LECCIÓN 1

1. ¿Por qué se hace preciso la acción de un quelante sobre

los iones metálicos de una muestra durante el paso de lisis en
ebullición a 100ºC?¿Qué pasaría si no se usa un agente
quelante como la matriz InstaGene?

Impiden la ruptura o degradación del ADN al atrapar los iones

metálicos que catalizan la ruptura de la hebra de ADN sometida a
elevadas temperaturas en condiciones de baja fuerza iónica, de
manera que luego podamos estudiar la molécula en condiciones
óptimas.
Si no usamos un quelante, se produciría la roptura del ADN por
lugares que no nos interesan.

2. ¿Qué parte de las células se precisa para hacer PCR?

Los cromosomas presentes en el núcleo de la célula.

3. ¿Qué estructuras necesitamos romper para liberar el

ADN celular?

Puesto que está en el núcleo, será necesario romper las

membranas que envuelven tanto a la célula como al núcleo.

4. ¿Por qué piensas que hay que mantener el ADN junto

con la matriz InstaGene después de hervir las muestras?

Para liberar el DNA para posteriores usos.

LECCIÓN 2

1. ¿Por qué es preciso un cebador para cada una de las

cadenas del segmento de ADN a amplificar?

Se necesitan dos para la reacción de PCR, uno en el extremo 3' y

el otro complementario para la otra hebra. Son de aproximadamente
20 nucleótidos, porque es la cantidad necesaria para que de manera
probable coincida en un sitio de la cadena de ADN.

2. ¿Por qué el Taq ADN-polimerasa se llama así?

Proviene de la bacteria thermus aquaticus, que es termófila, en

especial a 72ºC, teniendo un vida de 40 minutos a 94ºC. Esto hace
que sea muy utilizada para los ciclos de temperatura de la PCR.
 3. ¿Por qué hay nucleótidos en la master-mix? Cita el resto
de componentes de la master-mix e indica la función de cada
uno de ellos.

Porque son necesarios tanto como cebadores / iniciadores, como

para polimerizar el nuevo ADN (dNTP). El resto de componentes es el
tampón (mantener el pH) y cloruro de magnesio (actúan como
cofactores de la polimerasa)

4. Describe los tres pasos principales de cada ciclo de

amplificación por PCR e indica a qué temperaturas ocurre
cada un de ellos.

• Desnaturalización a 94ºC(se separan las dos hebras de las

cuales está constituido).
• Alineamiento a 60ºC (cebador se unirá a su secuencia
complementaria en el ADN molde).
• Extensión a 72ºC (La polimerasa sintetiza una nueva hebra de
ADN complementaria a la hebra molde añadiendo los dNTP
complementarios en dirección 5'→ 3', uniendo el grupo 5'-
fosfato de los dNTP con el grupo 3'-hidroxilo del final de la
hebra de ADN creciente).

5. Explica porqué la longitud precisa del ADN diana no es

amplificada hasta el tercer ciclo. Puedes hacerlo apoyándote
en un esquema gráfico o dibujo.

Porque es en la tercera etapa de ampliación cuando la cadena

molde de DNA tiene la longitud adecuada para hacer la cadena
complementaria.

LECCIÓN 3

1. ¿Cuál es la diferencia entre un intrón y un exón?

Un intrón es una región del ADN que debe ser eliminada del
transcrito primario de ARN, a diferencia de los exones que son
regiones que codifican para una determinada proteína. Por tanto, el
intrón no contiene la información genética.

2. ¿Por qué los dos posibles productos de la PCR difieren

en 300pb?

Debido a la presencia / ausencia de secuencias ALU, de unos 300

pares de bases.

3. ¿Por qué los fragmentos más pequeños se desplazan

más lejos en la electroforesis?
 Por el peso de los componentes, desplazándose más el que menor
peso posea.

4. ¿Qué controles se usan en este experimento? Cuál es la

importancia de usarlos? ¿Podrían haberse usados otros?

Se han empleado controles de homocigotos con presencia en

ambos cromosomas del a secuencia ALU, con ausencia en ambos; y
heterocigotos (presencia en un cromosoma, y ausencia en el otro). Y
se deben usar porque serán los referentes, y los posibles resultados
de nuestra práctica.

LECCIÓN 4

En la siguiente imagen se muestra el resultado de la

electroforesis realizada en el laboratorio con las muestras del
grupo LACC2.

1. ¿Cuál es tu genotipo para la inserción ALU en la región

PV92 de tu cromosoma 16?

Mi pocillo es el número 17, lo cual indica homocigoto con ausencia

de ALU.

2. ¿Cuáles son las frecuencias genotípicas de los

homocigotos (+/+), homocigotos (-/-) e heterocigotos (+/-) en
el grupo LACC2? Cubre la siguiente tabla con los resultados:

Genotipo Número Frecuencia

Homocigotos (+/+) 2 0,18 = 18%
Homocigotos (-/-) 8 0,73 = 73%
Heterocigotos (+/-) 1 0,09 = 9%
Total 11 100%

3. ¿Cuál es la secuencia de alelos en el grupo?

Alelo Número Frecuencia

 Alelos (+) 5 p = 0,227
Alelos (-) 17 q = 0,773
Total 22 -

4. En la siguiente tabla están los mismos datos para una

muestra aleatoria de una población determinada; calcula las
frecuencias alélicas para esa población:

Genotipo Número Frecuencia

Homocigotos (+/+) 2422 0,24 = 24%
Homocigotos (-/-) 2050 0,21 = 21%
Heterocigotos (+/-) 5528 0,55 = 55%
Total 10000 100%

Alelo Número Frecuencia

Alelos (+) 10372 p = 0,52
Alelos (-) 9628 q = 0,48
Total 20000 -

5. Comparando los datos de LACC2 con los de la población

del ejemplo anterior, ¿piensas que tenían que coincidir? ¿A
que piensas que se pueden atribuir las diferencias o
semejanzas?

No, no tienen porqué coincidir, pues se tratan de individuos

diferentes. Las diferencias o semejanzas son cuestiones de azar.

6. Usando los valores ‘p’ y ‘q’ obtenidos en la cuestión 3,

calcula p2, 2pq y q2. Si el resultado fuera el mismo que los
que obtuviste en la cuestión 2, la población LACC2 se diría
que está en equilibrio genético de Hardy-Weinberg. En otro
caso, si las frecuencias genotípicas son distintas, ¿a qué
piensas que se puede deber la diferencia?

p2 = 0,05 q2 = 0,60 2pq = 0,35

Debida a endogamia, emparejamiento selectivo y a una población

de pequeño tamaño.

7. Usando los valores ‘p’ y ‘q’ obtenidos en la cuestión 4,

calcula p2, 2pq y q2. ¿Se corresponden los valores obtenidos
con los de la tabla del enunciado de la cuestión 4? Supón que
la población hipotética de este ejercicio está en equilibrio de
Hardy-Weinberg.

p2 = 0,27 q2 = 0,23 2pq = 0,50

 Sí, podríamos decir que sí se corresponden; por tanto, la población
estaría en equilibrio de Hardy – Weinberg.