Roteiro de aula prática - Extração de DNA Vegetal
O DNA (Ácido extraído a partir de material vegetal
desoxirribonucleico) é uma molécula
orgânica responsável pelo
armazenamento e transmissão das
informações genéticas que compõem
os organismos vivos. Nos organismos
eucarióticos, como animais, plantas e
fungos, o DNA está presente no
núcleo das células sendo composto
por três substâncias químicas, que
são as bases nitrogenadas, um açúcar
formado por cinco átomos de carbono
(pentose) e um radical de ácido
fosfórico (FIGURA 01).
FIGURA 01: (A) Microscopia eletrônica
de DNA. (B) Composição do DNA,
onde P – Radical ácido fosfórico; Aç. –
Pentose; G – Guanina; T – Timina; C –
Citocina; A – Adenina.
O tamanho microscópico do
DNA faz com que só seja possível
observar essa molécula utilizando
métodos avançados de microscopia
eletrônica. No entanto, é possível
identificar a presença da molécula de
DNA em solução a partir da extração
de uma grande quantidade dessa
molécula de células vegetais. Com
isso, o objetivo desse roteiro de aula é
contribuir para a identificação do DNA
em uma solução especial (lise).
Materiais necessários
- almofariz;
- pistilo;
- becker;
- bastão de vidro;
- tubo de ensaio;
- peneira;
- morangos;
- água quente;
- álcool 70º g.l gelado
- detergente;
- sal;
- colher;
Procedimento
ETAPA 01: Coloque 150ml de água
quente no becker. Acrescente uma
colher de detergente líquido incolor e
uma colher de chá de sal e misture
bem com o auxílio de uma colher,
porém devagar para não fazer
espuma. Essa é a solução de lise
que vamos utilizar para extrair o
DNA do material vegetal.
ETAPA 02: Pique o morango em
pequenos pedaços e coloque tudo
dentro do almofariz e amasse eles
com o auxílio do pistilo até obter uma
pasta quase homogênea. Depois
transfira para outro becker.
ETAPA 03: Coloque cerca de ⅓ da
mistura da solução de lise junto com o
morango macerado. Misture
levemente com o bastão de vidro.
Deixe a solução parada por 10
minutos.
ETAPA 04: Coloque a peneira sobre o
becker limpo e passe a mistura pela
peneira para retirar os pedaços de
morango que restaram.
ETAPA 05: Coloque cerca de 3 dedos
do líquido peneirado em um tubo de
ensaio.
ETAPA 06: Despejar delicadamente
no tubo (pela parede do tubo), sobre a
solução, dois volumes de álcool
gelado. Não misturar o álcool com a
solução. Aguardar cerca de 3 minutos
para o DNA começar a precipitar na
interfase.
ETAPA 07: Usar o bastão de vidro
para enrolar as moléculas de DNA,
gire o palito na interface entre a
solução e o álcool.
Após terminar as observações,
responda as questões abaixo:
1 - Por que é necessário macerar o
morango?
2 - Em que etapa do procedimento
ocorre o rompimento das membranas
das células do
morango? Explique.
3 - Por que você não pode ver a dupla
hélice do DNA extraído?
Sugestões de atividades correlatas
Durante o período de incubação
discutir o protocolo com os estudantes
usando o molde da célula vegetal e
solicitar a eles que apontem as
membranas da célula e do núcleo que
estariam sendo rompidas pela ação do
detergente.