Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco
Objectivos: - Observação de células procarióticas e eucarióticas a fresco - Avaliação da mobilidade bacteriana
Introdução: A observação a fresco de células procarióticas e eucarióticas pode ser efetuada recorrendo a dois tipos de técnicas: (a) Técnica entre lâmina e lamela: apesar de simples e fácil de executar, está associada a facilidade de formar correntes de convexão, assim como da exsicação rápida do produto (b) Técnica da gota pendente: em que a probabilidade de contaminação do operador está diminuída, permite uma observação mais prolongada, e elimina as correntes de convexão
A identificação microbiana será tanto mais fiável quanto maior o número de características de que dispusermos relativamente ao microrganismo em estudo. No que respeita às bactérias, além da morfologia, tipo de agrupamento e reação tinturial, a mobilidade, normalmente conferida por flagelos, é um outro parâmetro que poderá auxiliar na sua identificação. A mobilidade bacteriana pode ser avaliada através de uma preparação a fresco, utilizando qualquer uma das técnicas mencionadas acima. Deve ter-se em atenção que por vezes bactérias imóveis, quando em meio aquoso, parecem movimentar-se de forma estranha e errática. Estes movimentos são devidos aos movimentos Brownianos, resultantes dos movimentos aleatórios das moléculas de água contra as bactérias, e não devem, por isso ser confundidos com movimentos próprios das bactérias.
Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco
Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra Laboratório de Microbiologia
Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco
Técnica da gota pendente
Objetivo: Observar células procarióticas em preparações a fresco
Avaliação da mobilidade bacteriana
Protocolo: 1. Esterilizar a ansa e o fio direito 2. Preparar uma lâmina de Koch 3. Preparar uma lamela 4. Com o auxílio do fio direito aplicar uma pequena porção de vaselina em dois cantos opostos da lamela 5. Esterilizar o fio direito e deixar arrefecer 6. Destapar o tubo contendo a cultura da bactéria em meio líquido e flamejar o bucal do tubo 4. Colocar uma gota da cultura no centro da lamela 5. Esterilizar a ansa 6. Inverter a lâmina de Koch e centrar a depressão da lâmina com a gota presente na lamela 7. Pressionar ligeiramente a lâmina contra a lamela 8. Inverter a lâmina, ficando a lamela voltada para cima, com a gota suspensa 9. Observar ao microscópio, primeiro com a objetiva de 10x e depois com a de 40x, devendo o condensador estar para baixo e o diafragma ligeiramente fechado 10. Registe os resultados na folha anexa
Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco
Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra Laboratório de Microbiologia
Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco
Técnica entre lâmina e lamela
Objetivo: Observação de células eucarióticas (leveduras) em preparações a fresco
Protocolo:
1. Esterilizar a ansa e o fio direito
2. Preparar uma lâmina de vidro
3. Colocar uma gota de água estéril no centro da lâmina
4. Destapar o tubo contendo a cultura da levedura em meio sólido e flamejar o bucal do tubo
5. Com o fio direito, tocar nas leveduras em cultura, e voltar a flamejar o tubo, antes de o tapar
6. Suspender as leveduras na gota de água que colocou na lâmina
7. Esterilizar o fio direito
8. Colocar uma lamela sobre a suspensão obtida, evitando a formação de bolhas de ar
9. Observar ao microscópio, primeiro com a objetiva de 10x e depois com a de 40x, devendo o
condensador estar para baixo e o diafragma ligeiramente fechado
10. Registe os resultados na folha anexa
Microbiologia geral - FFUC Observação a fresco
Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra Laboratório de Microbiologia
Disciplina: Microbiologia Geral Observação a fresco
Resultados:
Técnica entre lâmina e lamela: Espécie testada: ______________________________________
