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Cinética Enzimática

Profª. Thais Milessi-Esteves


Engenharia de Bioprocessos
EBP012 - 2021
Enzimas - Definição
 São heteropolímeros de L-aminoácidos sintetizados pelas
células (> 100 resíduos de aminoácidos).

H H H O H
O O O
+ +
H3N C C
-
+ H3N C C
-
H3N+
C C N C C
R1
O
R2
O O-
R1 H R2

H2O
Ligação peptídica

Representação esquemática da formação de uma ligação peptídica.

 Função: catalisadores de reações bioquímicas


Enzimas – Uso Industrial
 Vantagens: alta atividade e alta especificidade; raramente
formam subprodutos, condições suaves (T e P)

 Desvantagens: solúveis, frágeis (calor, pH, solvente orgânico,


detergentes, etc..)
Catálise Enzimática
 Ereagentes alta ⇨ atinge estado de transição ⇨ alta
probabilidade de reação.
 DG‡ = quantidade de energia necessária para levar
todas as moléculas à condição de transição no ponto
mais elevado da barreira de ativação.

catalisador combina-se
com reagente produzindo
um estado de transição
com energia de ativação
menor do que o estado de
transição da reação não
catalisada.

Energia livre de ativação (DG‡) de reações catalisadas e não catalisadas


Medida da Velocidade de uma reação
enzimática
 Consideremos uma reação catalisada por uma enzima E,

S 

E
P
 Substrato   Produto
 [S] ou [P] são facilmente medidas.

 Velocidade da reação enzimática dever ser medida, sempre


que possível, no instante t = 0 ⇨ velocidade inicial de
consumo do substrato ou de formação de produto ⇨ < 10%
de conversão.
Leonor Michaelis e Maud Menten

Cinética de ordem ZERO


Enzima SATURADA

Cinética de 1ª ordem

Vmáx  S  Equação de
v0 
KM  S  Michaelis-Menten
Curva de Michaelis-Menten

Efeito [S] na velocidade de uma reação catalisada por enzima:


curva de Michaelis-Menten.
Significado de Vmáx e KM na cinética de Michaelis-Menten.
DETERMINAÇÃO DOS PARÂMETROS
CINÉTICOS - VMÁX E KM

 Uma transformação freqüente da equação de Michaelis-Menten


útil na estimativa de Vmáx e KM é obtida por linearização:

1 K 1 1
 M  (Lineweaver-Burk)
v0 Vmáx S Vmáx
y b x a
Inibição Enzimática
Inibição Competitiva
Velocidades de uma reação enzimática na ausência e presença
de inibidor competitivo.

Se aumenta-se [S] ⇨ vcom inibidor ≃ vsem inibidor


Inibição Incompetitiva
Inibição Mista
Inibição Mista
Inibição Mista Clássica (Não Competitiva)
Inibição Irreversível
 Inibidores irreversíveis combinam-se com um grupo funcional na
molécula da enzima ou destroem ou ainda formam uma associação
covalente bastante estável (Inativador suicida).
 Cinética similar ao inibidor não competitivo (Vmax diminui mas Km
não se altera)
 São úteis como ferramentas no estudo de mecanismos de reação, por
exemplo identificação de aminoácidos importantes para a catálise no
sítio ativo.
Efeito do pH e da Temperatura

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