Cinética Microbiana

Profª. Thais Milessi-Esteves

Engenharia de Bioprocessos
EBP012 - 2021
Atividade Celular:
nutrientes & ambiente sistema trifásico
 CARACTERIZANDO A ATIVIDADE CELULAR
NUTRIENTES, MEIOS DE CULTIVO E ATIVIDADE CELULAR
Atividade celular = resposta ao ambiente físico-químico.

● Sistema trifásico (G-L-S)

Interações entre a célula e ambiente (meio de cultura)

 Nutrientes, meios de cultivo e atividade celular

Em condições nutricionais balanceadas e em condições adequadas de

pH, temperatura e disponibilidade de oxigênio (ou não), o crescimento
ocorre por duplicação de células.
CRESCIMENTO É RESULTADO DO METABOLISMO ....

RESPIRAÇÃO:
5 NADH + 1/2O2+H+ → H2O +ATP + NAD +
6
 Eng. Bioquímica – visão macro vs biologia de sistemas – visão micro

7
NUTRIENTES, MEIOS DE CULTIVO E ATIVIDADE CELULAR
- Meios de cultivo

Meios de cultivo devem conter, de forma balanceada, os nutrientes

necessários para sustentar o crescimento
Composição da matéria orgânica
Elementos %
C 50
matéria
orgânica O 20
N 14
H 8
P 3
S 1
K 1
Na 1
Ca 0,5
água Mg 0,5
Cl 0,5
Micronutrientes: Fe 0,5
Mn, Co, Cu, Mb, Zn Micronutr. 0,3
 MEIOS DE CULTIVO

POR ISSO, OS MEIOS DE CULTIVO CONTÉM:

Carboidratos Fonte de C e energia

Sais de amônio, nitratos e uréia Fonte de N
Materiais ricos em proteínas
Oxigênio (ou não) e Água
Sais de fosfato, sulfato, potássio,
sódio, cálcio e dos micronutrientes

Ou hidrocarbonetos, glicerol, etanol...

ESCOLHA E FORMULAÇÃO DE UM MEIO DE CULTIVO:

QUAL MEIO? QUAIS NUTRIENTES? QUAL QUANTIDADE?
 Nutrientes para a Célula
Formulação do meio de cultura

extracelulares

VISÃO MUITO SIMPLIFICADA DA REALIDADE

MAS VÁLIDA PARA AVALIAÇÃO PRELIMINAR
 ESTEQUIOMETRIA DA ATIVIDADE CELULAR

 Estequiometria da formação de produtos e biomassa durante um cultivo

 Num meio de cultura adequado, os microrganismos extraem nutrientes do meio e

os convertem em compostos biológicos.
 Utilização dos nutrientes: parte para a produção de energia, parte para o
crescimento e parte para a biossíntese e formação de produtos.
 Como resultado da utilização dos nutrientes, a massa celular aumenta com o
tempo (geralmente...)

SUBSTRATOS CÉLULAS PRODUTOS CÉLULAS

CONSUMIDOS EXTRACELUL + FORMADAS
FORMADOS

∑ ΔS X ∑ ΔP + ΔX
 ESTEQUIOMETRIA DA ATIVIDADE CELULAR

SUBSTRATOS CÉLULAS PRODUTOS CÉLULAS

CONSUMIDOS EXTRACELUL + FORMADAS
FORMADOS

∑ ΔS X ∑ ΔP + ΔX

DETALHANDO A ESTEQUIOMETRIA: QUAIS SUBSTRATOS? QUAIS PRODUTOS?

DEPENDE DO OBJETIVO DO CULTIVO, QUE DEFINIRÁ O TIPO DE

METABOLISMO A SER ATIVADO.

OBJETIVO FONTE O2 PRODUTOS

DE C E N
PRODUZIR BIOMASSA SIM SIM BIOMASSA, CO2, H2O E
SUBPRODUTOS
PRODUZIR PRODUTOS SIM NÃO DEPENDE DO ORGANISMO, DO
FERMENTATIVOS METABOLISMO PARA A FORMAÇÃO
DO PRODUTO
Observação: válido para organismo facultativo
 ESTEQUIOMETRIA DA ATIVIDADE CELULAR

SUBSTRATOS CÉLULAS PRODUTOS CÉLULAS

CONSUMIDOS EXTRACELUL + FORMADAS
FORMADOS

∑ ΔS X ∑ ΔP + ΔX

Equação estequiométrica geral para a atividade celular

→
 
𝑎𝐹𝐶 + 𝑏𝐹𝑁 +𝑐𝑂 2 𝑋 d 𝐶𝑂 2 +𝑒 𝐻 2 𝑂+ 𝑓𝑋 + 𝑔𝑃1 +h 𝑃2 +…

Supondo crescimento de uma certa levedura em condições aeróbias, em meio contendo

glicose como fonte de carbono, amônia como fonte de nitrogênio, produzindo apenas
ácido acético como subproduto, podemos substituir

𝐹𝐶
  𝑝𝑜𝑟 𝐶 6 𝐻 12 𝑂6 𝑃
  1 𝑝𝑜𝑟 𝐶 2 𝐻 4 𝑂 2 e X por ?
𝐹𝑁
  𝑝𝑜𝑟 𝑁𝐻 3
 14
(L)

(B)

(L)
(B)

(B)
(B)
(F)
(F)
Comp. média

L – Levedura; B – Bactéria; F – Fungo filamentoso

 Equação estequiométrica geral para a atividade celular

→
 
𝑎𝐹𝐶 + 𝑏𝐹𝑁 +𝑐𝑂 2 𝑋 d 𝐶𝑂 2 +𝑒 𝐻 2 𝑂+ 𝑓𝑋 + 𝑔𝑃1

𝐹𝐶
  =𝐶6 𝐻 12 𝑂 6 𝑃
  1=𝐶 2 𝐻 4 𝑂 2
𝐹𝑁
  = 𝑁𝐻 3  𝑋 =𝐶 𝐻 1,81 𝑁 0 , 52 𝑂 0,21

TODOS OS TERMOS DA EQUAÇÃO

DEVEM SER EXPRESSOS EM FÓRMULA
EMPÍRICA OU MÍNIMA (relação entre o
número de átomos de cada espécie e o átomo de
carbono)!
 COMPOSTO FÓRMULA No. de átmos FÓRMULA EMPÍRICA
MOLECULAR de C
GLICOSE 6 =
ÁCIDO ACÉTICO 2 =

Supondo crescimento de uma certa levedura em condições aeróbias, em meio contendo

glicose como fonte de carbono, amônia como fonte de nitrogênio, produzindo apenas
ácido acético como subproduto, a equação estequiométrica fica:

→
  𝐻 𝑂 +𝑏𝑁 𝐻 +𝑐𝑂 𝑋 d 𝐶𝑂 +𝑒 𝐻 𝑂 +𝑓𝐶 𝐻
𝑎𝐶 2 3 2 2 2 1,81 𝑁 0,52 𝑂 0,21 + 𝑔𝐶 𝐻 2 𝑂 ❑

(glicose) (biomassa) (ácido acético)

 TODOS OS TERMOS DA EQUAÇÃO EXPRESSOS EM FÓRMULA

MÍNIMA
 ESTEQUIOMETRIA DA ATIVIDADE CELULAR

BALANÇO POR ELEMENTO:

→
 
1𝐶 𝐻 𝑚 𝑂 𝑛+ 𝑎𝑁 𝐻 3 +𝑏𝑂 2 𝑋 c 𝐶𝑂 2+𝑑 𝐻 2 𝑂+ 𝑒𝐶 𝐻 𝛼 𝑂 𝛽 𝑁 𝛿 +𝑓𝐶𝐻 𝑝 𝑂 𝑞
FC FN Biomassa Produto

EQUAÇÃO ELEMENTO BALANÇO

(I) C 1=c+e+f
(II) N a = δ.e
(III) H m + 3.a = 2.d + α.e + p.f
(IV) O n + 2.b = 2.c + d + β.e + q.f
Determinação dos coeficientes estequiométricos por balanço para os
elementos: 4 equações e 6 incógnitas.
GL = 2: Sistema indeterminado.
 COEFICIENTES DE RENDIMENTO TEÓRICOS/VERDADEIROS
(FATORES DE CONVERSÃO)

RELAÇÃO QUE EXPRESSA A QUANTIDADE FORMADA DE

ALGUMA ESPÉCIE EM FUNÇÃO DO CONSUMO DE UM
MATERIAL (OU FORMAÇÃO DE MATERIAL) DE OUTRA
ESPÉCIE.
(CALCULADOS A PARTIR DOS COEFICIENTES ESTEQUIOMÉTRICOS)

Conhecendo-se os valores dos coeficientes da equação estequiométrica de

uma reação global é possível estabelecer relações entre a quantidade de
substratos consumida e as quantidades de biomassa, produto e co 2 formadas.

SEMPRE RESPEITANDO A LEI DA CONSERVAÇÃO DE MASSAS!!!

   COEFICIENTES DE RENDIMENTO TEÓRICOS/VERDADEIROS
(FATORES DE CONVERSÃO) - Y  i/ j teo
Geralmente
“i” – representa a espécie sendo formada
“j” – representa a espécie sendo consumida ou a biomassa

→
 
1𝐶 𝐻 𝑚 𝑂 𝑛+ 𝑎𝑁 𝐻 3 +𝑏𝑂 2 𝑋 c 𝐶𝑂 2+𝑑 𝐻 2 𝑂+ 𝑒𝐶 𝐻 𝛼 𝑂 𝛽 𝑁 𝛿 +𝑓𝐶𝐻 𝑝 𝑂 𝑞
FC FN Biomassa Produto

Alguns dos coeficientes de rendimento mais comuns

     

 
  RQ = “Respiratory Quotient”

  RQT=1 para crescimento em condições aeróbias, s

formação de produto metabólico.
 BALANÇO PARA O GRAU DE REDUÇÃO
Várias reações intra-celulares são de oxirredução...

Então, balancear os elétrons transferidos é tão importante quanto balancear

elementos...
 BALANÇO PARA O GRAU DE REDUÇÃO

Grau de redução (γ) dos compostos pode ser usado para o

balanceamento de protons e elétrons transferidos em biorreações.

Definição de grau de redução (γ) para compostos orgânicos: número de

equivalentes de eletróns disponíveis por grama de átomo de c. Os elétrons
disponíveis seriam aqueles transferidos para o oxigênio durante a oxidação
de um composto a co2 e h2o.

γ de um elemento = valência do elemento em um composto

ELEMENTO VALÊNCIA
C +4
H +1
O -2
N -3 (NH3); 0 (N2); 5 (NO3-)
 GRAU DE REDUÇÃO

POR EXEMPLO, CALCULANDO O GRAU DE REDUÇÃO DA GLICOSE:

FÓRMULA No de átomos γ
de carbono
MOLECULAR 6
MOLECULAR 6
EMPÍRICA 1

EMPÍRICA 1
 BALANÇO PARA O GRAU DE REDUÇÃO
Aplicando o conceito de balanço para o grau de redução na equação
estequiométrica geral:

→
 
1𝐶 𝐻 𝑚 𝑂 𝑛+ 𝑎𝑁 𝐻 3 +𝑏𝑂 2 𝑋 c 𝐶𝑂 2+𝑑 𝐻 2 𝑂+ 𝑒𝐶 𝐻 𝛼 𝑂 𝛽 𝑁 𝛿 +𝑓𝐶𝐻 𝑝 𝑂 𝑞
FC FN Biomassa Produto

  )=)

1.
  𝛾 𝐹𝐶 +𝑎 . 𝛾 𝐹 𝑁 + 𝑏 . 𝛾 𝑂 2 =𝑐 . 𝛾 𝐶𝑂 2+𝑑 . 𝛾 𝐻 2 𝑂 +𝑒 . 𝛾 𝐵𝐼𝑂𝑀𝐴𝑆𝑆𝐴 + 𝑓 . 𝛾 𝑃𝑅𝑂𝐷 . 𝑀𝐸𝑇 .

Para calcular os graus de redução de cada composto

COMPOSTO FC FN O2 BIOMASSA PROD.

MET.
γ 4+m-2.n -3+3=0 2.(-2)=-4 +4-4=0 +2-2=0 4+α-2.β-3.δ 4+p-2.q
 PREVIOUSLY: BALANÇO PARA O GRAU DE REDUÇÃO.

  )=)

1.
  𝛾 𝐺𝐿𝐼𝐶 + 𝑎 . 𝛾 𝑁𝐻 3 +𝑏 . 𝛾 𝑂 2= 𝑐 . 𝛾 𝐶𝑂 2 +𝑑 . 𝛾 𝐻 2 𝑂 +𝑒 . 𝛾 𝐵𝐼𝑂𝑀𝐴𝑆𝑆𝐴 + 𝑓 . 𝛾 𝐴𝐶 . 𝐴𝐶𝐸𝑇𝐼𝐶𝑂 .

Substituindo no balanço para graus de redução

4
  − 4. 𝑏=3,83. 𝑒+ 4. 𝑓 .
 COMBINANDO O BALANÇO PARA GRAU DE REDUÇÃO E
PARA ELEMENTOS

  1

EQUAÇÃO BALANÇO
(I) 1=c+e+f
Balanço para
(II) a = 0,52.e
elementos
(III) 2+ 3.a = 2.d + 1,81.e + 2.f
(IV) 1 + 2.b = 2.c + d + 0,21.e + 1.f
Balanço para grau
(V) 4 – 4.b = 3,83.e + 4.f de redução

Determinação dos coeficientes estequiométricos por balanço de elementos e de grau

de redução: 5 equações e 6 incógnitas.
GL = 1: Sistema indeterminado.

PELO MENOS 1 INFORMAÇÃO ADICIONAL É NECESSÁRIA PARA

CALCULAR OS COEFICIENTES!
Cálculo do rendimento teórico (YP/S) utilizando o grau
de redução

  𝜎𝑆 γ𝑆
𝑌 𝑃 /𝑆 =
𝜎𝑃 γ𝑃

  𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑑𝑒 𝐶 𝑑𝑜 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑠𝑡𝑜
𝜎=
𝑀𝑀 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑠𝑡𝑜

Exemplo
Calcule pelo grau de redução o coeficiente de rendimento teórico (YP/S) de
um bioprocesso onde glicose (S) é transformada ácido acético (P).
 O cálculo dos coeficientes estequiométricos a partir do balanço para os
elementos “c”, “n”, “o” e “h” e do balanço do grau de redução nem sempre dá
certo...

POR QUE?
- Número de Incógnitas (Coeficientes) > Número De Equações
- Equações Linearmente Dependentes
- Não Representa Bem A Complexa Realidade De Um Bioprocesso...
- Solução Matematematicamente Possível Não Representa A Realidade (Por Exemplo,
Coeficientes Negativos)...

QUAL A SOLUÇÃO?
Mais informações sobre a conversão de substrato em biomassa, co2, produtos...

OBTIDAS A PARTIR DE DADOS

EXPERIMENTAIS
CINÉTICA DE UM PROCESSO FERMENTATIVO

Estes perfis representam o ponto de

partida para a descrição quantitativa
de um Bioprocesso.

Quando as conclusões sobre um

cultivo forem baseadas unicamente
em 2 valores (Ex: inicial e final) não
se pode afirmar que se realizou um
estudo cinético

Estes valores representam parte de

um conjunto de dados, necessários
ao dimensionamento de uma escala
produtiva.
 CINÉTICA DE UM PROCESSO FERMENTATIVO

A cinética possibilita uma comparação quantitativa entre diferentes

condições de cultivo (pH, temperatura, aeração, etc) através de variáveis
como: velocidades de transformação e fatores de conversão.

Os critérios de comparação entre diferentes condições são dependentes

do processo em questão (ex: se o tempo é de fundamental importância
por razões econômicas, as produtividades devem ser empregadas como
parâmetro).
Como calcular as velocidades de consumo de substrato, formação de
produto e produção de biomassa?

𝑑𝑋
𝑟  𝑋=
𝑑𝑡

𝑑𝑆
𝑟  𝑆=−
𝑑𝑡

𝑑𝑃
𝑟  𝑃=
𝑑𝑡
PARÂMETROS DE TRANSFORMAÇÃO

Um parâmetro especial, cujo interesse prático está na avaliação do

processo fermentativo é a PRODUTIVIDADE, a qual pode ser
aplicada em biomassa ou produto:

  𝑋 −𝑋 0   𝑃−𝑃0
𝑄 𝑋= 𝑄 𝑃=
𝑡𝑓 𝑡𝑓

Representa a velocidade média de crescimento ou formação de

produto correspondente ao tempo total de fermentação!
 VELOCIDADES ESPECÍFICAS

Concentração de células aumenta com o tempo: mais lógico analisar

os valores de velocidades instantâneas em relação à concentração de
células (X)

  1 𝑑𝑋   1 𝑑𝑆   1 𝑑𝑃
µ 𝑋= .
𝑋 𝑑𝑡 µ 𝑆= . −
𝑋 𝑑𝑡( ) µ 𝑃= .
𝑋 𝑑𝑡

(gP/gX/h)
FATORES DE CONVERSÃO

Y  X/S 1

Y  P/S 2

3
Y  P/X
 FATORES DE CONVERSÃO

O fator de conversão de substrato em células é também muito útil na

definição de substrato limitante, ou seja, o valor de S0 é que definirá o
valor de Xf.

Y  X/S X  f

As mesmas considerações valem para os outros fatores, mas como

normalmente estes fatores não são constantes, temos:

Y  X/S Y  P/S

Y  P/X
 FATORES DE CONVERSÃO

Combinando estas equações temos que:

Y  P/X

Estes parâmetros são influenciados por vários fatores:

 Composição do meio (natureza de FC e FN)

 pH
 Temperatura
 Transferência de oxigênio
 Tempo de mistura
 FATORES DE CONVERSÃO

Para que serve YP/S?

 Referência para avaliar o comportamento de um determinado

processo e adotar decisões sobre a ação a seguir
 Se o valor estiver afastado do teórico, significa que precisamos de
investigação para otimização

Tendo conhecimento do fator de conversão teórico, podemos calcular

a Eficiência de um Bioprocesso (η).

η 
 FATORES DE CONVERSÃO TEÓRICO

Estequiometria:

180 g/mol 2x (46 g/mol)

92 g/mol

  92 getoh / mol  
Y P / Steo= =0,51 𝑔 / 𝑔
180 𝑔𝑔𝑙𝑖𝑐𝑜𝑠𝑒 / 𝑚𝑜𝑙
 FATOR DE MANUTENÇÃO

Considerando que a energia do substrato seja utilizada não somente

para crescimento, mas também para manutenção, podemos dizer que
um determinado substrato consumido não produzirá sempre
biomassa.

Parte da energia é desviada para a manutenção das funções vitais do

microrganismo

Assim, teremos o consumo específico de substrato para manutenção

(m)

  (𝑟 𝑆 ) 𝑚
𝑚=
𝑋

Onde (rs)m é a velocidade de consumo de substrato devido a

manutenção (gS/gX.h)
 Exemplo 2

Calcule o fator de rendimento teórico (YP/S) de substrato em produto

da reação de fermentação lática representada abaixo