Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra

Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Determinação do crescimento:

Contagem de colónias

Objetivos: Determinar o número de microrganismos viáveis (bactérias, bolores e leveduras) por

contagem de colónias

Introdução: O método de contagem de colónias é utilizado para contar apenas células viáveis.
Uma célula viável é aquela que é capaz de se dividir e dar origem à formação duma colónia. Numa
contagem viável determina-se o nº de células da amostra capaz de formar colónias num meio sólido.
Assim, contando o número de colónias é possível determinar o número de microrganismos viáveis.
Por esta razão pode-se designar este método por contagem de colónias ou contagem em placa.
Em determinadas situações, duas ou mais células agrupadas formam apenas uma colónia. Assim,
para os resultados serem mais claros as contagens de viáveis são expressas em unidades
formadoras de colónias (UFC) em vez de número de células viáveis (uma vez que uma unidade
formadora de colónia pode conter uma ou mais células).

A contagem de colónias pode ser realizada usando três métodos diferentes:

 Técnica de incorporação: Colocar o inóculo (0.1-1 ml) numa caixa de Petri esterilizada e verter o
meio de cultura fundido e arrefecido a 45 °C.

 Técnica de espalhamento: Espalhar o inóculo à superfície dum meio sólido (≈ 0.1 ml)

Microbiologia geral - FFUC Contagem de colónias

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Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Determinação do crescimento:

Contagem de colónias

Técnica de filtração:

- Filtrar, sob vácuo, um determinado volume de amostra através

de uma membrana filtrante de 0,45 m de poro onde ficarão
retidos os microrganismos contaminantes

- Colocar a membrana filtrante sobre um meio de cultura sólido

adequado contido em placa de Petri

O número de colónias obtido depende:

 Concentração do inóculo  Condições de incubação
 Meio de cultura utilizado  Tempo de incubação

O número de colónias desenvolvido em cada caixa não deve ser nem muito grande, nem demasiado
pequeno.
Devem-se contar as colónias presentes nas caixas onde se formaram entre 30-300 colónias.

Normalmente é necessário diluir as amostras

para que se obtenham caixas com um
número de colónias entre 30-300.

Como os métodos de contagem de colónias são sujeitos a muitos erros devem-se fazer os ensaios
em duplicado.

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Disciplina: Microbiologia Geral Determinação do crescimento:

Contagem de colónias

PROCEDIMENTO:

Técnica de incorporação em placa

1 ml 1 ml

15 ml de PCA fundido 15 ml de PCA fundido

e arrefecido a 45ºC e arrefecido a 45ºC

Misturar cuidadosamente
Deixar solidificar

Incubar a 37ºC/48 h, em aerobiose

 Técnica de espalhamento à superfície de um meio sólido

(“Plate count agar - PCA - gelose numeração)

0,1 ml 0,1 ml

Incubar a 37ºC/48h, em aerobiose

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Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Determinação do crescimento:

Contagem de colónias

Técnica de filtração
Filtrar 1 ml de amostra

Colocar a membrana filtrante sobre o meio sólido (PCA)

Incubar a 37ºC/48h, em aerobiose

RESULTADOS:
Contagem de colónias  escolher as caixas que contenham entre 30 e 300 colónias
e contar as colónias

 Técnica de incorporação em placa:

Caixa 1: __________ Caixa 2: _________ MÉDIA: _________

 Técnica de espalhamento à superfície de um meio sólido:

Caixa 1: __________ Caixa 2: _________ MÉDIA: _________

 Técnica de filtração:
Caixa 1: __________ Caixa 2: _________ MÉDIA: _________

Expressão dos resultados:

______ UFC/ml de amostra

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