UNIDADE I

Métodos Instrumentais
de Análises

Prof. Dr. Luiz Carlos

 Métodos analíticos

 A análise química pode ser realizada por meio de métodos clássicos e instrumentais.

Métodos
analíticos

Clássicos Instrumentais

Medida da massa Medida das

(gravimétricos) propriedades
Medida do volume físicas do analito
(volumétricos)
 Métodos instrumentais

 Técnicas analíticas capazes de separar, identificar e quantificar espécies químicas que

possam estar presentes em uma amostra de interesse.
 As análises instrumentais são possíveis, uma vez que a detecção e a quantificação se darão
por conta da interação física das espécies químicas presentes na amostra.

São divididos em três grandes grupos:

 Técnicas espectrométricas.
 Técnicas cromatográficas.
 Técnicas eletroquímicas.
 Princípio

Sequência de etapas:

Compartimento
Fonte Seletor
do analito

Detector

Interpretação
e conclusão

Apresentação
Transdutor
de resultado
Métodos espectrométricos

Sinal Método
Emissão de radiação Espectroscopia de emissão (raio-X, UV, visível, elétron) fluorescência, fosforescência
e luminescência (raio-X, UV, visível)
Absorção de radiação Espectrofotometria e fotometria (raio-X, UV, visível, IV), espectroscopia fotoacústica,
ressonância nuclear magnética e espectroscopia de ressonância elétron spin
Espalhamento de radiação Turbidimetria, nefelometria, espectroscopia Raman
Refração de radiação Refratometria, interferometria
Difração de radiação Raio-X e métodos de difração de elétron
Rotação de radiação Potenciometria
Reflexão, absorção e transmissão da luz

Fonte: https://mundoeducacao.uol.com.br/fisica/optica.htm
 Princípio

Sequência de etapas:

Fonte Seletor Compartimento

(lâmpada) (monocromador) do analito

Detector

Interpretação
e conclusão

Apresentação
Transdutor
de resultado
 Espalhamento da luz

 Redução da transparência de uma amostra devido à presença de partículas em suspensão

que interferem na passagem de luz pelo fluido.

Luz transmitida
(turbidimetria)

I0 It

Luz dispersada
(nefelometria)

Fonte: https://www.hexis.com.br/produto/turbidimetro-tl2300
 Espectrometria de absorção molecular

 Baseia-se na interação da matéria com a energia radiante.

Luz incidente Luz emergente

•Boa sensibilidade
•Baixo custo de Perdas:
análise - reflexões
•Fácil operação - dispersão
•Equipamentos - absorção
robustos

Luz absorvida

Fonte: https://kasvi.com.br/espectrofotometria-analise-concentracao-solucoes/
 Espectro de absorção

 Toda molécula é capaz de absorver energia a partir da radiação emitida pelo aparelho.

 Entretanto, a quantidade de energia absorvida irá variar de acordo com a energia incidente
(para cada comprimento de onda, existe uma quantidade específica de energia absorvida
pela molécula).

Sinal Elétrico
Fonte: adaptado de:
https://kasvi.com.br/espectrofotometria-
analise-concentracao-solucoes/

Comprimento de Onda (λ)

 Espectro de absorção

 Espectros de absorção de diferentes substâncias Cada substância apresentará

um pico de absorbância
característico e o comprimento
1. bacterioclorofila. de onda de emissão
2. clorofila a. correspondente deverá sempre
ser ajustado no aparelho antes
3. clorofila b. de qualquer análise.
4. ficoeritrobilina.
5. betacaroteno.

Fonte: http://www.ledson.ufla.br/praticas-laboratoriais-em-fisiologia-vegetal/espectro-absorcao-radiacao/
 Branco

 Solução contendo todos os Fonte:

https://www.directindustry.com/pt/
componentes previstos na prod/hellma-gmbh-co-kg/product-
amostra com exceção da 88614-1856899.html

substância de interesse.

Seletor de
comprimento de onda
Colimador Detector (fotocélula)
(fenda de passagem)
(lente)

Mostrador
digital
Fonte de luz Monocromador (prisma
ou espelho grating ou Solução de amostra
grade de difração) (em cubeta)
 Equipamento (espectrofotômetro)

 Fonte de radiação.
Amostra
 Monocromador. Fonte de luz
Detector
Amplificador Indicador
 Compartimento de amostra.
 Detector.

Elemento
dispersante

Registrador

Fonte: https://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-2-
UV-VIS_2o-Sem-2016-Parte-2.pdf
Exemplo

Fonte: https://www.globaltradebr.com.br/espectrofotometro-
digital-uv-visivel-faixa-190-1000nm.html
 Interatividade

Toda análise instrumental se baseia na obtenção de uma resposta física da molécula, átomo ou
íon a ser analisado. Levando em conta a análise por espectrofotometria, indique a alternativa
incorreta:
a) Necessita de uma fonte que será a responsável pela geração do estímulo ao átomo ou à
molécula no aparelho.
b) Necessita de um monocromador que será responsável pela seleção da radiação empregada.
c) Necessita de detector que será responsável pela captação da radiação no aparelho.
d) Necessita de uma cubeta de dois lados polidos para acomodar o analito.
e) Necessita de duas radiações conhecidas para excitar a molécula.
 Resposta

Toda análise instrumental se baseia na obtenção de uma resposta física da molécula, átomo ou
íon a ser analisado. Levando em conta a análise por espectrofotometria, indique a alternativa
incorreta:
a) Necessita de uma fonte que será a responsável pela geração do estímulo ao átomo ou à
molécula no aparelho.
b) Necessita de um monocromador que será responsável pela seleção da radiação empregada.
c) Necessita de detector que será responsável pela captação da radiação no aparelho.
d) Necessita de uma cubeta de dois lados polidos para acomodar o analito.
e) Necessita de duas radiações conhecidas para excitar a molécula.
Tipos de espectrofotômetro

Cubeta
Fonte de luz

Monocromador Compartimento Detector Amplificador Indicador

de amostra

Referência

Fonte de luz

Monocromador Detector Amplificador Indicador

Amostra

Fonte: https://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-
2-UV-VIS_2o-Sem-2016-Parte-2.pdf
Cubetas

Material Transparência Aplicabilidade

Quartzo 150-3000 nm UV, visível
Vidro 375-2000 nm Visível
Plástico 380-800 nm Visível

Fonte:
https://www.directindustry.com/pt/prod/hellma
-gmbh-co-kg/product-88614-1856899.html
 Lâmpadas (fontes de radiação)

Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, tungstênio

Intensidade
F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de
Química Analítica. Tradução da 8ª edição deutério
Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007.

200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
λ / nm
 Relação entre transmitância e absorbância

A espectroscopia de absorção molecular está baseada na medida de absorbância (A) ou

transmitância (T), que estão relacionadas nas equações:

 A = 0,000  T = 1,000 (100% de transmissão)

 A = 1,000  T = 0,100 (10% de transmissão e 90% de absorção)

Fonte:
https://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-5-
ESPECTROFOTOMETRIA-parte-2-_2S-2012.pdf
 Lei de Beer

 A quantidade de energia transmitida depende da quantidade de moléculas presentes, ou

seja, da concentração da substância analisada.

Io IT1

It = Io 10-K´c solução 10 g/L

Io IT2

solução 20 g/L

Fonte: https://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-5-
ESPECTROFOTOMETRIA-parte-2-_2S-2012.pdf
 Quanto maior a quantidade de moléculas (concentração), maior a quantidade de radiação
absorvida (absorbância) e menor a quantidade de energia transmitida (transmitância).

Fonte: https://web.mst.edu/~gbert/Color_Lg/spec/Aspec.html
 Lei de Lambert

 A quantidade de energia transmitida depende do caminho óptico seguido pela radiação.

Io IT1
It = Io 10-Kl
1 cm

Io IT3
3 cm

Fonte: https://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-5-
ESPECTROFOTOMETRIA-parte-2-_2S-2012.pdf
 Quanto maior a barreira a ser atravessada pela radiação, menor a quantidade de energia na
radiação transmitida.

Fonte: https://web.mst.edu/~gbert/Color_Lg/spec/Aspec.html
Lei de Beer-Lambert

𝑨=𝜺×𝒃×𝒄

A: absorbância
e: coeficiente de extinção molar
b: largura da cubeta
c: concentração da substância

Fonte: https://www.ufjf.br/baccan/files/2010/10/Aula-5-
ESPECTROFOTOMETRIA-parte-2-_2S-2012.pdf
 Limites da Lei de Beer-Lambert

 Limitação real
 A lei é válida somente para baixas concentrações.
 Em altas concentrações, a interação entre as moléculas afeta a distribuição de radiação,
alterando o coeficiente de absortividade molar (e).
 Como minimizar o desvio?
 Manter absorbância inferior a 1,000.

Concentração Absorbâncias
g/L nm
440
0,00625 0,212
0,0125 0,384
0,025 0,686
0,05 1,122
0,1 1,465
 Limite real da Lei de Beer-Lambert

 O limite quantitativo para a

Lei de Beer é igual a
absorbância 1,000. Valores
superiores devem ser
desconsiderados, pois
promovem um desvio na
proporcionalidade entre
absorbância e concentração.
 Limites da Lei de Beer-Lambert

 Desvio instrumental
 A lei só é válida para radiação monocromática, ou seja, para um único comprimento de
onda ().
 Como minimizar o desvio?
 Escolher a região onde o e é constante na região selecionada (pico de absorção).

Absorbância

Absorbância
Comprimento de onda Concentração

Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de

Química Analítica. Tradução da 8ª edição Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007.
 Interatividade

 O estudo espectrofotométrico se baseia na medida de quantidades relativas de luz absorvida

por uma amostra, em função do seu comprimento de onda. Em relação a essa técnica, é
incorreto afirmar que:

a) A transmitância é inversamente proporcional à concentração da solução corada.

b) Na realização da técnica, denomina-se BRANCO o componente que contém todas as
substâncias, menos a que está sendo dosada.
c) Quanto maior a concentração da solução corada, menor será a absorbância da amostra.
d) A curva de calibração representa graficamente os valores
das absorbâncias e das concentrações de um conjunto de
soluções-padrão.
e) Quanto mais próximo de 1 estiver o coeficiente de
correlação, mais linear será o método analítico.
 Resposta

 O estudo espectrofotométrico se baseia na medida de quantidades relativas de luz absorvida

por uma amostra, em função do seu comprimento de onda. Em relação a essa técnica, é
incorreto afirmar que:

a) A transmitância é inversamente proporcional à concentração da solução corada.

b) Na realização da técnica, denomina-se BRANCO o componente que contém todas as
substâncias, menos a que está sendo dosada.
c) Quanto maior a concentração da solução corada, menor será a absorbância da amostra.
d) A curva de calibração representa graficamente os valores
das absorbâncias e das concentrações de um conjunto de
soluções-padrão.
e) Quanto mais próximo de 1 estiver o coeficiente de
correlação, mais linear será o método analítico.
 Espectrometria de absorção atômica

 Técnica baseada na atomização de amostras para detecção de elementos químicos

individuais.

 Envolve a medida da absorção de uma radiação por átomos gasosos no estado fundamental.

 Utilizada há mais de 50 anos em diferentes situações do controle físico-químico nas

indústrias alimentícia, cosmética e farmacêutica.
Fonte: http://www.instalacoesmec.com.br/oxido-nitroso-absorcao-atomica.html
Esquema de um espectrômetro de absorção atômica

Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH,

S. R. Fundamentos de Química Analítica. Tradução da 8ª edição
Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007.
Fluxograma do processo de atomização

Amostra

Nebulização

Spray

Dessolvatação

Aerossol

Volatilização

Moléculas gasosas

Dissociação atômica Etapas reversíveis,

obtenção das formas
Átomos excitadas e, com isso,
ocorrência da absorção de
Ionização
radiação (ou emissão)
Íons
 Atomização por chama

 Amostra é nebulizada por um fluxo de

gás oxidante + gás combustível. Em
seguida, a amostra é levada à chama
para a atomização.

 Etapa crítica na análise e que pode

garantir a precisão do resultado.

Fonte: https://ien.gov.br/index.php/laboratorios/82-laboratorios/200-
laboratorio-de-espectrometria-de-absorcao-atomica.html
 Queimador

Cabeça do
queimador

Anel de segurança da
Parafuso de fixação cabeça do queimador
Oxidante do obstáculo de fluxo
auxiliar Abertura para escape
Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, de pressão
F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de
Química Analítica. Tradução da 8ª edição
Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007. Combustível

Botão de ajuste Obstáculo de fluxo

do nebulizador (Plástico Panton)

Capilar de Nebulizador
entrada da Oxidante do
Para descartar nebulizador
amostra
 Tipos de chamas

 Ar: recomendado apenas em casos onde a amostra se decompõe facilmente (temperaturas

mais baixas).

 Vazão do gás deve ser igual ou pouco maior que a velocidade de queima para manter a
chama estável. A chama deve atravessar o queimador.

Combustível Oxidante T (°C) VQueima (cm/s)

Gás natural Ar 1700-1900 39-43
Gás natural Oxigênio 2700-2800 370-390
Hidrogênio Ar 2000-2100 300-440
Hidrogênio Oxigênio 2550-2700 900-1400
Acetileno Ar 2100-2400 158-266
Acetileno Oxigênio 3050-3150 1100-2480
Acetileno Óxido nitroso 2600-2800 285
Estrutura da chama

Zona de Zona de combustão primária

combustão não é utilizada, pois,
secundária geralmente, não possui
equilíbrio térmico.
Região interzonal
Atomização é feita na região
interzonal, pois existe
predominância de átomos
Zona de combustão
livres.
primária
Zona de combustão
secundária pode formar
óxidos.

 Aspecto e tamanho de cada zona de combustão é dependente

do tipo de combustível e de oxidante.
 Perfil de absorção da chama

 Cada átomo a ser analisado tem perfil de absorção diferente, sendo necessário ajustar a
altura da chama para análise.

Absorbância
Ag
Cr: forma óxidos muito
estáveis, sendo Ag: maior absorbância na parte mais
necessário trabalhar externa da chama. A prata não é
numa altura de chama oxidada facilmente de forma a aumentar
menor. o número de átomos com a altura da
chama (não forma óxidos).

Mg
Mg: maior absorbância no meio da
chama, pois, ao chegar na zona
Cr secundária, começa a formar óxidos,
diminuindo a quantidade de átomos.
Altura da chama, cm
Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH,
S. R. Fundamentos de Química Analítica. Tradução da 8ª
edição Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007.
 Fonte de radiação

 Lâmpada de cátodo oco (mais comum, HCL). Promove a excitação dos elementos contidos
na chama e permite a quantificação a partir de sua absorção ou emissão.
 Tubo de vidro oco preenchido com gás inerte contendo os eletrodos.
 Cátodo: elemento de interesse na análise.
 Ânodo: zircônio ou tungstênio.
 Lâmpada gera uma radiação eletromagnética característica do cátodo.
Lâmpada de cátodo oco ou HCL

Contatos para o Invólucro de Pyrex

código do elemento

Catodo

Isolante

Janela de
quartzo
Anodo
Getter
Contatos elétricos

Pino de alinhamento

Fonte: https://vrbrasil.com/tudo-
sobre-lampadas-de-catodo-oco/
 Monocromador

 Separa a linha espectral de interesse das outras linhas emitidas pela fonte de radiação
através de um prisma ou uma rede de difração (duas fendas estreitas para entrada e
saída da radiação).

 Ocorre a separação em linhas discretas de radiação com diferentes comprimentos de

onda (e, portanto, diferentes ângulos de difração). A fenda de saída seleciona a radiação
desejada.
 Espelho Espelho
côncavo côncavo

Ângulo da rede
determina o
comprimento de onda
na fenda de saída

Fonte: https://docplayer.com.br/7027231-
Espectrometria-de-absorcao-atomica.html Rede de
difração

Fenda de Fenda de
saída entrada

Detector Fonte de
radiação
 Interatividade

Ao se realizar uma análise por espectrometria de absorção atômica, a captação da energia

absorvida pelo átomo a ser analisado envolve o uso de uma lâmpada especial, chamada:

a) Deutério.
b) Tungstênio.
c) Cloreto.
d) Platina.
e) Cátodo oco.
 Resposta

Ao se realizar uma análise por espectrometria de absorção atômica, a captação da energia

absorvida pelo átomo a ser analisado envolve o uso de uma lâmpada especial, chamada:

a) Deutério.
b) Tungstênio.
c) Cloreto.
d) Platina.
e) Cátodo oco.
 Forno de grafite

 A atomização por chama alcança precisão de mg/L, o forno de grafite passa a ser
interessante quando se deseja precisão maior (µg/L).
 Atomização ocorre em tubo transversal, minimizando a reversão dos átomos para moléculas,
condensações nas extremidades do tubo e variações de temperatura.
 Ideia básica seria gerar uma nuvem de átomos densa e em condições controladas (L´vov,
1958).
 O processo de atomização ocorre em sistema fechado e que permite aumento no tempo de
residência dos átomos no caminho óptico.
Fonte: https://www.analiticaweb.com.br/p.php?tit=espectrometro-de-
absorcao-atomica&Bid=p487761f77ef70
 Ajuste de altera da
ponta do capilar
Ajuste A
do capilar

Amostrador do
forno

Compartimento da
seringa

Solução de
lavagem Ajuste B
do capilar
Frasco de rejeitos

Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de

Química Analítica. Tradução da 8ª edição Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007.
 Fluxo interno de gás
Tubo de grafite
Forno de
grafite

Janela Janela

Feixe
Para o espectrofotômetro de luz

Anel de Anel de
vedação vedação

Fluxo externo de gás

Fonte: SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de

Química Analítica. Tradução da 8ª edição Americana. Ed. Thomson; São Paulo, 2007.
 Espectrometria de emissão

 Métodos qualitativos e quantitativos que se baseiam no fenômeno de excitação de uma

molécula para, em seguida, ocorrer a emissão de uma radiação.
 A técnica envolve dois espectros de radiação:
 Excitação (menor λ).
 Emissão (maior λ).

Fonte: https://www.news-medical.net/life-sciences/A-Guide-to-
Fluorescence-(Portuguese).aspx
 Classificação

 Fluorescência: a excitação não provoca alterações no spin durante a transição eletrônica.

 Fosforescência: a excitação provoca alterações no spin durante a transição eletrônica.
 Quimiluminescência: emissão de radiação por uma espécie excitada durante uma reação
química.

Luz (fótons de alta energia)

Absorção

Sem Luz Luz (fótons de baixa energia) Sem Luz

Estado Basal Emissão Estado Basal
Fonte: https://www.pinterest.pt/pin/24558760454787236/
 Estado fundamental (basal)

 Excitação está relacionada ao estado eletrônico do spin nas moléculas.

 Spin: um orbital comporta, no máximo, dois elétrons de spin contrários (emparelhados).

Em um orbital eletrônico no estado

fundamental, os elétrons se encontram
EMPARELHADOS, como na figura ao lado.
 Estado de excitação

 Quando um par de elétrons de uma molécula é excitado a um nível de energia mais alto,
podem ser formados dois estados energéticos excitados:
 Singleto: elétrons permanecem emparelhados.
 Tripleto: elétrons desemparelhados.

Estado excitado
tripleto
(fosforescência)

Estado excitado
singleto
(fluorescência)
Diagrama de Jablonski

Estados excitados singletos

Relaxação
vibracional
(não radioativo)

Energia Estados excitados tripletos

Absorção Fluorescência
(emissão de fóton)
Fosforescência
(emissão de fóton)

Fonte: http://fqb.fcien.edu.uy/docs/Clase%20Intro%20+%20efecto%20solvente.pdf
 Espectros de excitação e emissão

 Para efetuar uma análise fluorimétrica, deve-se obter, inicialmente, os λ de excitação e

emissão para que se ajuste no equipamento.
 Ambos são obtidos por uma varredura semelhante àquela efetuada no espectrofotômetro.
 Por meio de uma curva de calibração é possível converter a intensidade (I) em concentração.

Fonte:
https://www.azonano.com/equipment-
details.aspx?EquipID=86
 Monocromador de Monocromador de
emissão excitação

Rede Rede
Fotomultiplicadora
de referência

Fotomultiplicadora da amostra
Divisor
Refletor branco de
Célula de
feixes
compensação
da absorbância Lâmpada
de
xenônio
Compartimento
da amostra
Fonte: HOLLER, SKOOG, CROUGH. Princípios de Análise Instrumental. 6. ed., 2009.
 Varredura

 Exemplo de Espectro de 150,000

Excitação (FAD):

100,000

Intensity
50,000

0,000
350,0 400,0 500,0 600,0 700,0
Wavelength (nm)

Fonte: arquivo pessoal

 Varredura

 Exemplo de Espectro de 103,902

100,000
Absorção (FAD)

Intensity
50,000

-1,055
350,0 400,0 500,0 600,0 700,0
Wavelength (nm)

Fonte: arquivo pessoal

 Interatividade

A espectrofluorimetria vem sendo utilizada em análise instrumental em substituição à

tradicional análise espectrofotométrica. Apesar do custo maior do equipamento, a técnica
apresenta diversas vantagens e por isso merece sempre atenção especial por parte do analista
no momento de decidir qual a técnica mais apropriada para sua determinação analítica. A
seguir, têm-se algumas afirmações sobre a técnica espectrofluorimétrica. Indique qual a
afirmação correta:
a) Apresenta precisão analítica inferior a da técnica espectrofotométrica, sendo possível
captar teores na escala de micrograma por litro.
b) Apresenta apenas um monocromador responsável pela seleção da radiação absorvida pela
molécula.
c) Baseia-se na determinação da quantidade de energia emitida
pela molécula de interesse durante a passagem de um feixe
de radiação com comprimento de onda fixo.
d) Utiliza uma lâmpada de cátodo oco que será responsável
pela emissão de uma radiação responsável pela excitação da
molécula de interesse.
e) Utiliza uma cubeta de dois lados polidos.
 Resposta

A espectrofluorimetria vem sendo utilizada em análise instrumental em substituição à

tradicional análise espectrofotométrica. Apesar do custo maior do equipamento, a técnica
apresenta diversas vantagens e por isso merece sempre atenção especial por parte do analista
no momento de decidir qual a técnica mais apropriada para sua determinação analítica. A
seguir, têm-se algumas afirmações sobre a técnica espectrofluorimétrica. Indique qual a
afirmação correta:
a) Apresenta precisão analítica inferior a da técnica espectrofotométrica, sendo possível
captar teores na escala de micrograma por litro.
b) Apresenta apenas um monocromador responsável pela seleção da radiação absorvida pela
molécula.
c) Baseia-se na determinação da quantidade de energia emitida
pela molécula de interesse durante a passagem de um feixe
de radiação com comprimento de onda fixo.
d) Utiliza uma lâmpada de cátodo oco que será responsável
pela emissão de uma radiação responsável pela excitação da
molécula de interesse.
e) Utiliza uma cubeta de dois lados polidos.
ATÉ A PRÓXIMA!