: DNA extraction was made from a fragment of the trachea, using the PCR
primers F: 5’-CA TCT TGG TGT CCA CCTAT - 3’ and R:5’ - ATC CCT CAA TGA GCT GGT

electrophoresis. The viewing and photo documentation were performed under ultravioleta
light. Results and Conclusion: The PCR allowed the detection of positive mice, 38% of

that the use of PCR technique was effective for the diagnosis of Mycoplasma pulmonis

Keywords: Mycoplasma pulmonis.

1. Rottem S. Interaction of growth in rat tracheal organ cultures rats. Braz J Microbiol. 2002

REFERêNCias
mycoplasmas with host cells. Physiol by ammonium chloride. Lab Anim Sci.
15.Kim DJ, Park JH, Seok, SH,
2. Razin S, Yogev D, Naot Y. 9. Veilleux C, Razin S, May LH. Cho, SA, Baek, MW, Lee, KH,
Molecular biology and pathogenicity Detection of Mycoplasma infection
of mycoplasmas. Microbiol Molec Biol of Mycoplasma pulmonis and M.
procedures in mycoplamology.

Academic Press; 1996. p. 431-8. 16. Mahler M, Kohl W. A sorological

“on being the right size”. Proc Natl Acad
4. Paddenberg R, Wulf S, Weber A,
Internucleosomal DNA fragmentation in
cultured cells under conditions reported
to induce apoptosis may be caused by
mycoplasma endonucleases. Eur J Cell
mycoplasmas and the immune system.
Mycoplasmal and rickettsial diseases.
SH, editors. The laboratory rat. New
7. Timenetsky J, De Lucca RR. Detection
of Mycoplasma pulmonis from rats and
mice of São Paulo/SP/Brazil. Lab Anim
8. Pinson DM, Schoeb TR, Lin SL.
Promotion of Mycoplasma pulmonis
Wiley; 1994. p. 221-3.
Press; 2000. p. 99-132.
12. Won YS, Jeong ES, Park HJ,
Lee CH, Nam KH, Kim HC, et al.
Microbiological contamination of
laboratory mice and rats in Korea
from 1999 to 2003. Exp Anim. 2006
13. Liang CT, Shih A, Chang YH,
Liu CW, Lee YT, Hsieh WC, et al.
Microbial contaminations of laboratory
mice and rats in Taiwan from 2004 to
2007. J Am Assoc Lab Anim Sci. 2009
14. Barreto ML, Nascimento ER,
of Mycoplasma pulmonis in laboratory
survey to evaluate contemporary
prevalence of viral agents and
Mycoplasma pulmonis in laboratory
mice and rats in western Europe. Lab
LM, Oliveira RC, Neto RL, Buzinhani
M, et al. Detection of Mycoplasma
pulmonis in laboratory rats and
technicians. Zoonoses Public Health.
18. Nicklas W. Recommendations
for the health monitoring of rodent
and rabbit colonies in breeding and
experimental units. Lab Anim. 2002
Van Herck H, Nicklas W, Rugaya Z, et
on Animal Health. Recommendations
for the health monitoring of mouse, rat,
hamster, gerbil, guineapig and rabbit
experimental units. Lab Anim. 1996

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 87-91, jan./fev./mar. 2012 91

 BREVE COMUNICAÇÃO ISSN 2238-1589

Redução do número de camundongos utilizados na

obtenção de formas infectantes de Trypanosoma cruzi
através de imunossupressão com ciclofosfamida
Gabriel Melo de Oliveira1

A infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi no Laboratório de Biologia Celular/ 1 Laboratório de Biologia Celular , Instituto
RESUMO

IOC é realizada através da obtenção da forma infectante (tripomastigotas sanguíneas) Oswaldo Cruz/FIOCRUZ, Rio de Janeiro
em camundongos. Em 2005, foram utilizados cerca de 250 animais por semana para
alcançar o volume de 70x106 parasitas/ml. De acordo com os princípios éticos descritos Autor para correspondência:
Gabriel Melo de Oliveira
E-mail: gmoliveira@ioc.fiocruz.br
protocolo de imunossupressão com ciclofosfamida. Nosso objetivo foi estabelecer um
protocolo para redução do número de camundongos utilizados, mantendo a quantidade de
Recebido para publicação: 30/06/2011
parasitas obtidos. A aplicação de 200 mg/kg de ciclofosfamida dois dias após a infecção Aceito para publicação: 28/11/2011
reduziu o número de animais por semana em até 76%, mantendo o pico de parasitemia

aplicação de novos protocolos que visem o bem-estar animal e principalmente a redução

do número de animais. Nossos resultados demonstram a redução de até 3.317 camun-
dongos por ano e a manutenção da quantidade das formas tripomastigotas infectantes
em 25 parasitas x 106

Palavras-chave: Trypanosoma cruzi. Ciclofosfamida. Ética. Camundongos.

1 Introdução animais foram direcionados para a manutenção e

obtenção de formas infectantes de T. cruzi
O Laboratório de Biologia Celular do Institu- -
to Oswaldo Cruz (LBC/IOC) é responsável por 6

número considerável de publicações de artigos

laboratório utiliza o modelo experimental camun-
dongo para o estudo de vários aspectos da infecção
pelo Trypanosoma cruzi
Os diversos ensaios realizados in vivo exigem a
manutenção semanal, bem como aquisição de
formas infectantes (tripomastigotas sanguineos)
de T. cruzi
total de animais utilizados em nosso laboratório
foi utilizado na infecção de outros camundongos
para ensaios in vivo ou em experimentos de cultura
de células (in vitro
O uso ético de animais em ensaios biomédicos
do uso desses animais para benefício próprio e
dos seres humanos1 ,o
conduta baseadas em escolhas morais feitas à luz

92 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 92-96, jan./fev./mar. 2012


feitas com consciência plena e total responsabili-
3 estudado por ser o protocolo estabelecido para
discute que questões éticas surgem em nossa vida
de desenvolvimento ético e humanitário das técni-
- IP e a imunossupressão foi induzida no segundo
de laboratório
Através dos resultados de trabalhos anteriores,
observamos que o uso de imunossupressores,
como a ciclofosfamida, na infecção pelo T. cruzi
parasitas
sistema imune de camundongos, dependendo da
dose e do tempo de administração8
tem como objetivo estabelecer um protocolo de
redução do número de camundongos utilizados
para a obtenção de formas infectantes de T. cruzi,
mantendo a quantidade de formas tripomastigotas
protocolo baseado na técnica de imunossupressão
por ciclofosfamida em camundongos utilizados
na manutenção e aquisição da forma infectante
do T. cruzi.
2 materiais e métodos
Neste trabalho utilizamos camundongos da
adultos, fornecidos pelo Centro de Criação de
animais foram mantidos em nosso laboratório con-
forme os padrões internacionais para as condições
ambientais e sanitárias
avaliados e autorizados sob a licença da Comissão
infectados pelo T. cruzi (cepa Y) com o inóculo
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 92-96, jan./fev./mar. 2012 93
Gabriel Melo de Oliveira
a obtenção e manutenção do parasita em nosso
-
tantes de T. cruzi, um grupo de camundongos foi
eutanasiado em câmara com ambiente saturado de
CO
grupo submetido à imunossupressão foi inoculado
ciclofosfamida (CY - Genuxal® -
circulantes por meio do método descrito por Pizzi
macrófagos peritoneais, realizada após a eutanásia
dos animais em câmara com ambiente saturado de
CO , foi coletada através de lavagem da cavidade
horas (h) as culturas foram lavadas e infectadas
com as formas tripomastigotas de T. cruzi numa
as culturas também foram lavadas para retirar os
-
T Student e
Mann-Whitney (não paramétrico) para determinar
p
de parasitas obtidos após imunossupressão por
camundongo em comparação com animais não
imunossuprimidos e a capacidade infectiva de
3 resultados
Inicialmente comparamos a cinética de parasite-
mia para os camundongos que receberam tratamen-
to de CY dois dias após a infecção (G1) e o grupo
Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Trypanosoma cruzi através de imunossupressão com ciclofosfamida

de animais que não receberam nenhum tratamento 6

Assim, para obter o número necessário de parasitas

alterou o modelo de infecção; ambos os grupos de-

de camundongos tratados com a CY, nenhuma

o número de camundongos versus número de para- os macrófagos infectados mostraram números se-
melhantes de parasitas internalizados, infectados
-
na, então, cada animal apresenta um rendimento p
= p=
p p=

Figura 1 – Cinética de parasitemia em camundongos tratados com Cy (G1) e não tratados (G2) durante o curso da infecção pelo
T. cruzi. A: Parasitemia entre os dias 5 e 15 B: Número médio de
parasitas sanguíneos no 7
(p p = 0,005)

Tabela 1 -

Categoria / ano 2005 2009

90 22
0.2 parasitas x 106/ ml 1.17 parasitas x 106 / ml
25 parasitas x 106 / ml 25 parasitas x 106 / ml
4.373 1.056

94 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 92-96, jan./fev./mar. 2012


Tabela 2 - Número de parasitas em macrófagos peritoneais
Categoria / ano
G1
G2
- para obtermos a quantidade média de parasitas
tigotas sanguíneos obtidos em nosso laboratório
foi realizada, utilizando o modelo experimental
T. cruzi (cepa
ml em cada animal (IP), observamos o pico de
de parasita exige um novo grupo de camundongos
opção para aumentar o número de parasitas era o
-
6 descreveram que o uso de CY modula
a intensidade da miocardite e da carga parasitária
e está diretamente relacionada à dosagem e aos
antes da infecção, apresentaram um pico de parasi-
temia semelhante entre os grupos tratados e os não
dpi
mostrou um aumento constante na parasitemia
em comparação aos animais que não foram imu-
nossuprimidos
no número de parasitas ocorreu durante o pico de
- visem ao bem-estar animal e principalmente à
dos parasitas internalizados nos macrófagos perito-
neais em ambos os grupos não mostraram diferença
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 92-96, jan./fev./mar. 2012 95
Gabriel Melo de Oliveira
24h 48h 72h
25.0 ± 1.2
15.9 ± 1.7 33.0 ± 3.4
da CY está diretamente relacionada com as células
4 discussão do sistema imunológico dos camundongos e não
interfere com a infectividade do parasita6
ml) por semana podemos usar aproximadamente
novo protocolo técnico para a obtenção de formas
infectantes do T. cruzi -
meio desse protocolo, mesmo com o aumento do
volume de ensaios e a necessidade de aumentar o
nosso objetivo é reduzir ainda mais o número de
animais utilizados na manutenção e aquisição de
formas infectantes de T. cruzi em camundongos,
usando uma passagem semanal em cultura de
-
mo, veremos o princípio ético de reduzir não só o
número de camundongos utilizados, mas também
5 conclusão
por ano e a manutenção da quantidade das formas
6/
 Redução do número de camundongos utilizados na obtenção de formas infectantes de Trypanosoma cruzi através de imunossupressão com ciclofosfamida

Reducing the number of mice used to obtain infective

forms of Trypanosoma cruzi by immunosuppression
with cyclophosphamide

Trypanosoma cruzi
ABSTRACT

Keywords: Trypanosoma cruzi.

REFERêNCias

drugs as a tool to explore

experimental acute and subacute

animais para o estudo in vivo da

96 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1,p. 92-96, jan./fev./mar. 2012

BREVE COMUNICAÇÃO ISSN 2238-1589

Triagem de Helicobacter spp em Fezes de Roedores de

Laboratório Através da Técnica de PCR
Milena Coutinho da Motta1, Jussimara FélixSartoreli1,
Marilda Osti Spinelli1, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy1,
Robison José da Cruz1, Juliana Bortolatto1

1 Diretoria Técnica de Apoio ao Ensino e à Este trabalho tem como objetivo otimizar a triagem da bactéria Helicobacter spp em

RESUMO
Pesquisa da Faculdade de Medicina da programa de controle sanitário de animais de laboratório, aplicando a técnica de PCR
Universidade de São Paulo (Polymerase Chain Reaction). Cinquenta amostras de fezes de cada linhagem ou es-
pécie: camundongo C57BL/6, BALB/c, Swiss; ratos Wistar e Hamster foram submetidas
Autor para correspondência:
à reação de PCR, utilizando os oligonucleotídeos iniciadores F: 5’ CTATGACGGGTA-
Milena Coutinho da Motta
E-mail: milena@biot.fm.usp.br
pb. Separados por eletroforese em gel de agarose, os produtos foram visualizados e
Recebido para publicação: 09/09/2011 fotodocumentados sob luz ultravioleta.A técnica de PCR possibilitou a detecção de
Aceito para publicação: 18/12/2011 camundongos positivos, sendo 18% da linhagem C57BL/6, 52% da linhagem BALB/c,
62% da linhagem Swiss. Em ratos da linhagem Wistar, foram detectados 28% de positi-

Helicobacter spp em colônias de animais de laboratório.

º

Palavras-chave: Camundongos. Ratos. Hamsters. PCR. Helicobacter spp.

1 Introdução 3-6.

-
O gênero Helicobacter compreende mais de gos, Helicobacter hepaticus e Helicobacter bilis
trinta espécies de bactérias gram negativas, mi- ,

- Helicobacter bilis
ros1,2 - Helicobacter muridarium -
cies de Helicobacter estão associadas a doenças H. cinaedi e espécies do
3. H.rappini

- 6,7.

Em ratos as principais espécies associadas são

- H. troglontum, H. muridarum, H. hepaticus, H.
bilis H. cholecystus e H. cienae-
8-10
di .

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 97-101, jan./fev./mar. 2012 97

Triagem de Helicobacterspp em Fezes de Roedores de Laboratório Através da Técnica de PCR

- -
- 13

11

8, µ
-
12, necessitando de
2 -
-
Helicobacter spp, para o programa µ
µ

2 material e método

- -

-
-
de animais positivos para Helicobacter spp detec-

º -

3 resultados

-
Helicobacter spp
-

Helicobacter
spp

98 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 97-101, jan./fev./mar. 2012

 Milena Coutinho da Motta, Jussimara FélixSartoreli, Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Robison José da Cruz, Juliana Bortolatto

Figura 1 - Expressão de Helicobacter spp em diferentes maioria das bactérias do gênero Helicobacter em
linhagens de camundongos, ratos e hamsters 6. A técnica empre-
analisados por PCR. O DNA foi extraído das fezes

Canaleta 1- marcador de peso molecular 100

pb; 2- Controle positivo; 3- Controle negativo;
As bactérias do gênero Helicobacter apre-
5- Amostra positiva de camundongo BALB/c;
6- Amostra positiva de camundongo Swiss;
res convencionais
7- Amostra positiva de Rato Wistar; 8- Amostra
positiva de hamster Golden
6

cionais.
Helicobacter spp - Helicobacter spp
-

detectaram Helicobacter spp

ratos convencionais.
4 discussão
-
tes métodos de detecção12, a reação em cadeia de

de bactérias do gênero Helicobacter, através de

-
Helicobacter murino,
- -

Tabela 1 - Número de animais positivos e porcentagens sobre o total analisado

Espécie Camundongos Rato Hamster

Linhagem C57BL/6 BALB/c Swiss Wistar Golden
Positivos/Total de animais 19/50 26/50 31/50 22/50
% positivos 18% 52% 62% 28%

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 97-101, jan./fev./mar. 2012 99

Triagem de Helicobacterspp em Fezes de Roedores de Laboratório Através da Técnica de PCR

-
. nero Helicobacter
-

-
5 conclusão
-
12. Helicobacter
spp
para a extração de DNA na detecção de Helico-
bacter spp

o diagnóstico de Helicobacter spp

- -
knock-outs

bactérias e parasitas.

Screening for Helicobacter spp inrodent feces

Laboratory using PCR technique

This work aimed to optimize the screening of the bacterium Helicobacter spp in sanitary
ABSTRACT

control program of laboratory animals, using the PCR (Polymerase Chain Reaction).
Fifty stool samples from each strain or species: C57BL/6, BALB/c, Swiss, Hamster and
Wistar rats were subjected to PCR using the primers F: 5’ CTATGACGGGTATCCGGC

by agarose gel electrophoresis, products were visualized and photographed under

ultraviolet light. The PCR technique allowed the detection of positive mice, 18% of
C57BL/6, 52% of the strain BALB/c, 62% of Swiss strain. In Wistar rats were detected

was effective in screening for Helicobacter spp in colonies of laboratory animals. Certi-
Nº 251 .

Keywords: Mice. Rats. Hamsters. PCR. Helicobacter spp.

100 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 97-101, jan./fev./mar. 2012

 Milena Coutinho da Motta, Jussimara FélixSartoreli, Marilda Osti Spinelli, Cyntia Marques dos Santos Corrêa de Godoy, Robison José da Cruz, Juliana Bortolatto

REFERêNCias
Helicobacter
hepaticus

Helicobacter
species

Helicobacter
species
Helicobacter
species , ,
, Deeny AA,

p. 221-3.

Helicobacter species by

, , ,
273-83.
, , Kim D

Helicobacter bilis

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 97-101, jan./fev./mar. 2012 101

 ARTIGO DE REVISÃO ISSN 2238-1589

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E

CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS
EM MODELOS ANIMAIS
Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto1, Gui Mi Ko1,2, Valderez Bastos Valero-Lapchik3,
Carolina Batista Ariza3, Marimélia Porcionatto3

O teste de labirinto em cruz elevado representa importante instrumento de pesquisa na 1 Disciplina de Biologia Molecular,
RESUMO

área experimental para estudos de comportamentos relacionados à ansiedade, em es- Departamento de Bioquímica – UNIFESP
pecial na análise do efeito farmacológico de novas drogas para esses transtornos. Esse 2 CEDEME – UNIFESP
teste tem sido utilizado como principal ferramenta no processo de desenvolvimento de 3 Laboratório de Experimentação Animal
- – INFAR – UNIFESP
volvidos em Neurologia e Psiquiatria. Apesar de sua criação há mais de 50 anos, foram
Autor para correspondência:
necessários cerca de 30 anos para o uso efetivo do teste de labirinto em cruz elevado
Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto
em investigações pré-clínicas em Farmacologia. Somente em 1987, houve o primeiro E-mail: wladimirbvrpinto@gmail.com
uso do teste de forma sistematizada em camundongos. Por se tratar de método de baixo
- Recebido para publicação: 10/09/2011
senta uma revisão da metodologia e dos parâmetros avaliados, os fatores extrínsecos Aceito para publicação: 10/12/2011
e intrínsecos ao organismo animal e os modelos experimentais utilizados no teste de
labirinto em cruz elevado.

Palavras-chave: Labirinto em Cruz Elevado. Modelos Animais. Testes Comportamentais.

1 Introdução

- -

102 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

-
-

- -

14
9

Teste de campo aberto (open- )

Teste de comportamento agressivo-defensivo
Teste de labirinto em cruz elevado ( - )
Teste de labirinto aquático de Morris ( )
Teste de labirinto radial ( )
Teste de enterrar defensivo condicionado
Caixa de movimentação espontânea
Teste de suspensão pela cauda
Caixa luz-escuro ou claro-escuro ( - , )
Labirinto em zero elevado ( - )
Teste de - (campo vazado) e -
Teste de interação social ( )
Teste de competição social ( )
Paradigma de livre exploração ( )
Vocalização ultrassônica ( )
Hipofagia induzida pela novidade ( - )

Quadro 1 - Principais testes comportamentais utilizados na rotina de estudo em doenças neuropsiquiátricas

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 103

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

bright-spaceanxiety open-
-spaceanxiety-likebehavior
-

- -

- Teste de labirinto em cruz elevado:

A ideia do approach-avoidconflict e o papel do
sistema neurossensorial nos comportamentos
incondicionados

-
-

preyer -

16

gentlewhiskerstimulation

17

- approach-
-

-
-
-

-
26-29

- -

104 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

- -
-
-
24

one-
trialtolerance
-
Metodologia empregada no teste de labirinto em
cruz elevado

-
-

- -

-
dos

-
-

-
-
riskassessment -

22 one-trialtolerance

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 105

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

- -
-

- 42

44

- -

24

106 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

Parâmetros avaliados no teste de labirinto em cruz

elevado

-
de headdippings ou head-dips

22

freezing
freezing
grooming
grooming
stretchedattendpostures

rearing
-

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 107

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

21 -

- 24

- -

head-dippings

49 -

- 24

108 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

Tempo gasto nos braços fechados ou abertos

Primeiro sítio escolhido após o início do teste
Porcentagem de tempo gasto nos braços fechados ou abertos em relação ao tempo total de teste
Número total de entradas nos braços abertos e fechados em conjunto
Número de entradas nos braços fechados ou abertos (incluindo a análise para cada braço separadamente)
Porcentagem de entradas nos braços abertos em relação ao número total de entradas
Porcentagem de entradas nos braços fechados em relação ao número total de entradas
Distância total percorrida nos braços abertos e fechados
Distância total percorrida nos braços fechados ou abertos
Porcentagem de distância percorrida nos braços fechados em relação à distância total
Porcentagem de distância percorrida nos braços abertos em relação à distância total percorrida
Número total de ou

Número de episódios de (ou congelamento) e tempo total gasto em

Número de eventos de (ou autolimpeza) e tempo total gasto em
Número total de espreitas ou
Número total de eventos de

Quadro 2 - Parâmetros e índices comportamentais tradicionais e modernos avaliados no teste de labirinto em

cruz elevado

22

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 109

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

headdippings

27 -

-
-

-
- do27

-
-

.
headdippings

,
-

110 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

riskassessment
head-dippings e de

headdippings -

Fatores extrínsecos ao organismo animal -

relacionados ao desempenho no teste de labirinto -
em cruz elevado

- -

24

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 111

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

sham

-
freezing

- -

24

-
- -
freezing

Fatores intrínsecos ao organismo animal

relacionados ao desempenho no teste de labirinto
em cruz elevado

112 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

Paredes dos braços fechados (opacas, transparentes)

Tipo de transporte do animal ao local de teste
Nível de iluminação do local de teste
Ruídos ambientais internos e externos ao local de teste
Procedimentos invasivos prévios (injeção intraperitoneal, dentre outros)
Privação de sono (permanente ou transitória)
Manipulação e manuseio prévios dos animais
Isolamento ambiental ou alojamento conjunto
Nível de luminosidade e condições prévias do biotério
Alternância de temperatura entre altos e baixos graus
Condições de estresse classicamente utilizadas (odores animais, estímulos elétricos prévios e exposição
à água)

Quadro 3 - Principais fatores extrínsecos moduladores do desempenho observado no labirinto em cruz elevado

- -

64
61

rea-
ring stretchedattendpostures
headdippings
groo- 62

ming19
-
-

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 113

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

64

- -

-
te -
-

69

-
-
66

-
one-trialtolerance
spontaneouslyhypertensiverats
67

shift

71

-
-

- -
72

114 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

-
1A
-

-
-

-
-
as -
-

Modelos experimentais animais do teste de labirinto

em cruz elevado

- -

A -
-

Modelos experimentais animais genéticos

Idade dos animais

Exposição prévia ao teste (etapas de teste e de reteste)

Quadro 4 - Principais fatores intrínsecos moduladores do desempenho observado no labirinto em cruz elevado

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 115

TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS

-
-

74

- -

2 -
-

76

forwardge-
netics
-

-
1A

-
-

77 -

one-trialtolerance

116 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

2 conclusões

- -
-

-
-
-

TEST ELEVATED PLUS MAZE: APPLICATIONS AND CONTRIBUTIONS

TO THE STUDY OF ANIMAL DISEASE MODELS IN NEUROLOGY AND
PSYCHIATRY DISORDERS

The elevated plus maze test is an important research tool in experimental studies of
ABSTRACT

anxiety-related behaviors, especially linked to the pharmacological effect of new drug

for these disorders. This test has been used as the main instrument in the development
of experimental animal models, representative of the pathophysiological mechanisms
involved in Neurology and Psychiatry. Although its creation over 50 years, it took about
30 years to be in effective use in preclinical investigations in Pharmacology. Only in

disseminated methodology and simple way to perform, this article presents a review
of methodology and the parameters evaluated, the extrinsic and intrinsic factors to the
animal and the experimental models used in the elevated plus maze.

Keywords:

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 117

 TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS
REFERêNCias

118 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

 Wladimir Bocca Vieira de Rezende Pinto, Gui Mi Ko, Valderez Bastos Valero-Lapchik, Carolina Batista Ariza, Marimélia Porcionatto

REFERêNCias

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012 119

 TESTE DE LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO: APLICAÇÕES E CONTRIBUIÇÕES NO ESTUDO DE DOENÇAS NEUROPSIQUIÁTRICAS EM MODELOS ANIMAIS
REFERêNCias

1A

120 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 102-120, jan./fev./mar. 2012

revisão ISSN 2238-1589

CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM

RATOS WISTAR
Adriano Bento-Santos1, José Antonio dos Santos1, Aline Isabel da Silva1, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes1,
Kelli Nogueira Ferraz-Pereira1, Sandra Lopes de Souza1, Carol Virgínia Góis Leandro1, Raul Manhães-de-Castro1

1 Departamento de Nutrição – Universidade O presente estudo tem como objetivo contribuir para delimitação, por meio de achados na

RESUMO
Federal de Pernambuco, Brazil literatura, de critérios de inclusão e de exclusão para escolha de ratos albinos Wistar em
pesquisas experimentais. Foi realizada uma busca literária nas bases de dados eletrônicas
Autor para correspondência: PUBMED, SCIELO e MEDLINE a partir do ano de 1950 até o ano de 2011. Na coleta biblio-
Adriano Bento-Santos
pregnancy; rats; Wistar; gestation; suckling;
E-mail: absbio@yahoo.com.br
lactation. Como critérios de inclusão, utilizaram-se citações que abordassem alguns dos
Recebido para publicação: 11/11/2011
Aceito para publicação: 02/01/2012 -

tamanho real da amostra e controle do ambiente experimental. Foram excluídos do estudo

short communications full text. Trata-se de um tema

Palavras-chave: Prenhez. Ratos Wistar. Lactação.

clareza, os critérios de inclusão e exclusão utiliza­

1 Introdução
O uso de modelos de experimentação animal
tem contribuído para o entendimento de muitos
aspectos referentes à genética, às doenças e às
interações medicamentosas de diversos fármacos1.
compõem a amostra. Desta forma, o presente estudo
tenta contribuir para delimitação, por meio de acha­
dos na literatura, de critérios de inclusão e exclusão
de ratos albinos Wistar para estudos experimentais.

utilizados ao longo dos anos em diversos estudos

2 materiais e métodos
­
zação de ratos ao invés de animais com maior por­
te, como ovelhas e macacos, é devida aos curtos ­
ciclos reprodutivos desses roedores1. Além disso,

de ratos ocorrem de forma similar em humanos2. foram consultadas na forma de artigos publicados
Uma variedade de estudos com ratos de labora­ em revistas indexadas na base de dados do SCIE­
3-13. No ­
DLINE a partir do ano de 1950 até o ano de 2011.

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 121

CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR
Na seleção dos artigos foram utilizadas as se­
Wistar
­ 220 gramas16
Foram excluídos do estudo short communications
e trabalhos não disponíveis no formato full text.
3 critérios para escolha das genitoras
­
sideração critérios como idade, peso, utilização de
ratas primíparas para o acasalamento e o controle
genético dos genitores.
A maioria dos artigos encontrados não revela
com precisão a idade reprodutiva das ratas Wistar.
No entanto, consideramos esta variável funda­
mental devido ao início e duração do período em
Regina14, a idade média para o início da puberdade
abertura do canal vaginal e o primeiro proestro. Já
1 em relação ao crescimento do tecido adiposo na
primeiras células nucleadas no esfregaço vaginal
são observadas entre o 35o e o 40o
reprodutivo das ratas compreende, aproximada­
mente, a idade entre 100 e 300 dias de vida14, é
­
15.
A explicação para se adotar esta postura não foi
dada em nenhum estudo, contudo, parece estar
relacionada à maturação do sistema reprodutor
122 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012
e no peso ao nascer da prole é o peso corporal das
genitoras. O peso corporal de ratas está diretamente
correlacionado com sua idade14. Na literatura, é
muito comum utilizar ratas com aproximadamente
14.
gramas ao nascimento17
normalmente encontrada para o peso ao nascer da
prole de ratos Wistar é em torno de 6 gramas3,14.
16 é me­
submetidas a 40% de restrição alimentar17. Desta
o acasalamento pode induzir baixo peso ao nascer
crescimento intrauterino, e ser confundido com os
efeitos de outro estímulo como uma desnutrição
normalmente aumenta com a paridade da genitora,
­
terno entre a primeira e a segunda prenhez de ove­
lhas e ratos da linhagem Sprague-Dawley .
Wistar,
bem como a primeira prenhez, pode desempenhar
Sprague-Dawley,
da prole pode estar relacionada com a idade e a
paridade materna9,11
experimentais com ratos .
rata a determinada manipulação (principalmente
19,20. Para
 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
14
utilizamos animais irmãos para compor um grupo
experimental e o grupo controle, sendo composto
por animais de ninhadas diferentes, podemos não
ser mais ou menos responsivos a determinada
manipulação19. As principais formas de eliminar
ninhada por casal reprodutor21.
4 critérios para escolha daa prole
nutri­
cionais3,6e comportamentais24,25.
A utilização
da prole pode ser realizada havendo ou não a
manipulação da rata genitora, porém são diversas
as variáveis a serem analisadas para escolha e
proporção entre sexos nas ninhadas.
Wistar
em idade reprodutiva constituem ninhadas de 12 a
141. Cripps et al.26 ­ haver, até o 3º DPN, a regulação da produção de
das de gestantes submetidas à dieta hipoproteica
ou normoproteica apresentaram, em média, 13
provavelmente, apresentarão o peso ao nascer fora
da faixa normalmente encontrada (em torno de 6
comportamentais, como observado na atividade
motora no início da vida14,27. Quando se pretende
obter ninhadas nascidas no mesmo dia é possível
mapear o ciclo estral da rata e escolher o período
estro para o acasalamento . Também é interes­
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 123
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro
.
­
células presentes no epitélio vaginal nas diversas
fases do ciclo estral . Encontram-se também no
Logo, a escolha29.
entre um ou outro método de monitoramento do
poderão ser manipulados a partir do primeiro ciclo
­
26. Os ratos
Wistar geralmente nascem entre 13 e 15 horas do
21º dia de gestação ou entre 9 e 11 horas do 22º dia
de gestação1. A determinação do 1º DPN é impor­
­
22,23,
ao 14º dia de vida pela nutriz30. Como a nutriz, ao
lamber a cria, capta fatores sensoriais provenientes
­
­ nipulação dos ratos recém-nascidos pode interferir
rata30. A importância do período compreendido
entre o 1º e o 3º DPN parece induzir alteração no
ou aumentadas a partir do 3º dia de vida, sugerindo
31.
Desta forma, não é ocasional o fato de muitos
trabalhos referirem a primeira manipulação das ni­
nhadas pela primeira vez no intervalo entre o 1º e o
­
ra manipulação da prole ocorre no 1º 9,25,32,33 ou no
2º DPN34,35
um relatou pesagem da prole no dia zero13 ou no
terceiro DPN36. Entretanto, independentemente
do dia de realização da primeira manipulação dos
fármacos, – deve ser mínimo o contato do mani­
feedback
diz respeito à orientação para as tetas.
CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR
ao longo do período de lactação é outro ponto
alimentares utiliza oito ratos wistar por ninhada,
podendo esta conter animais apenas do sexo
masculino ou ser constituída de forma mista, com
35,36. No entanto, há trabalhos
por ninhada35, 37
9,11. Quando se
o catch up crescimento e induzir obesidade em
ratos wistar podem ser utilizadas ninhadas redu­
. Ao
contrário, existe trabalho enfatizando a restrição
34
por ninhada estará diretamente relacionado à ne­
5 DETERMINAÇÃO DA UNIDADE EXPERIMENTAL (UE)
E DO TAMANHO REAL DA AMOSTRA
A UE é representada por um indivíduo ou por
deve ser feita de acordo com a metodologia apli­
cada no estudo e os dados registrados das UEs
37. Logo,
resultados e levar a conclusões incorretas10,12,40,41.
efeitos de manipulações no período perinatal sobre a
prole . Em espécies geralmente uníparas,
entanto, em espécies multíparas, como o rato, a UE
124 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012
A determinação da UE e do “n” depende dos
­
mentos, como nos dois exemplos a seguir. Em um
e/ou a ninhada inteira formam um grupo de trata­
mento, a UE é a ninhada e não cada descendente
grupo10 ­
­ as não são manipuladas durante a gestação e/ou
recebem tratamentos distintos (ex: doses de drogas
cada ninhada terá representante em todos os gru­
avaliados por grupo representa o “n”37.
­
correta da UE, em estudos com manipulação pré-
natal em espécies multíparas, é o “effect of litter”
10. Esse fenômeno ocorre em
ninhada como unidades amostrais independentes,
levando ao falso aumento do “n”10,40,41. O “effect of
litter
animais possuírem mesma carga genética e terem
compartilhado mesmo ambiente intrauterino10,40,41.
de uma mesma ninhada, os efeitos do tratamento
podem ser confundidos com efeitos de ninhada10.
­ Alguns métodos são recomendados para as
effect of litter”.
Pode-se realizar uma randomização em cada ni­
nhada para a escolha e utilização dos dados obtidos
de apenas um animal por ninhada, de tal forma
­
das. Outra estratégia é utilizar alguns ou todos os
dos dados para representar cada ninhada, criando
10. 10,45,46.
 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
realizado randomização, para formação dos grupos
experimentais3,9-11,13 ­
naram, a maioria não explica como foi realizada
esta randomização9,11,13. Contudo, a escolha dos
­ animais devem consistir em minimizar ao extremo
10,37. Outra
ratas para compor dois grupos (exemplo: controle
10 pedaços de papel contendo o nome controle e
é sacudido. Retira-se um pedaço de papel, pelo
indicado37. Este processo seria repetido com todos
forem retirados devem voltar para o recipiente
todos os animais tenham a mesma probabilidade
de serem escolhidos. Quando o neonato for a UE
separadamente dentro de cada ninhada, através de
uma das formas descritas anteriormente37.
6 controle do ambiente
A manutenção de animais em biotério, não
apenas de ratos Wistar, implica em trabalhar em
ambientes controlados e com animais padroniza­
­
bilidade e a possibilidade de fazer generalizações
47-50. No
­
terismo nos levaram a resumir alguns cuidados
importantes na prática experimental. O cuidado
47-50. Desta
nos experimentos e para proporcionar o bem-estar
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 125
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro
­
47-50.
­
50,51.
Todos os cuidados na criação desses
50,51.
Por isso, as variáveis ambientais são importantes
vez mais considerada. Então, fatores como tempe­
e ruídos devem ser controlados ao máximo50,51.
Em se tratando do controle da temperatura,
­
As mudanças nesses padrões levam a respostas
­
52. A maioria dos animais
diante do calor53,54. A temperatura e a umidade
­
tante o seu monitoramento diário. Portanto, para
animais devem ser mantidos nesta zona de conforto
53,54.
Os animais estão constantemente perdendo
calor, umidade e eliminando CO2, além de outras
biotérios devem ter um mecanismo de renovação
amônia, decorrente da degradação de excretas ni­
na gaiola e no biotério. O aumento exagerado do
nível de amônia pode estar associado, por exem­
plo, com o aumento da umidade decorrente do
vazamento de bebedouros.
­
ciam o metabolismo e o ciclo estral dos ratos,
CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR

promover períodos alternados e regulares de luz e como estes são manuseados. É importante o uso

o seu ciclo circadiano55. Além disso, os animais alterar os odores característicos do animal. Esses
albinos são mais sensíveis à luz. Então a intensi­
dade luminosa não pode ultrapassar 600 Lux na ­
sala a um metro do chão e no interior da gaiola
não deve exceder 60 Lux56,57. pelo tato59,60.

do animal. Os roedores possuem capacidade de

7 considerações finais
ouvidos humanos. A audição do rato varia de 500

nos biotérios deve ser mínimo e os horários de

entrada devem ser padronizados. A alta energia bom andamento de trabalhos experimentais. Em
sonora pode resultar em alterações auditivas e função de sua importância, eles devem ser levados
não auditivas nos ratos. Alterações não auditivas em consideração desde antes do início dos expe­

fertilidade reduzida. Algumas destas foram

correlacionadas com elevações de corticosteroides.
ratas para acasalamento às condições ambientais do
biotério podem alterar o delineamento experimen­
­ tal e constituir-se em variável passível de alterar
mente na resposta ao estresse . ­
­ térios e a sua padronização são um ponto essencial

CRITERIA FOR SELECTION OF THE SAMPLE IN EXPERIMENTS

WITH WISTAR RATS
ABSTRACT

exclusion criteria to choose Wistar

research in the PUBMED, SCIELO and MEDLINE databases (1950 to 2011). For database
Wistar

-
short communications and not available full text manuscript.

Keywords:

126 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012

 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
Nutrition on the Development and
159:503-9. No abstract available.
attenuate the effects of a maternal
malnutrition programs sustained
alterations in nitric oxide released
consumption. J Strength Cond Res.
6. Lopes de Souza S, Orozco-
protein restriction reduces the
Souza SL, et al. Short- and long-term
effects of a neonatal low-protein
R, Canon F. Effect of a low-protein
RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 127
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro
muscle mechanical properties of
Effect of repeated reproductive
status, lactational performance and
litter growth in ad libitum-fed and
treatment effects in multiparous
species. Neurotoxicol Teratol. 1992
1959-66.
Litter effects on caries in rats and
implications for experimental design.
alimentar de ratos adultos submetidos
sofreram desnutrição durante a
low maternal protein diet during
glucose metabolism and serum leptin
Effect of strenous maternal exercise
REFERêNCias
undernutrition during gestation on
the expression of genes that control
Timing of nutrient restriction and
programming of fetal adipose tissue
development. Proc Nutr Soc. 2004
Jul 4.
Freitas-Silva SR, Prota J, Neto AAL,
Souza AC, et al. A Pharmacogenetic
protocol for Fluoxetine response
during a period of rapid brain
development and weight gain in
Development of behavior in the
litter huddle in rat pups: within- and
between-litter differences. Dev
Carvalho Filho EV, Aragão RS,
neonatal treatment program
Silva SR, Antunes DE, Cunha AD, et
reduces depressive behavior induced
 CRITÉRIOS PARA ESCOLHA DA AMOSTRA EM EXPERIMENTOS COM RATOS WISTAR

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128 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012

 Adriano Bento-Santos, José Antonio dos Santos, Aline Isabel da Silva, Lígia Cristina Monteiro Galindo Novaes, Kelli Nogueira Ferraz-Pereira,
Sandra Lopes de Souza, Carol Virgínia Góis Leandro, Raul Manhães-de-Castro

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de segurança envolvendo animais behavioural and adrenocortical alters feeding behavior of adult rats.
reactions in veal calves. Reprod Nutr
Curso de aperfeiçoamento em 739-45.

RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 121-129, jan./fev./mar. 2012 129

 INSTRUÇÕES AOS AUTORES
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Mesmo Autor da Obra no Todo
Abreviaturas e Siglas CT laboratory
animals

Autor distinto da obra no todo

Agradecimentos ver Folha de Rosto

Citações no Texto Dissertações/Teses

-

Dissertações/Teses on-line
Exemplo: -
-
1 hamsters -
Rattus
norvegicus

Exemplo:
2 Trabalho Apresentado em Evento

Referências (Vancouver)
- -

- Trabalho de evento publicado em periódico

Braz Oral Res

Impressão e acabamento