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REPLICAÇÃO do DNA

Experiências de Meselson-Stahl
Experiência A

cultivaram bactérias (Escherichia coli) em meios de cultura


diferentes

um contendo um isótopo pesado de azoto (15N)

outro contendo azoto normal (14N).

As bactérias incorporam o azoto nos seus nucleótidos formando


um DNA com maior densidade (15N) ou menos denso (14N).

Colocaram-nas em meios contendo césio e centrifugaram-nas


Atividade prática
• Considera os cartões fornecidos.
• Cada cor representa um nucleótido diferente.
• Constrói uma cadeia de DNA com um total de 8
nucleótidos;
• Marca esses nucleótidos com 1 etiqueta. Os
restantes permanecem por marcar.

Tendo essa “molécula” como base copia outras


moléculas de DNA, de acordo com a hipótese
semi-conservativa, conservativa e dispersiva.

Qual é a hipótese validada pelas experiências de Meselson-Stahl?


ATIVIDADE PRÁTICA
Os cartões marcados com a etiqueta correspondem a nucleótidos com 15N. Os restantes
representam nucleótidos com 14N.

G C
T A
C G
A T
G C

TC
T
C G

A T

A C
G
A
T
C
TC
G

A
A

...
T
C

A
Experiências de Meselson-Stahl
Replicação do DNA
Replicação do DNA
Replicação do DNA: SEMICONSERVATIVA
Replicação do DNA
Replicação do DNA

Duas moléculas
idênticas

Cadeias polinucleotídicas originais


Replicação do DNA

Duas moléculas
idênticas

Bandas de DNA recém sintetizadas


Replicação do DNA

Duas moléculas
idênticas
REPLICAÇÃO
Como?
Enzimas Necessárias
• Helicase: desenrola e abre a molécula de DNA
• Primase: adiciona o PRIMER – molécula iniciadora
do processo de replicação
• DNA polimerases: várias, responsáveis pela
colocação e verificação dos nucleótidos;
• Ligase: estabelece ligação entre os diferentes
fragmentos de Okazaki
• DNA é sintetizado no sentido 5’ 🡪 3’
• A energia necessária ao processo provém da remoção dos
grupos fosfato do nucleótido livre
■ uma vez que o DNA é antiparalelo a síntese
é bidireccional

■ Uma cadeia é sintetizada de modo


contínuo - leading strand (5’🡪3’)

■ A outra é sintetizada em fragmentos


“fragmentos de Okazaki” - lagging strand

■ Por estas razões a replicação do DNA é dita


de semidescontínua
DNA Replicação: Rápida & Precisa!

• Células humanas copiam 6 mil milhões


de pares de bases em apenas algumas
horas
• Erro
1 / 100 milhões de pares de bases
30 erros por ciclo celular

DNA polimerase e a ligase detetam e


corrigem os erros.
É possível extrair DNA das células?
https://www.youtube.com/watch?v=J7DTPWAA
bjg

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