DETERMINACION DE pH Y PREPARACION DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

Carol Ibarra, Andrés Rosero

Laboratorio de Bioquímica I

Programa de Química, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Universidad de Nariño, Ciudad Universitaria Torobajo, AA 1157
San Juan de Pasto.

RESUMEN: Se prepararon 3 soluciones a partir de soluciones con concentración conocida;

se mezclaron cantidades diferentes de estas en 6 tubos de ensayo a los cuales se les
agrego indicador creando una escala de pH de 3 a 5. Luego se tomaron 10 tubos de ensayo
a los cuales se les agrego soluciones diferentes con concentración conocida, se agrego un
indicador y se procedió a medir el pH patrón basándose en la escala anterior, se les midió el
pH con papel tornasol, con el pH metro y se calculo el pH teórico; como siguiente paso se
midió el pH de diferentes sustancias, luego se preparo la solución buffer y se le realizando
diferentes pruebas para medir la variación de pH, por último se realizaron diferentes cálculos
para preparara una solución amortiguadora problema de fosfato 0.5 M a un pH de 7,5.

PALABRAS CLAVE: Indicador, Concentración, Variación de pH, soluciones amortiguadores

INTRODUCCION El ion acetato es la base conjugada del

Según la definición de Bronsted (1879–
1947) y Thomas Lowry (1874–1936) en
1923 un acido está definido como una
molécula que cede protones (H+) y una
base como la molécula que acepta el
protón. El ejemplo más claro es la
molécula de agua ya que ella es
anfiprotica ósea se comporta como un
acido liberando el protón y formando el
Ion hidroxilo.
acido acético y el ion amonio es el acido
conjugado del amoniaco.
La acidez y la alcalinidad de una solución
se la expresa por medio del logaritmo
negativo de la concentración (mol / L) de
los iones H+ presentes en ella; al valor
obtenido se le llama pH de la solución.

Ahora si se conoce el valor de la

Cuando se comporta como una base,
acepta un protón para formal el ion
hidronio (H3O+).
Cuando un ácido y una base reaccionan,
los productos son un nuevo ácido y base,
los cuales respectivamente se les llama
acido y base conjugados.
Por ejemplo:
concentración de iones hidronio (H3O+) se
puede calcular el valor de la concentración
de iones hidroxilo (OH) utilizando la
siguiente ecuación
Donde en soluciones acuosas KW se
conoce como el producto iónico del agua
el cual es de 1x10-14 a 250C.
Las soluciones amortiguadoras son
soluciones de ácidos, HA, o bases débiles
con sales, NaA, de estos electrolitos, que
tienen un ion común y poseen la
propiedad de mantener el pH de las
soluciones más o menos constantes a
pesar de adiciones de cantidades
pequeñas de ácidos o bases fuertes.
El equilibrio involucrado es el del ácido o
la base débil, en donde la concentración
del anion común A, proviene casi
exclusivamente de la sal, NaA.
HA= H+ + AKa = [H+] x [ HCO3-]
[HA]
[H+] = Ka [HA]
[A-]
Ka = [ ácido ]
[ sal ]
Ka es un valor constante y, se conoce el
pH de la solución sacando el logaritmo a
la ecuación que esta igualada a [H] y
queda así:
pH = pKa + log [A+]
[HA]
(Ec de Henderson Hasselbalch)
Cada vez que se adiciona cierto número
de moles de ácido fuerte se observa un
aumento de la [H+] y el equilibrio se
rompe momentáneamente. El sistema
trata de restablecer el equilibrio, tratando
de disminuir la [H+] aumentada, para lo
cual se desplaza en el sentido inverso,
aumentando la cantidad de ácido HA y
disminuyendo los iones de A-,
manteniendo el pH más o menos
constante.
Si estas mismas moles de ácido fuerte se
agregan al agua el pH cambia
bruscamente. Las disoluciones
amortiguadoras o tampón son muy
importantes en los sistemas químicos y
biológicos. El pH en el cuerpo humano
varía mucho de un fluido a otro; por
ejemplo, el pH de la sangre es alrededor
de 7.4, en tanto que el jugo gástrico
humano es alrededor de 1.5. En la mayor
parte de los casos, estos valores de pH
que son críticos para el funcionamiento
adecuado de las enzimas y del balance de
la presión osmótica, se mantienen gracias
a las disoluciones.
Una disolución amortiguadora debe
contener una concentración relativamente
grande de ácido para reaccionar con los
iones OH- que se añadan; y también debe
contener una concentración semejante de
base para que reaccione con la cantidad
de iones H+ que se añadan. Además, los
componentes ácidos y básicos del
amortiguador no deben consumirse el uno
al otro en una reacción de neutralización.
Estos requerimientos se satisfacen con un
par ácido-base conjugado, por ejemplo, un
ácido débil y su base conjugada
(suministrada por una sal) o una base
débil y su ácido conjugado (suministrada
por una sal).
La medición de pH se efectúa ya sea por
un método calorimétrico, por un
electrométrico o por cálculos analíticos.
Para este último, se usa el pHmetro.
El método calorimétrico se basa en el uso
de colorantes orgánicos complejos que
cambian de color de acuerdo al valor del
pH de una soluciona acuosa. Estas
substancias se conocen como
indicadores. Para la mayoría de los casos,
aquellos requieren de un rango de pH
entre 4.0 y 8.4. El método potenciometrico
utiliza el sistema del electrodo que
consiste de un sensor cuyo voltaje varia
proporcionalmente a la actividad de iones
hidrogeno de la solución y un electrodo de
referencia que proporciona un voltaje de
referencia constante y estable.
MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos:
– pH metro 5.0 5.0 5.55 0.45
– Papel indicador
– Sln HCl 0.1 M
– Sln CH3COOH 0.1 M 2. Se tomo 10 tubos de ensayo y se
– Sln NH4OH 0.1 M agrego a cada uno 6 ml de sustancias
– Sln NH4Cl 0.1 M con concentración conocida
– Acetato de amonio 0.1 M
preparadas en laboratorio a las cuales
– Fosfato di acido de sodio 1M
– Fosfato acido de sodio 1M se les determino el pH teórico, pH
– Indicador azul de bromofenol patrón y pH potenciometrico. Las
sustancias preparadas en el
Materiales: laboratorio se muestran en la tabla 2.

– Probeta: 100ml Tabla 2.

– 8 beakers: 250ml
tubo Sustancia(12 Concentración
– Pipeta: 1ml, 5ml, 10ml
– 16 tubos de ensayo ml) (N)
– Balón volumétrico: 100ml, 25ml
1 Agua destilada ---------------------
METODOLOGÍA 2 Agua de la llave ---------------------
1. Se realizaron los cálculos para 3 HCl 0.1 M
preparar las siguientes soluciones:
4 HCl 0.01 M
– 50 ml de HCL 0.1 N a partir de HCL 5 HCl 0.001 M
0.5N
– 50 ml de NaOH 0.1 N a partir de 6 HCl 0.0001 M
NaOH 0.5 N
7 CH3COOH 0.1 M
– 0.5 ml de CH3COOH 0.1 N
8 NH4OH 0.1 M
1. Se preparo una escala coloreada de
pH en 6 tubos numerados de 3 a 5 con 9 NH4Cl 0.1 M
unidades de 0.4 en 0.4, a los cuales se
10 Acetato de 0.1 M
les agrego 3 gotas de indicador azul
amonio
de bromofenol. En cada tubo se
mezclo diferentes volúmenes de las
soluciones anteriormente preparada A las anteriores soluciones preparadas a
de CH3COOH, NaOH y agua destilada partir de soluciones de laboratorio se les
como se muestra en la tabla 1: determino los siguientes valores:

Tabla 1. a. A cada tubo de ensayo se le agrego 3

gotas de azul de bromofenol y se
pH CH3COOH ml NaOH ml H2O ml busco el equivalente más cercano de
acuerdo a la escala de pH que ya se
3.0 5.0 0.7 5.83
había elaborado anteriormente, siendo
3.4 5.0 0.42 5.58 este el pH patrón.
b. A las soluciones se les determino el
3.8 5.0 1.0 5.0 pH por medio del papel tornasol
4.2 5.0 2.15 3.85 siendo esta valoración el pH de papel.

4.6 5.0 4.1 1.9

c. A las soluciones se les determino el
pH por medio del pHmetro, siendo
este valor el pH potenciometrico.
d. Por último se calculo teóricamente el
pH de cada solución, siendo este el pH
calculado.
6. Se rotularon 6 beakers (A – F), en A se
colocaron 20 ml de acido acético 0.5M, en
b se colocaron 20ml de acetato de sodio,
se midió el pH, luego se mezclaron
midiendo el nuevo pH. En C se coloco
20ml de agua destilada + 2ml de HCl
0.5M, se mido el pH. En D se colocaron
20 ml de agua destilada + 3ml de NaOH
0.5M, se tomo el pH. A los beaker E y F
se les coloco 20 ml de la solución
resultante de A y B, al beaker E se le
adiciono 2 ml de HCl 0.5M y a F se le
adiciono 2 ml de NaOH 0.5M, se midió el
pH a cada una de ellas.
Por último se realizo los cálculos para
preparar un amortiguador de fosfato 0.5M
a pH 7,5 y se midió su efectividad
agregándole a este acido y base por
separado para medir el pH observando así
la capacidad amortiguadora.
ANALISIS DE RESULTADOS
1. Preparación de soluciones:
Las soluciones iníciales fueron preparadas
utilizando la ley de la disolución la cual se
expresa de la siguiente ecuación:
Ec 1.
C1V1 = C2V2
Despejando V1 se tiene:
Ec 2.
V1 = C2V2 / C1
Se procede a remplazar los valores:
V1 = 0.1 x 6 / 0.5 = 1.2 ml
Este procedimiento se aplica para prepara
las soluciones del primer punto y para
preparar las soluciones utilizadas para
hacer la escala del pH de la tabla 1 y las
soluciones utilizadas para la
determinación del pH de la tabla 2.
2. Preparación de la escala coloreada
Con la combinación de los volúmenes de
acido acético, hidróxido de sodio y agua
especificados en la tabla 1. Se obtuvo una
escala de pH como se muestra en la
figura 1:
Figura 1.
pH 3 pH 5
El azul de bromofenol es un indicador
orgánico de formula C19H10O5SBr4,
tiene un olor característico este tiene un
Intervalo de transición visual: pH 3.0
(amarillo) - pH 4.6 (azul violeta o púrpura),
es irritante y poco nocivo, su estructura
molecular se muestra en la figura 2:
Fig 2.
Este es un compuesto orgánico cuya
forma no disociada tiene un color
diferente al de su acido o base
conjugados. La disociación del indicador
(Ec 3).se acompaña de cambios en su
estructura interna y concominante cambio
de color
Ec 3.
In + H2O ↔ LnH+ + OH-
3. Determinación de pH por diferentes
métodos:
 Para el cloruro de amonio:
Se determino el pH de las 10 soluciones
que están descritas en la tabla 2. Ec 7.
Obteniendo los valores (tabla 3.):
pH = ½ pkw – ½ pKB + ½ log [NH4Cl]
Tabla 3.

tubo pH pH pH pH – El pH patrón corresponde a los valores

de pH aproximados obtenidos de la
papel Potencio teorico Patron
escala que se realizo con las
1 5 6.45 7 4 variaciones de color del indicador azul
de bromofenol con los valores de la
2 6 --------- ------- 4 tabla 1.

3 1 1.03 1 3 – El valor potenciometrico corresponde

a los valores de pH medidos en el
4 2 2.04 2 3.2
pHmetro.
5 3 2.096 3 3.4

6 4 3.97 4 3.6

7 3 3.74 2.86 3.2

1. Preparación de una solución
8 11 11.02 11.13 5 amortiguadora:
Tabla 4.
9 5 5.15 5.12 3.8 Beaker pH medido
10 9 8.94 7 4 A 10 ml ac acético 2,68
B 10 ml acetato de sodio 8.34
Solución A + B 4.57
– El pH teórico de la tabla 3 se cálculo C + D + 20 ml de agua 5.80
de la siguiente forma:
C+ 2mL de HCl 1.83
Para el agua no se calcula el pH porque D + 2mL de NaOH 11.98
se supone que es neutra E (A + B)+ 2mL de HCl 4.57
F (A + B)+ 2mL de 4.42
Para las diferentes concentraciones de NaOH
HCl el cual es acido fuerte se dice que:
2. Preparación de una solución buffer
Ec 4.
de fosfato 0.5 M y pH 7.5:
pH = -Log (H+)
pKa: 7.20
Para el acido acético: pH: 7.5
Concentración: 0.5 M
Ec 5.
Aplicamos la formula de Henderson–
pH = ½ pKA- ½ log [CH3COOH]
Hasselbalch:

Para el hidróxido de amonio: pH = pKa + log [A+]

[HA]
Ec 6.
7.5 – 7.20 = log [A+]
pH = pkw – ½ pKB + ½ log [NH4OH] [HA]
Antilog 0.3 = [A+] 633 ml 1L
[HA] X 0.1L X = 63.3 ml

1.995 = [A+] Volumen de acido:

[HA] 332 ml 1L
X 0.1L X = 33.2 ml
Relación (Base) 1.995
(Acido) 1 Por lo anterior podemos decir que se
necesitan 33.2 ml de fosfato acido mas
Parte total: 1.995 + 1 = 2.995 aprox = 3 63.3 ml de fosfato bibásico; el pH teórico
es de 7.5 y el pH experimental es de 7.06,
Para la base: se le agrego unas gotas de NaOH hasta
3 100% alcanzar el pH de 7.5 y se lo aforo.
1.99 X X = 66.33 % Base
Como la relación de porcentaje supera la
Para el acido: mitad, se calcula el volumen para cada
3 100% uno de los componentes determinando las
1 X X = 33.33 % Acido cantidades de acido y de base para
Moles de la base: preparar la solución buffer.
100 mol 63.33
0.5 mol X Para observar la variación de pH se le
X = 0.3166 mol de la base agrego al buffer obtenido inicialmente 1 ml
de HCl y 1ml de NaOH obteniendo el
Moles del acido: siguiente resultado: ( Tabla 5.)
100 mol 33.33
0.5 mol X Tabla 5.
X = 0.1666 mol del acido Sln (buffer pH 7.06) pH

Concentración para preparar un litro de de Buffrer + 1ml de HCl 0.1 M 6.57

solución:
Buffre + 1 ml de NaOH 0.1 M 7.08
Para la base:
M = 0.3166 mol = 0.3166 M
1L sln En la tabla 1 se observa que no hay una
variación significativa de pH lo cual puede
Para el acido: ser porque el agua tenía un grado de
M = 0.1666mol = 0.1666 M acidez bajo (medido: 6.02); este es
1L sln diferente al teórico por las impurezas que
Se calculas los volúmenes de acido y de el agua puede contener.
base con la formula de las disoluciones
(Ec 1): Con respecto a los valores obtenidos con
el pHmetro (Tabla 2) se puede decir que
– V1 para la base = 0.633 L (633 ml) estos como son de uso general no
– V1 para el acido = 0.332 L (332 ml) estaban correctamente calibrados lo cual
se evidencia en lo que ellos tardan en dar
Se calculan los volúmenes para preparar un valor estable dando origen a un error.
100ml: Los recubrimientos del electrodo, los
posibles cambios en la energía eléctrica
Volumen de base: también pueden ser factores de
interferencia además de esto igualmente unidad de pH a un litro del
también puede influir el medio de trabajo y amortiguador. Esta premisa es de
la limpieza del material. suma importancia en las ciencias ya
que un cambio brusco de pH en un
Los datos de la tabal 2 explican los sistema biológico puede causar
cambios que se dan cuando agregamos al perjuicios que afecten la integridad del
medio una cantidad de acido o base fuerte humano.
reflejándose este en la gran variación de
pH ya que aumentan o disminuyen la BIBLIOGRAFIA
cantidad de iones hidronio en el medio
1. SKOOG, West, Holler. Química
que se está trabajando.
Analítica. Ed Mc Graw Hill, Colombia
1998 Séptima edición
En la preparación del buffer de fosfato 0.5
M a pH 7.5 el pH calculado fue muy
2. Bohinski R. Bioquímica, quinta edición,
cercano al calculado. Cuando se realizo la
editorial Adisson Westey, México
prueba de amortiguamiento se observo
1998.
que la variación de pH fue muy pequeña
lo cual nos confirma la capacidad de
3. MURRAY RK et al. Bioquímica de
amortiguamiento de la solución ya que
Harper, 16° edición, 2004
mantuvo un rango del pH.

4. McKEE y McKEEE J. Bioquímica.

CONCLUSIONES
McGraw-Hill-Interamericana,
1. Los amortiguadores se usan en todos México 2003
los tipos de reacciones químicas en
las que se desean mantener el pH de
una solución a un nivel relativamente
constante
2. Para preparar una disolución
amortiguadora a un pH especifico, se
seleccionara un ácido débil cuyo pKa
sea parecido al pH deseado. esta
selección no solo da el valor de pH
correcto del sistema amortiguador sino
que asegura que tengan cantidades
comparables del ácido y su base
conjugada de la disolución; que son
prerrequisitos para el sistema
amortiguador funcione con eficacia.

3. La capacidad amortiguadora de una

solución se define como el número de
moles de un ácido o de una base
fuerte que ocasiona un cambio de una