DISCIPLINA: TECNOLOGIA DAS FERMENTAÇÕES

Questões

1. Em 1913, Leonor Michaelis e Maud Menten, baseando-se no conceito da formação do complexo ES (enzima-
substrato) como intermediário do processo de catálise enzimática introduzido em 1882, propuseram uma equação
para a velocidade das reações enzimáticas. Explique o que está sendo demonstrado no gráfico. (5,0 pontos):

A velocidade de uma reação enzimática depende da concentração dessa enzima. A concentração do

substrato é um dos fatores que mais afetam na velocidade das reações enzimáticas, de modo fixando se a
concentração de enzimas e variando a concentração de substratos observa se o seguinte comportamento:
A primeira parte da curva representa uma condição em que o aumento na concentração da substancia
implica em um aumento da velocidade da reação.
A estabilidade acontece na segunda parte da curva, significa que a concentração de substrato não é mais o
fator limitante, já que seu aumento não acarreta na velocidade de reação.
Inicialmente tem uma reação de primeira ordem e depois uma reação de ordem zero, que independe da
concentração de substrato.

2. De acordo com Michaelis-Menten, uma reação enzimática simples, pode ser escrita da seguinte forma (5,0
pontos):

E + S ↔ ES ↔ EP ↔ E + P (1)

(2)

(3)

Onde E é a molécula enzimática, S é o substrato, ES é o complexo enzima-substrato, EP é o complexo EP, P é o

produto, e k são as constantes de cada reação.

Explique por que o termo EP está ausente nas equações 2 e 3 e porque o K 4 foi desconsiderado na equação 3.
A formação da enzima em produto vai ser retirada porque quando falamos na cinética da velocidade, a
velocidade da reação ES é lenta e a reação de formação do EP é muito rápida, se tornando irrelevante. E
como a velocidade de dissociação depende do complexo enzina produto, ela também não será utilizada.

3. O gráfico de Lineweaver-Burk ou representação de duplo recíproco é a forma mais comum, e simples, de mostrar
os dados da cinética enzimática. Utilizando os dados disponibilizados, determine os valores Km e Vmax para a
enzima A (5,0 pontos).

Enzima A
[S] V0 (µM.s-1)
(nM)
6 ,0 4,2
12,4 7,3
15,8 8,8
32,2 12,0
40,1 13,2

Equação da reta: km
y = km/Vmax .x + 1/ Vmax =0,2467
Vmax
Linearização pela calculadora
Valor de A = 0,2467
Valor de B = 3,8434
km
=0,2467km=0,064
0,26
y=ax+ b y=0,2467 x +3,8434
1
=3,8434
Vmax

1
Vmax=
3,8434
Vmax=0,26

4. O que determina a afinidade enzimática? (5,0 pontos).

Quanto menor for o valor do km, maior será a afinidade da enzima pelo o seu substrato. E quando for maior o
km, menor será a afinidade.
Para encontrá-la é necessário chegar ao Km, que é a concentração do substrato para qual a velocidade da
reação é a metade da velocidade máxima.
Ao comparar os Kms é possível encontrar qual enzima tem maior afinidade pelo seu substrato, quanto menor
o valor do Km, maior é a afinidade.

5. Utilize a equação de Michaelis-Menten para responder as questões abaixo:

a) Qual a concentração de substrato para que uma enzima com kcat de 15,0 s-1 e Km de 0,002 M opere com um
quarto da velocidade máxima? (1,5 pontos)

Vo = V máx. [S] Vmáx = Vmáx. [S]

Km + [S] Substituindo 4 Km + [S]

1 = [S]
4 0,002 + [S]
 4 .S = 0,002 + S
4S – S = 0,002
3S = 0,002
S = 0,00067 M

b) Determine a fração de Vmáx que seria obtida nas seguintes concentrações de substrato: 1/2Km; 8Km e 20Km.
(1,5 pontos)

[S] = ½ = 0,5 Km
Vo = Vmáx . 0,5 Km = 0,33 Vmáx
1 + 0,5

[S] = 8 Km
Vo = Vmáx . 8 Km = 0,88 Vmáx
1+8

[S] = 20 Km
Vo = Vmáx . 20 Km = 0,95 Vmáx
1 + 20

c) Enzimas que catalisam a reação X↔Y são isoladas de duas espécies de bactérias. As enzimas possuem a mesma
Vmáx, mas diferentes valores de Km. A enzima A tem Km=5 µM e a enzima B tem Km=0,8 µM. Qual destas enzimas
possui maior afinidade pelo substrato? (2 pontos).

A enzima B, devido ao seu menor valor de Km.

Boa Prova!