GENÉTICA MOLECULAR

DNA e RNA
REPLICAÇÃO E TRANSCRIÇÃO
O DOGMA CENTRAL DA
BIOLOGIA MOLECULAR
 REPLICAÇÃO DO DNA
 1953: Watson e Crick 
postulado teórico (não testado
experimentalmente)  replicação
semi-conservativa.

 1958: Meselson e Stahl 

confirmam, através de
experimentação, a hipótese feita
por Watson e Crick de que o DNA
se replica de maneira
semiconservativa.
1º passo: a dupla-fita é desenrolada pela helicase
 Helicase desenrola o DNA, formando uma forquilha de replicação
 SSBs impedem a torção da fita simples, reanelamento e protegem o
DNA de degradação
 As fitas contínua e descontínua são sintetizadas de forma diferentes
 A fita contínua é sintetizada diretamente pela DNA polimerase
DNA polimerase cria uma
nova fita de DNA a partir de
um molde
• A DNA polimerase adiciona
um nucleotídeo ao grupo 3’-
OH, quebrando-se o
grupamento fosfato
• A DNA polimerase precisa de
um fragmento de DNA ou
RNA anelado ao molde para
começar a replicação
• Algumas DNA polimerases
possuem um sistema de
correção de erros.
2º passo: DNA polimerase replica o DNA na fita contínua e
fragmentos de RNA são sintetizados na fita
descontínua
• A DNA polimerase III é responsável pela replicação do DNA
• Uma primase forma primers de RNA na fita contínua (uma
vez) e na fita descontínua (múltiplas vezes)
2º passo: fragmentos de Okazaki são formados na fita
descontínua
3º passo: primers de RNA são substituídos por DNA
• A RNAse H degrada os primers de RNA
• A DNA polimerase I preenche os espaços vazios mas deixa
fragmentos desunidos RNAse H
4º passo: uma ligase une os fragmentos de DNA separados
As enzimas envolvidas na replicação formam o replissomo
As enzimas envolvidas na replicação formam o replissomo
 REPLICAÇÃO DO DNA
• REPLISSOMO OU SISTEMA DA DNA REPLICASE:
1. Desenovelar dupla hélice e separar as duas fitas: helicase  reconhece a origem
de replicação, corta e separa as duas fitas.
2. Manter o DNA desenovelado: proteína de estabilização de DNA fita simples (SSB –
Single-Strand Binding protein) em procariotos e RPA (Replication Protein A) em
eucariotos.
3. Superenovelamento para anular a tensão criada pela abertura da dupla hélice 
necessidade de mais uma atividade enzimática que reduz a tensão da molécula 
topoisomerase.
REPLISSOMO - TOPOISOMERASE
• Reduz a tensão da molécula.
Enzima
Enzima

DNA

rotação ao redor da fita simples

 REPLISSOMO - POLIMERIZAÇÃO
4. Iniciases: sintetizar os iniciadores.
5. DNA polimerase: adição de nucleotídeos no
sentido 5’  3’.
– Após adição de um nucleotídeo, a DNA polimerase
se dissocia ou se move ao longo do molde para
adicionar um outro nucleotídeo:
–  Dissociação e reassociação podem
limitar a velocidadede da polimerização 
processo geralmente mais rápido se a
polimerase adicionar nucleotídeos sem se
dissociar do molde.
–  Número médio de nucleotídeos
adicionados antes que a polimerase se
dissocie  processividade  variável 
algumas polimerases adicionam apenas
alguns nucleotídeos enquanto outras
adicionam milhares antes que a
dissociação ocorra.
REPLISSOMO – POLIMERIZAÇÃO

6- DNA ligase: no final da síntese, a polimerase remove os

iniciadores e os substitui por nucleotídeos de DNA  cortes
selados pela DNA ligase.
 REPARO
Revisão de leitura e correção: DNA polimerase 
correção de leitura no sentido contrário ao de
polimerização  3’  5’.

Sistema de reparo: pareamentos errados são

instáveis e provocam dobras na molécula (alteração
espacial)  percebidos e corrigidos.
REPLICAÇÃO EM PROCARIOTOS
• Alças de replicação se iniciam sempre em um único ponto
chamado origem.
• Ambas as fitas são replicadas ao mesmo tempo  bidirecional
 extremidades das alças possuem forquilhas de replicação
ativas  uma no sentido horário e outra no sentido anti-
horário.
Origem de replicação em bactérias
PRINCIPAIS DNA POLIMERASES
DE BACTÉRIAS
DNA
FUNÇÃO PRINCIPAL
POLIMERASE

I
Principal enzima de reparo
do DNA.
II Reparo do DNA

III
Principal enzima de
replicação do DNA.
 REPLICAÇÃO EM EUCARIOTOS
• Características essenciais  ~ procariotos.
• Variações:
–  Várias origens da replicação (replicadores) ao longo
de uma única molécula  sequências de replicação
autônomas (ARS – autonomously replicating sequences)
 para cada origem, duas forquilhas bidirecionais.
–  Iniciação da replicação requer uma proteína com
muitas subunidades – complexo de reconhecimento da
origem (ORC – origin recognition complex) – que se liga a
várias sequências dentro do replicador  interage e é
regulada por várias outras proteínas envolvidas no
controle do ciclo celular.
TERMINAÇÃO DA REPLICAÇÃO EM
EUCARIOTOS
No final da replicação descontínua não existe extremidade 3’-OH livre para a DNA
polimerase acrescentar novos nucleotídeos  região de telômeros não é replicada.

No final da replicação descontínua não existe extremidade 3’-OH livre para a DNA
polimerase acrescentar novos nucleotídeos  região de telômeros não é replicada.

Sistema biológico coordenado pela

telomerase (ribonucleoproteína)
gera extremidade 3’-OH para adição
de novos nucleotídeos, recuperando
um pouco a região telomérica não
controla quantos nucleotídeos serão
colocados.
Com o envelhecimento, a atividade
da telomerase vai decaindo 
redução dos telômeros.
PRINCIPAIS DNA POLIMERASES DE
MAMÍFEROS
DNA
FUNÇÃO PRINCIPAL LOCALIZAÇÃO
POLIMERASE
Replicação da fita
 (alfa) contínua.
núcleo

 (épsilon) Reparo do DNA. núcleo

Replicação da fita
 (delta) descontínua.
núcleo

 (beta) Reparo do DNA. núcleo

Síntese “de novo” do DNA
 (gama) (sem necessidade de mitocôndria
molde pré-existente).
 TRANSCRIÇÃO GÊNICA
 Denominação dada à síntese de uma cadeia de RNA a partir de uma das
fitas de um duplex de DNA.
 Fita de RNA é complementar à fita molde do DNA utilizada para a sua
síntese.
 RNA sintetizado possui sequência idêntica à da outra fita do DNA (não
utilizada para a sua síntese), que é chamada fita codificadora.
TRANSCRIÇÃO GÊNICA
 A síntese de RNA é catalisada pela enzima RNA-polimerase.
 Começa quando a RNA-polimerase liga-se a uma região especial, o
promotor, no início de um gene  inclui o primeiro par de bases
transcrito no RNA  sítio de início.
 RNA-polimerase move-se ao longo do molde a partir do sítio de
início, até que encontre a seqüência do terminador  esta ação
define uma unidade de transcrição:
  constituída por um segmento de DNA que é expresso através de uma única
molécula de RNA;
  pode incluir mais de um gene.
TRANSCRIÇÃO GÊNICA
 Primeiro estágio da expressão gênica e principal etapa
na qual é controlada.
 Proteínas regulatórias definem se um determinado
gene está ou não disponível para ser transcrito pela
RNA-polimerase  etapa inicial (e às vezes a única) é a
decisão de transcrever ou não um gene.
 Fases: reconhecimento, iniciação, alongamento e
terminação.
TRANSCRIÇÃO
FASES
 TRANSCRIÇÃO GÊNICA
 Sequências anteriores ao sítio de início  estão a montante (“upstream”) dele.
 Sequências localizadas depois do sítio de início (na própria sequência transcrita) 
estão a jusante (“downstream”) dele.
 Convenção:
  sequências escritas representam a transcrição progredindo da esquerda
(montante) para a direita (jusante)  5’ 3’.
 sequência do DNA representada apenas
pela região codificadora  posições das
bases numeradas em ambas as direções a
partir do sítio de início  recebe valor +1
 números aumentam a jusante;
 base anterior ao sítio de início 
numerada como –1  números negativos
progridem a montante.
TIPOS DE RNA-POLIMERASES
 RNA-polimerase I:
As RNA-polimerases
  localização: nucléolo;
eucarióticas
  função: transcreve rRNA. consistem de muitas
 RNA-polimerase II: subunidades.
  localização: nucleoplasma;
  função: transcreve mRNA.
 RNA-polimerase III:
  localização: nucleoplasma;
  função: transcreve tRNA.
 TRANSCRIÇÃO GÊNICA
 Ocorre pelo processo de pareamento
de bases complementares 
catalisado e supervisionado pela
enzima RNA-polimerase.
 Acontece em uma “bolha de
transcrição”  DNA é
transitoriamente separado em fitas
simples e uma das fitas é utilizada
como molde.
 “Bolha de transcrição” move-se à
medida que a RNA-polimerase move-
se ao longo do DNA  cadeia de RNA
aumenta de tamanho.
TRANSCRIÇÃO GÊNICA
 À medida que a RNA-polimerase move-se ao longo do
molde de DNA, ela desenrola o duplex na frente da bolha
e enrola o DNA atrás de si  sítio de enrolamento.
 Extensão da “bolha de
transcrição” varia com a fase
de alongamento entre 12 e 20
pb  extensão da região
híbrida de DNA-RNA é mais
curta.
RNA-POLIMERASE
 À medida que a enzima se move, o duplex de DNA é reformado 
permite a formação de uma ligação fosfodiéster apenas quando um
nucleotídeo complementar pareia com a base do molde  nucleotídeo
é expulso se não formar um par apropriado.
 Funções:
  desenrolar e enrolar o DNA;
  manter as fitas de DNA separadas e segurar o produto de RNA;
  catalisar a adição de ribonucleotídeos à cadeia de RNA
nascente;
  ajustar-se às dificuldades na progressão clivando o RNA e
reiniciando a sua síntese (com a assistência de alguns fatores
acessórios).