Laboratório Multiusuário de Estudos em Biologia III

Universidade Federal de Santa Catarina

Centro de Ciências Biológicas
www.lameb3.ccb.ufsc.br

PROTOCOLO DE SOLUÇÕES UTILIZADAS NAS TÉCNICAS

COMUNS PARA CORTES EM CRIOSTATO

• FIXADOR: SOLUÇÃO DE PFA 4%

12 g de PFA (PARAFORMALDEIDO) (CH2)n

150 mL de Água destilada
150 mL de PB 0,2M
Hidróxido de sódio NaOH

Preparo:
Aquecer a Água destilada até 70°C, no misturador, colocar a “pulga” (imã) e liga-lo,
acrescentando aos poucos o PFA.
Jogar duas pedrinhas ou mais de NaOH até a mistura ficar clara e homogênea.
Por último, acrescentar a solução de PB 0,2M

Obs.: medir pH (pH ~ 7,4) e filtrar a solução.

• SACAROSE:

Importante solução Crioprotetora

Obs.:

1) Fazer a solução no momento do uso (máximo 1/2 dia);

2) Dependendo o tecido é importante fazer mais diluições (10%, 20% e 30%).

Deixar de 1 a 2 horas na solução de 10 e 20% e no mínimo 4 horas na solução de 30%
(esta pode ficar por até 48hs);
OBS: Após 2 horas na sacarose 30% deve-se conservar o material em geladeira.

Solução de sacarose 10%

100ml tampão PB-0,1M
10g Sacarose (C12H22O11)

Solução de sacarose 20%

100ml tampão PB-0,1M
20g Sacarose (C12H22O11)

Solução de sacarose 30%

100ml tampão PB-0,1M
30g Sacarose (C12H22O11)

Campus Universitário Trindade, Ala Nova, Bloco C, 1° Andar, Sala 109C

Córrego Grande, Florianópolis, SC, CEP 88040-970
(48) 3721 4759, lameb3@contato.ufsc.br
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• SOLUÇÃO TAMPÃO – FOSFATO (PB- 0,2M)

1L de água destilada
11g de Fosfato de Sódio dibásico anidro
2,75g de Fosfato de Sódio monobásico monohidratado Na2PO4. H2O

• SOLUÇÃO TAMPÃO – FOSFATO (PB-0,1M)

1L de água destilada
1L de Tampão 0,2M

• GELATINIZAÇÃO DE LÂMINAS:

750 ml de Água destilada

0,48 g de Sulfato de Potássio (Cromo) KCr(SO4) – Pode ser usado também o toluol ou
o fenol
3,75g de gelatina

Preparo:
Aquecer a água até 70°C, quando a água estiver bem aquecida colocar a gelatina no
misturador, cuidando para não empelotar a gelatina.
Quando a solução estiver homogeneizada coloque o Sulfato de Potássio (Cromo)
Filtrar a solução
Mergulhar as lâminas em água destilada e depois mergulhar na solução.
Cuidado com bolhas, deixar secar na estufa.
Mergulhar novamente na solução e colocar novamente na estufa (2X).

• SILANIZAÇÃO DE LÂMINAS PARA IMUNOHISTOQUÍMICA

Silano 2,5% em Acetona

Solução de 400ml:
10ml de Silano ________________________ 400ml de Acetona

Procedimentos:

• Colocar as lâminas nas barquinhas de alumínio;

• Mergulhar na solução de silano em acetona (5 min);
• Mergulhar em água Destilada (2 min);
• Deixar secando sobre papel pardo.

OBS: Não usar luva devido ao talco.

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• SOLUÇÃO DE MONTAGEM

225ml de água destilada

225ml de PB-0,2M
50ml de etanol (Ch3CH2OH)
0,5g de gelatina

Preparo:
Aquecer a água até 60°C.
Acrescentar gelatina na água aquecida e colocar no misturador
Adicionar a solução PB 0,2M e por último adicionar o etanol

• SOLUÇÃO ANTICONGELANTE PH 7,4

125 mL de PB 0,2M
150 mL de Água destilada
75 g de sacarose
125 mL de propilenoglicol

Se for utilizar etilenoglicol será:

125 mL de etilenoglicol
125 mL de Água destilada

Se for utilizar glicerol será:

240 mL de gliceol
35 mL de Água destilada

Formol = 10%
Imunolis = P Formol 4%

• SOLUÇÃO SALINA 0,9%

1 L de Água destilada
9 g de NaCl

Obs.: filtrar solução

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