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Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra

Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco

Objectivos:
- Observação de células procarióticas e eucarióticas a fresco
- Avaliação da mobilidade bacteriana

Introdução:
A observação a fresco de células procarióticas e eucarióticas pode ser efetuada recorrendo a dois
tipos de técnicas:
(a) Técnica entre lâmina e lamela: apesar de simples e fácil de executar, está associada a
facilidade de formar correntes de convexão, assim como da exsicação rápida do produto
(b) Técnica da gota pendente: em que a probabilidade de contaminação do operador está
diminuída, permite uma observação mais prolongada, e elimina as correntes de convexão

A identificação microbiana será tanto mais fiável quanto maior o número de características de que
dispusermos relativamente ao microrganismo em estudo.
No que respeita às bactérias, além da morfologia, tipo de agrupamento e reação tinturial, a
mobilidade, normalmente conferida por flagelos, é um outro parâmetro que poderá auxiliar na sua
identificação.
A mobilidade bacteriana pode ser avaliada através de uma preparação a fresco, utilizando qualquer
uma das técnicas mencionadas acima.
Deve ter-se em atenção que por vezes bactérias imóveis, quando em meio aquoso, parecem
movimentar-se de forma estranha e errática. Estes movimentos são devidos aos movimentos
Brownianos, resultantes dos movimentos aleatórios das moléculas de água contra as bactérias, e não
devem, por isso ser confundidos com movimentos próprios das bactérias.

Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco


Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra
Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco

Técnica da gota pendente

Objetivo: Observar células procarióticas em preparações a fresco


Avaliação da mobilidade bacteriana

Protocolo:
1. Esterilizar a ansa e o fio direito
2. Preparar uma lâmina de Koch
3. Preparar uma lamela
4. Com o auxílio do fio direito aplicar uma pequena porção de vaselina em dois cantos opostos da
lamela
5. Esterilizar o fio direito e deixar arrefecer
6. Destapar o tubo contendo a cultura da bactéria em meio líquido e flamejar o bucal do tubo
4. Colocar uma gota da cultura no centro da lamela
5. Esterilizar a ansa
6. Inverter a lâmina de Koch e centrar a depressão da lâmina com a gota presente na lamela
7. Pressionar ligeiramente a lâmina contra a lamela
8. Inverter a lâmina, ficando a lamela voltada para cima, com a gota suspensa
9. Observar ao microscópio, primeiro com a objetiva de 10x e depois com a de 40x, devendo o
condensador estar para baixo e o diafragma ligeiramente fechado
10. Registe os resultados na folha anexa

Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco


Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra
Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco

Técnica entre lâmina e lamela

Objetivo: Observação de células eucarióticas (leveduras) em preparações a fresco

Protocolo:

1. Esterilizar a ansa e o fio direito

2. Preparar uma lâmina de vidro

3. Colocar uma gota de água estéril no centro da lâmina

4. Destapar o tubo contendo a cultura da levedura em meio sólido e flamejar o bucal do tubo

5. Com o fio direito, tocar nas leveduras em cultura, e voltar a flamejar o tubo, antes de o tapar

6. Suspender as leveduras na gota de água que colocou na lâmina

7. Esterilizar o fio direito

8. Colocar uma lamela sobre a suspensão obtida, evitando a formação de bolhas de ar

9. Observar ao microscópio, primeiro com a objetiva de 10x e depois com a de 40x, devendo o

condensador estar para baixo e o diafragma ligeiramente fechado

10. Registe os resultados na folha anexa

Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco


Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra
Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco

Resultados:

Técnica entre lâmina e lamela: Espécie testada: ______________________________________

1. A levedura em estudo é móvel? Sim  Não 

2. Que tipo de movimentos observou?


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Técnica da gota pendente: Espécie testada: ______________________________________

1. A espécie em estudo é móvel? Sim  Não 


2. Que tipo de movimentos observou?

____________________________________________________________________________

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Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco

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