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GENÉTICA

Prof. Ms. Rulian Ricardo Faria

2019-2
UNIDADE I

BASES CROMOSSÔMICAS E
MOLECULARES DA
HEREDITARIEDADE

Prof. Ms. Rulian Ricardo Faria

2019-2
UNIDADE I – Seção 1.3

METODOLOGIA
LABORATORIAIS E
MOLECULARES EM GENÉTICA

Prof. Ms. Rulian Ricardo Faria

2019-2
UNIDADE I – Seção 1.3
EXTRAÇÃO DE DNA
 Extração de DNA é um procedimento de rotina para isolar e coletar o DNA.
 É a primeira etapa para subsequente análise molecular ou forense.
 DNA pode ser extraído de quase qualquer tecido celular intacto:
− Pele
− Sangue
− Saliva
− Sêmen
− Muco
− Músculo
− Osso
− Outros...
UNIDADE I – Seção 1.3
PROPÓSITO DA EXTRAÇÃO DE DNA
 Obter DNA em uma forma relativamente purificada o qual poderá ser
utilizado em investigações

− Tipo de tecido para transplante

− Detecção de patógenos

− Testes de paternidade

− Identificação de doenças congênitas

− Identificação de genes problemáticos

− Pesquisa
PROCESSO DE EXTRAÇÃO DE DNA

Precipitaçã
Quebra da Separação dos o do DNA
parede e sólidos do DNA usando
membrana dissolvido isopropanol
celular através de
centrifugação.
Centrifugaçã
o para
separar o
DNA dos
Lavagem e sais e
DNA açucares
secagem do
dissolvido dissolvidos.
pellet de DNA
com Etanol.
UNIDADE I – Seção 1.3
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE - PCR
UNIDADE I – Seção 1.3
SÍNTESE DE DNA in vitro

 Polimerase Chain Reaction - PCR


– Reação em cadeia da Polimerase

 Amplificação in vitro de
moléculas de DNA
– In vivo X In vitro X In silico Termociclador

 Procedimento análogo à replicação do DNA


– Amostra de DNA; 2 primers; DNA polimerase;
Tampão; dNTP
UNIDADE I – Seção 1.3
ETAPAS DA PCR
 Ciclos da PCR
– Separação das fitas → 96°C
– Anelamento dos primers →
60°C
– Síntese do DNA → 72°C

 Problema inicial da técnica


– Durante a etapa de quebra
das pontes de H e
separação das fitas (DNA
melting) a 96°C, a enzima
polimerase era desnaturada
e precisava ser
acrescentada ciclo a ciclo...
– Não permitia automação
UNIDADE I – Seção 1.3
ELETROFORESE
 Movimento de partículas dispersas num fluído sob influência de um
campo elétrico uniforme

 DNA, carga negativa

– Tem tendência a se dirigir ao polo positivo quando sujeito a um


campo elétrico
 Serve para separar moléculas por
tamanho/carga elétrica

– Proteína deve ser desnaturada


com detergente (SDS)

 Técnica utilizada à exaustão em


trabalhos de biologia molecular
UNIDADE I – Seção 1.3
ELETROFORESE - ETAPAS

1. Preparação do gel

2. Aplicação das amostras

3. Eletroforese

4. Coloração

5. Análise dos resultados


UNIDADE I – Seção 1.3
PREPARAÇÃO DO GEL
Horizontal X Vertical
Agarose X Poliacrilamida
UNIDADE I – Seção 1.3

APLICAÇÃO DAS AMOSTRAS

Definição do mapa das


amostras por canaleta
UNIDADE I – Seção 1.3
COLORAÇÃO DAS MOLÉCULAS
 Brometo de etídio

– Agente intercalante do DNA

• Cancerígeno!

– Composto fluorescente à luz UV

– Gel de agarose

 Prata

– Gel SDS-PAGE

• PoliAcrilamide Gel Electrophoresis

– Melhor resolução

 Coomassie blue, etc


UNIDADE I – Seção 1.3
UNIDADE I – Seção 1.3
UNIDADE I – Seção 1.3
ELETROFORESE EM CAMPO PULSADO
UNIDADE I – Seção 1.3
PROBLEMATIZANDO A AULA
A advogada Eleonora de 32 anos tem experiências em processos civis e tem
como nova cliente Rita de Cássia, 26 anos, artista plástica, mãe de Gabriel, grávida de
6 meses. Rita enfrenta com problemas conjugais, pois o marido Rubens a acusa de
adultério. Por coincidência, Bruno, também advogado do escritório em que Eleonora
trabalha, recebera a visita de Rubens, marido de Eleonora, que entrou com um
processo judicial solicitando o exame de DNA para a comprovação da paternidade.

O Laboratório Positivo recebeu a visita de Rita de Cássia e de Rubens para a


realização do exame de DNA e, apesar de ser um laboratório particular e de
propriedade dos pais de Rita de Cássia, mantém como prioridade a ética, o sigilo e o
profissionalismo, assim como ocorre com qualquer outro exame que seja realizado no
laboratório. Você saberia explicar como é o processo de coleta e extração de DNA
desses materiais? E como é feita a extração de DNA do feta de Rita de Cássia?
UNIDADE I – Seção 1.3
PÓS-AULA
 Se preparar através do conteúdo do livro didático na Unidade I
– seção 1.3 localizado entre as páginas 35 e 44;

 Rever a webaula;

 Resolver os exercícios de aprofundamento no AVA referente a


Unidade I – seção 1.3.

 Resolver os exercícios de 01 a 03 nas páginas 45 e 46;

 Também pode se aprofundar utilizando a Bibliografia Básica


Padrão, as demais Bibliografias e as Bibliografias
Complementares que constam no Plano de Ensino e
Aprendizagem que foi apresentado no primeiro dia de aula.
UNIDADE II – Seção 2.1

RECOMENDAÇÕES PARA O PRÓXIMO ENCONTRO

 Recomenda-se realizar uma breve leitura da Unidade II – seção


2.1 no livro texto entre às páginas 50 e 59;

 Realizar a pré-aula no AVA referente a Unidade II – seção 2.1:


assistir a webaula e realizar a respectiva atividade diagnóstica.

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