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Capacitação no Uso e Manejo

de Animais de Laboratório
Modelos alternativos sem uso de
animais
Silvya Stuchi Maria-Engler
Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas
Faculdade de Ciências Farmacêuticas
REBIOTERIO
POR QUE TESTA-SE MEDICAMENTOS,
COSMÉTICOS, AGROTÓXICOS,
SANITIZANTES, ETC EM ANIMAIS?

• As pesquisas e testes em animais tiveram


um papel em quase todos os avanços
médicos do século passado.
• Salvou centenas de milhões de vidas em
todo o mundo.
• Estima-se que 100 milhões de animais
sejam utilizados a cada ano

ATESTAR SEGURANÇA E EFICÁCIA


REBIOTERIO DESTAS SUBSTÂNCIAS
CENÁRIO EUROPEU
80 90 2000 -

Adoção dos 3 Rs - ECVAM Diretiva Cosmética


Reduction, Laboratório de regulamentar para a
Refinement, referência de métodos eliminação progressiva dos
Replacement alternativos da União testes em animais para fins
(redução, refinamento Européia cosméticos
e substituir) Promoção e validação Teste e comercialização
REBIOTERIO (Russell & Burch, 1959). de métodos in vitro (Julho de 2013)
CENÁRIO BRASILEIRO

REBIOTERIO
O QUE SÃO MÉTODOS ALTERNATIVOS À
EXPERIMENTAÇÃO ANIMAL? RN17/2014 CONCEA
• SUBSTITUIR, REDUZIR OU REFINAR na pesquisa, indústria ou
ensino
• M.A. VALIDADO: confiabilidade e relevância para determinado
propósito
estágios de desenvolvimento,
pré-validação,
validação e
revisão por especialistas
• conformidade com os procedimentos realizados por
Centros para Validação de Métodos Alternativos ou por
estudos colaborativos internacionais, podendo ter
aceitação regulatória internacional;

• MÉTODO ALTERNATIVO RECONHECIDO: validado que foi


reconhecido pelo Concea.
REBIOTERIO
• A disponibilização mundial dos métodos validados ocorre
através da OCDE* e das farmacopéias
• *Organização para cooperação e desenvolvimento econômico
TESTES CELULARES IN VITRO RECOMENDADOS
PELA ANVISA
• Citotoxicidade: Vermelho neutro; MTT (métodos clássicos em
citotoxicidade, base de outros métodos in vitro validados)
• Fototoxicidade (corresponde à OECD 432)
• Permeação e Retenção Cutâneas (corresponde à OECD 428)
• Opacidade/permeabilidade (BCOP – corresponde à OECD
437 e ICE corresponde à OECD 438)
• Irritação ocular: vascularização (Het-Cam – não validado
pela OECD, porém validado pela ICCVAM),
• Irritação cutânea (corresponde à OECD 439)
REBIOTERIO
• Corrosividade cutânea (corresponde à OECD 430 e OECD
431)
TESTE DE OPACIDADE DA CÓRNEA
BOVINA (BCOP)/ OECD 437
• Olhos bovinos (descarte) são expostos
à substância a ser testada

• Efeitos tóxicos são medidos:


• Opacidade
• Permeabilidade da córnea

• Combinados geram um índice de irritância in vitro (IVIS)


REBIOTERIO
• Teste classifica substância como
corrosiva ou irritante grave
TESTE DA MEMBRANA CORION
ALANTÓIDE (HETCAM)
• Utiliza ovos de galinha fertilizados

• Avalia a irritabilidade da membrana


corion alantóide, que possui uma
grande quantidade de vasos
sanguíneos

• Avalia substâncias oculares como


corrosivas e irritantes severos
REBIOTERIO
TESTE DA MEMBRANA CORION
ALANTÓIDE (HETCAM):

• Semi-quantitativo
(hiperemia, hemorragia e
coagulação), após cinco
minutos de aplicação do
produto, puro ou diluído,
sobre a membrana cório-
alantóide.
• método alternativo ao teste
REBIOTERIO de irritação ocular em
coelhos
REBIOTERIO
PELE E EPIDERME EQUIVALENTE:
APLICAÇÕES
Farmacêuticas e Cosméticas
• Triagem de novas formulações Córneo

• Ensaios citotóxicos granular

espinoso
• Pré-clínicos basal

Médicas
• Cicatrização e reparo de feridas
crônicas
• Queimaduras severas
• Transplante tecidual
RECICLANDO PELE DE DOADORES
Prepúcio Lavagem Limpeza

epiderme
Após
16-18h

derme
Cortes de 3mm
Dia 2 CEP-HU/USP: 943/09
Separação
REBIOTERIO
PELE E EPIDERME EQUIVALENTE
+KeM
AIR LIQUID 2 WEEKS LATER
INTERFACE
Corneum

Granulosum

DERMAL Spinous
EQUIVALENT: basal
COLLAGEN+ KERATINOCYTES AND
FIBROBLASTS MELANOCYTES SKIN
DERMAL EQUIVALENT RECONSTRUCTED
Collagen
IV film KC
s

12 DAYS IN
1 DAY IN EPIDERMAL
AIR-LIQUID EQUIVALENTS
MEDIUM
INTERFACE
• EPIDERME EQUIVALENTE IN VITRO
VMR= validated methods references
corneum
granulosum
spinous
basal
Skin
USP (2014) EpiSkin EpiDerm™ Tisue SkinEthic Human epidermis
L´Oreal Model L´Oreal
MatTek®

• Teste Draize
• Irritação e corrosão
• cutânea
INVASÃO DE MELANOMA EM PELE:
MODELO IN VITRO
Keratinocytes Artificial Skin

Melanocytes

Fibroblasts Melanoma In Reconstructed Skin

Melanoma
SISTEMAS DE MICROFULÍDICA, ÓRGÃOS E BODY ON A CHIP
TODOS OS MODELOS POSSUEM LIMITAÇÕES

• Absorção, distribuição, metabolismo, eliminação e toxicidade são


propriedades cruciais para o sucesso clínico final;

• Foi estimado que aproximadamente 50% dos falham devido à


eficácia inaceitável
• baixa biodisponibilidade como um resultado de absorção
intestinal inefetiva e
• estabilidade metabólica indesejável;

• Também foi estimado que até 40% dos candidatos a medicamentos


REBIOTERIO
falharam no passado devido as questões de segurança.
Links para consulta
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-
guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-4-
health-effects_20745788).
BCOP http://www.oecd-
ilibrary.org/environment/test-no-437-bovine-
corneal-opacity-and-permeability-test-method-
for-identifying-ocular-corrosives-and-severe-
irritants_9789264076303-en
HETCAM
https://ntp.niehs.nih.gov/iccvam/docs/.../ivocula
r-hetcam.pdf
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=M
ARIA+ENGLER
revistapesquisa.fapesp.br/2016/07/14/pele-de-
laboratorio/

REBIOTERIO Contato para esclarecimento de


duvidas: cebiot_curso@icb.usp.br

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