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2º LACCA
Biotecnología
Práctica nº1: Determinación de proteínas por el método Kjeldahl
El método consiste en el calentar de una sustancia con ácido sulfúrico cuál descompone
el nitrógeno orgánico presente sulfato del amonio. En este paso sulfato del potasio se
agrega para aumentar punto que hierve del medio (a partir °C el 337 a 373).
Descomposición química de la muestra es completo cuando el medio ha llegado a ser
claro y descolorido (inicialmente mismo obscuridad).
La solución entonces está destilado con hidróxido del sodio (agregado en cantidades
pequeñas) a que convierte la sal del amonio amoníaco. La cantidad de presente del
amoníaco (por lo tanto la cantidad del nitrógeno presente en la muestra) se determina
cerca titulación trasera. El final del condensador se sumerge en una solución del ácido
bórico. El amoníaco reacciona con el ácido y el resto del ácido entonces se titula con a
carbonato de sodio solución con a naranja metílica indicador del pH.
Hoy en día, el método de Kjeldahl se automatiza y hace uso en gran parte específico
catalizadores (óxido del mercurio o sulfato de cobre) para acelerar la descomposición.
Usos
Según el Código Alimentario Español (CAE), se denomina carne a “las partes blandas
comestibles del ganado bovino, ovino, porcino y aves”.
• Las carnes aportan entre un 16-22% proteínas de alto valor biológico, es decir,
contienen todos los aminoácidos esenciales.
• Son una buena fuente de vitaminas, principalmente del grupo B (en especial
B12).
• Excepto las vísceras, son pobres en vitamina A, C, ácido fólico e hidratos de
carbono.
• Son ricas en hierro del tipo hemo, que presenta mejor absorción que el hierro no
hemo presente en alimentos de origen vegetal.
• Aportan minerales, zinc, potasio, fósforo y, en menor medida, calcio y
magnesio.
• El contenido de grasa y colesterol depende del tipo de especie, la pieza, así como
la edad y la alimentación del animal.
Tabla de composición:
Kcal: kilocalorías; P: proteínas (%); G: grasas; Col: colesterol; AGS: ácidos grasos
saturados.
En esta práctica trataremos de calcular el tanto por ciento de proteínas presentes en una
muestra de salchichas. Para realizar este análisis, valoraremos el amoniaco presente
después de someter a una digestión por medio de ácido sulfúrico a la muestra.
4) Lista de material:
-Material de disoluciones
-Montaje Kjeldahl
5) Reactivos:
-Ac. Bórico 4%
-HCl 0,1M
-Ácido sulfúrico
-Etanol 96%
-Azul de metileno
-Indicador mixto
-Catalizador Kjeldahl
-NaOH 40%
6) Muestra:
Salchicha campofrío
Caducidad: 30-1-2011
Lote:Lt0312
Energía 1028Kj
Proteinas 11g
H. de carbono 10g
de los cuales azúcares 1g
Grasas 18g
de las cuales saturadas 6g
Fibra 0g
Sodio 0.8g
7) Procedimiento:
Valorar la disolución con HCl 0,1N y para los cálculos aplicar esta fórmula.
f: N del HCl
Vm HCl: es el volumen medio gastado de HCl
m Muestra: masa muestra
Fd: factor de dilución
8) Datos experimentales:
Muestra 1:
Muestra 2:
Muestra 2:
10) Observaciones:
El segundo resultado ha salido mal, da 3 veces la concentración que debería. Este fallo
creemos que ha viene dado por el HCl que no estaba bien valorado.
El HCl a mi juicio era de dudosa concentración, pues se nos presento como 0,1N sin
ningún decimal más, a parte el HCl estaba hecho a paritr de una disolución que llevaba
hecha mucho tiempo entre otras cosas.
En cambio el primer ensayo nos salió muy bien, lo que es raro dado que el HCl era el
mismo, asi que es muy posible que se volatilizase el HCl o que alguien echase más
disolvente en el mismo. A todos los grupos les ha pasado lo mismo.
Bueno, de todas formas aunque este no es el caso, creo que el mejor método es el
antiguo. El método antiguo no tiene escapes ni filtraciones, que es lo contrario que pasa
con el método nuevo, que se filtra por todo los lados. Las filtraciones fueron el motivo
por el que el grupo de Riccardo tuvo que repetir el ensayo.
11) Bibliografía:
-www.worldlingo.com/ma/.../es/Kjeldahl_method
Práctica nº2: Extracción del ADN
Vamos a tratar de ver el ADN de forma macroscópica, para ello cogeremos hígado y
destruiremos sus células de todas las maneras posibles ya sea por métodos físicos o
químicos.
Una vez ya estén todos los pasos hechos trataremos de precipitar el ADN con etanol frío
y observaremos los resultados.
4) Lista de material:
-Material habitual de laboratorio
-Mortero
5) lista de reactivos:
-Agua
-Etanol frío
-NaCl 10%
-Detergente líquido
-Arena
-Tela
-Higado
6) Procedimiento:
Triturar el hígado en el mortero añadiendo arena. Al triturado se le añaden 10ml de agua
y se remueve hasta conseguir una papilla. Filtrar sobre tela un par de veces, medir el
volumen total y añadir una cantidad igual de NaCl 10%.
Añadir unas gotas de lavavajillas y una vez hecho todo añadir 5 ml de etanol frío poco a
poco dejándolo resbalar por las paredes lentamente.
7) Resultados y observaciones:
Obtuvimos un buen resultado ya que nos precipitó bastante ADN, pero al intentar
enrollarlo en la varilla de vidrio no pudimos. Al no poder enrollarlo en la varilla de
vidrio traté de hacerlo con una bastoncillo, dado que la madera al ser más porosa lo
retendría mejor y asi fue.
Esta práctica me parece ideal para hacerlo en casa ya sea por los reactivos necesarios o
por lo fácil que es. Cuando se la hice a mi primo pequeño le encantó y la única
diferencia es que yo la hice en vaso de tubo en vez de en probeta.
8) Bibliografía:
http://www.biopsicologia.net/fichas/page_483.html
Práctica nº3: Cromatografía en capa fina
1) Objetivo: separar mezclas de amino ácidos por una cromatografía en capa fina
Cromatografia plana: La fase estacionaria está colocada en una superficie plana que en
realidad es tridimensional, aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que
puede considerarse bidimensional. Se divide en dos tipos generales:
3) Fundamento teórico aplicado:
Haremos diferentes soluciones de amino ácidos, luego colocaremos en la capa fina las
disoluciones de aminoácidos y la muestra problema que será zumo de naranja y tinta de
boli en otra.
4) Lista de material:
-Material de disoluciones
5) Lista de reactivos:
-Glicina
-Lisina
-A. Aspártico
-A. glutámico
-Zumo de naranja
6) Procedimiento:
Ahora en la placa de silica gel trazaremos una línea recta más menos a 1cm del final,
sobre esa línea pondremos los aminoácidos y la muestra.
Una vez puesto todo en la placa pondremos la palca en una cubeta cromatográfica,
añadiremos eluyente y taparemos para que esté aislado. Hay que andar con cuidado de
que el eluyente no se salga, cuando esté cerca sacaremos la placa.
7) Resultados y observaciones:
Al sacar la palca después del revelado y del secado obtuvimos una mancha difuminada
de la muestra y de los diferentes aminoácidos.
Este resultado fue debido a que a la hora de añadir los aminoácidos las gotas que
añadimos fueron muy grandes y se juntaron.
No pudimos obtener ningún resultado claro, pero viendo los resultados de los
compañeros podemos deducir que la naranja contenía todos los tipos de aminoácidos
que pusimos en la capa fina.
8) Bibliografía:
-http://www.unedcervera.com/c3900038/quimica_ingenieria/cromatografia.html