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Após estudar sobre aminoácidos e proteínas, assistir ao vídeo e ler o roteiro da aula

prática, responda às questões abaixo:

1- Você dispõe num laboratório de dois frascos idênticos, porém, não rotulados. Um
deles contém solução de aminoácidos e, o outro, contém uma solução de proteínas.
Qual seria o seu procedimento para identificar as duas soluções e rotular os frascos?

Pode-se usar o composto reativo de biureto, que na presença de uma substância


com duas ou mais ligações peptídicas produz uma coloração azul-violeta. Esse método
torna-se possível devido a conformação estrutural das proteínas, sendo formadas por uma
grande quantidade de aminoácidos unidos por ligações peptídicas, assim, as proteínas irão
produzir a coloração enquanto os aminoácidos não.

2- Descrever um método que permita separar a proteína no 6 de uma mistura que


contenha seis proteínas, sabendo-se que: a) as proteínas de no 1, 3 e 5 precipitam
pelo sulfato de amônio a 40% de saturação; b) as proteínas de no 1, 2, 4 e 6 precipitam
pelo etanol gelado; c) as proteínas de no 1, 3, 5 e 6 precipitam pelo sulfato de amônio
a 75% de saturação; d) os pontos isoelétricos das proteínas 1 e 3 são iguais a 6,5 ; o
da proteína 2 é 7,2; o das proteínas 4 e 6 se igualam a 6,3 e o da proteína 5 é 6,8.

Com a finalidade de separar a proteína nº6, um dos métodos possíveis, seria utilizar
sulfato de amônia a 75% de saturação a fim de separar as proteínas 1,3,5 e 6 do restante e
em sequência utilizando o precipitado, por meio da eletroforese, atingir o ponto isoelétrico
de 6,3, separando assim apenas a proteína nº6 da mistura que novamente estaria no
precipitado.

3- Num extrato biológico existem hormônios protéicos e isoenzimas, que devem ser
isolados da maneira mais pura possível para uso posterior. Você dispõe de sulfato de
amônio, TCA, etanol, resinas cromatográficas, equipamentos cromatográficos e de
eletroforese. Que métodos você poderia utilizar? Explique o seu princípio e como
executá-lo. Que métodos não poderiam ser utilizados?

Para fazer o isolamento de maneira mais pura possível poderia ser utilizado o
equipamento cromatográfico para identificar os componentes do extrato biológico e em
seguida o sulfato de amônio em diferentes concentrações para precipitar os hormônios
protéicos e as isoenzimas de maneira separada e organizada
4- Uma solução a 1% de hormônio anti-diurético (nonapeptídio) foi submetida aos
tratamentos abaixo com os seguintes resultados: a) reação fortemente positiva para o
biureto e fracamente positiva para ninhidrina; b) a adição de ácido forte gelado e
posterior neutralização do pH, não alteraram os resultados do item anterior; c) Com a
adição de ácido forte à quente (100oC por 2 h) e posterior resfriamento e neutralização
do pH , a reação da ninhidrina foi positiva (fortemente positiva). Interprete e explique
estes resultados.

a) O resultado obtido se explica pela abundância de ligações peptídicas para reagir


com o biureto (formando coloração azul-violeta). Enquanto isso, a nninhidrina sofreu
uma reação fracamente positiva, já que ela depende de grupos amina livres, que
estavam em baixa concentração devido a sua participação nas ligações peptídicas.
b) Não houve alteração na estrutura primária (sequência de aminoácidos), e por isso os
resultados se mantiveram os mesmos.
c) Essa etapa gerou grupamentos amina livres, vindos da quebra das ligações
peptídicas pela ação do ácido, que reagiram com a ninhidrina fazendo com que a
reação se tornasse fortemente positiva.

5- Um brilhante aluno de biologia trabalhava em um laboratório de pesquisa na


realização de uma corrida eletroforética. Preparou o gel de poliacrilamida contendo
SDS, aplicou as amostras no gel, ligou a corrente e decidiu estudar para a prova de
Bioquímica enquanto aguardava a migração das proteínas. No entanto, não percebeu
que inverteu os pólos negativo e positivo da fonte de energia. A separação das
proteínas das amostras foi possível? Por quê?

Não, o SDS faz com que as proteínas estejam negativamente carregadas, sendo
assim, elas são atraídas para o polo positivo que foi posto do lado invertido, o mesmo lado
das proteínas, portanto, não havendo seu deslocamento. Dessa forma, não foi possível
fazer a separação das proteínas.

6- Derivados de catecol que apresentam longas cadeias de carbono (ver figura) são
os componentes da substância irritante produzida pela hera venenosa. Quando em
contato com a pele produzem erupção cutânea e coceiras características.

Com base na figura acima e no pK do catecol, se você fosse exposto à hera venenosa
qual dos tratamentos a seguir você aplicaria à área afetada? Justifique sua escolha.

(a) Lavar a área com água fria.


(b) Lavar a área com vinagre diluído ou suco de limão.

(c) Lavar a área com água e sabão.

(d) Lavar a área com água, sabão e bicarbonato de sódio

C. Devido às propriedades do sabão, possuindo uma parte polar e uma apolar, ele poderia
se ligar tanto com os radicais apolares do catecol quanto com com a parte polar da
molécula, solubilizando o catecol em água e tratando a região afetaada

7- Dados os aminoácidos abaixo presentes no citosol de uma célula, em pH 7,2: a)


construa corretamente um peptídio com a seguinte sequência de aminoácidos:
Ala-Lis-Glu-Leu; b) calcule a carga do peptídeo em pH 7 e 11; c) calcule o seu pI. d)
explique se esse peptídeo pode auxiliar no tamponamento do pH intracelular.

Leucina Alanina Glutamato Lisina

pk1=2,33 pk1=2,35 pk1=2,10 pk1=2,16

pk2=9,74 pk2=9,87 pk2=9,47 pk2=9,06

pkR=4,07 pkR=10,54
a)

b) Carga do pl = 0, pl equivale a 6,24, em pH =7 a carga = -1 e em pH =11 a carga =-2


c)

Ala= 6,065

Lis= 9,8

Glu= 3,085

Leu= 6,035

pl (média dos 4) = 6,24

d) Sim, já que possui regiões capazes de se protonar e desprotonar

8- O que é o processo de desnaturação? Qual nível estrutural das proteínas não é


afetado por este processo? Explique.

A desnaturação protéica é a perda da estrutura final da proteína ou a alteração da


mesma, sem haver a ruptura das ligações peptídicas. A desnaturação pode ocorrer por
agentes desnaturantes físicos ou químicos, sendo eles fervura (físico), uréia, detergente
(químicos), entre outros.

9- Qual das mutações na molécula de mioglobina deve ter o maior efeito na estrutura
terciária da mioglobina? Justifique sua resposta.
Triptofano Fenilalanina Leucina Aspartato

a) Trp14 para Phe b) Trp14 para Leu c) Trp14 para Asp

C. A fenilalanina e leucina são apolares, não representando mutações significativas,


já o aspartato possui um grupamento ácido carboxílico a mais, sendo um aminoácido mais
ácido.

10- Abaixo é mostrada a representação de um aminoácido que é muitas vezes


encontrada em sites e livros didáticos. Explique se essa representação está correta
do ponto de vista bioquímico.

Não, normalmente o grupamento carboxila é representado como COO-, sem o H da


carboxila devido a maneira como usualmente é encontrado no meio ou formando proteínas.
além disso, o grupamento carboxila fica próximo ao grupamento amino, e não do outro lado
da molécula e falta um hidrogênio no grupamento amino.

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