Biologia Molecular da Célula
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO PAULO - SÃO JOSÉ DOS CAMPOS-SP
Luciane Portas Capelo, Gabriel Luís Ferreira Barbosa
Introdução
A tecnologia de DNA recombinante possibilita a edição
genica, além de ajudar na produção em grande escala. Essa
ferramenta tem diversas finalidades, desde produção de
vacinas até o uso agropecuário, a finalidade deste artigo e
demonstrar o processo em uma bactéria Escherichia coli,
além de mostra algumas possibilidades de melhoramento
Aplicação da temática
A aplicação será descritas em etapas de 1 à 6
1 - "pesca" do gene de interesse
Para selecionar o gene nesessário foi utilizado a tecnica
de PCR, onde foi utilizado o sistema de reprodução in vitro,
e fazendo a desnaturação do DNA para que ocorra a
anelação dos primers corretamente
2 - Escolha do sistema de expressão
Existem três principais promotores para a expressão genica o Lac, Tac e a T7
3 - Clonagem do gene de interesse
A clonagem é divida em dois sítios, ambos no sentido 5 ' -> 3', inicializando o
códon ATG e finalizando nos códons de terminação (TGA,TAA ou TAG), formando
os plasmideos de interesse.
4 - Expressão das proteínas recombinante.
Os plasmideos formados na etapa anterior foi introduzidos em cepas de E. Coli,
onde foram incupadas para produzir as proteinas desejadas
5 - Otimização das sequências codificadores
Devido a sequencia de interesse não ser interessante para a E. Coli é
necessario a inclusão de codons utilizados por elas, são identificadas por
softwares.
6 - Conclusão
Ha diversas possibilidades com essa tecnologia, tanto utilizando E. Coli,
quanto outros tipos de hospedieros, mas a E. Coli se torna interessante pois é de
facil acesso.
Referência
MIYAMOTO, Catarina Akiko. Produção de proteínas recombinantes
em Escherichia coli. Revista conexão eletrônica, p. 220-233, 2013.
http://www.aems.edu.br/conexao/edicaoanterior/Sumario/2013/dow
nloads/2013/1/21.pdf