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Pratica - Prolina e Estresse Hidrico
Pratica - Prolina e Estresse Hidrico
DETERMINAÇÃO DE PROLINA ( Bates et al. 1973. Plant and Soil 39: 205-207, modificado)
Obtenção do extrato bruto
- macerar 400 mg (0,4g) de folha em 10 mL de ácido sulfosalicílico a 3%;
- centrifugar por 5min.
Reação
- em tubo de ensaio contendo 2 mL do sobrenadante, adicionar 2 mL de ninidrina ácida* e 2 mL de
ácido acético glacial. Manter em banho-maria fervente por 1h. Resfriar em banho de gelo.
Passos:
a) determinar a concentração de prolina (g/2mL) (C) correspondente à A520 observada, usando-se a
equação da reta da curva padrão. C = (A520+a)/b, onde ‘a’ e ‘b’ são parâmetros da equação da reta.
b) determinar a concentração de prolina no extrato bruto. Fazer uma regra de três: se temos n g de
prolina em 2mL de extrato (C), em 10 mL de extrato bruto teremos x g.
c) determinar a concentração de prolina por grama de folha. Nova regra de três: se em 0,4g de
tecido havia x g de prolina (item b), em 1g teremos y microgramas.