UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE ESCOLA DE QUÍMICA E ALIMENTOS ENGENHARIA DE ALIMENTOS DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA INDUSTRIAL Prof.

Carlos André Veiga Burket

ANÁLISE QUALITATIVA DAS ENZIMAS CATALASE E UREASE

Aline Araújo, 37240 Fabiane Netto, 38747 Luciana Munhoz, 38752

Rio Grande, Junho de 2010.

........................................................................................ ...... .............................. ........2................. ......................................................................... Teste da Catalase .... ..............................2.. . 5..... ........................ ................. Teste da Urease ................... 4.............. 4 Método ......... ...... .......... ................... INTRODUÇÃO .......... 4.......................... .......... 1 OBJETIVOS........................................... ......... 4 Materiais.....................................2. . ........... 1 FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA......1............ .................................... .............. 5 4................... .............................. .................. ...................1.................................................... 3.... ................................................................ ..................................1............... ..................................... .................... 2........................................ 4 4........................................... 5 6...................1..................................................................................................................................................... .......................... ... ...... . .......SUMÁRIO 1... ..... ........... 1 3......... 5 Teste da Urease:.................................. 4 Método ......................... 4.......... ....................... .................2... ..... ............ ...................2..... .... ...........1.......... CONCLUSÃO .................................................................. ................................................................... .... 4.. ... ...... ............................................. Error! Bookmark not defined.............................. .......................................... ... 3 PROCEDIMENTO .. ...................... ........ ......... 3...... ....................1........ 2 Prova da catalase . .........2.................................... ..... 5 Teste da Catalase: ....................... 5 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................ RESULTADOS E DISCUSSÃO...... 4 Materiais ......... 4 4............................................................. Prova da urease ........

.

a urease é um 1 . No laboratório. é po ssível demonstrar algumas das a tividades bioquímicas através da observação da capacidade dos microrganismos usarem enzimas para degradar hidratos de carbono. A urease catalisa a hidrólise de u reia em dióxido de carbono e amô nia. Na maioria dos casos estes resíduos são do tipo iônico e mais reativo. bem como os aminoácidos envolvidos no aspecto catalítico da reação. formada principalmente por resíduos de aminoácidos hidrofóbicos dentro dos quais se fixam o substrato. Os microrganismos efetuam as suas variadas actividades bioquímicas utilizando nutrientes obtidos a partir do ambiente que os rodeia. Geralmente. a metabolização destas moléculas orgânicas origina produtos finais cuja dete ção pode ajudar na c aracterização e identificação dos microrganismos. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA Enzimas são proteínas que catalisam uma reação química específica e em sua maioria são conjugadas. 2.Bioquímica Industrial _________________________ ANÁLISE QUALITATIVA DAS ENZIMAS CATALASE E UREASE 1. Certos resíduos de aminoác idos que são responsáveis pela interação com o substrato e. Nas plantas. pela especificidade do sistema. Sua atividade catalítica depende da conservação da sua estrutura original e qualquer variação nessa estrutura altera significativamente sua atividade. Essas reacções bioquímicas que ocorrem dentro ou fora dos microrganismos são catalisadas por enzimas. portanto. INTRODUÇÃO As enzimas desempenham um papel essencial no metabolismo de todos os organismos. OBJETIVOS Essa prática tem como objetivos analisar qualitativamente as enzimas urease e catalase em amostra de farelo de soja cru e tostado e em uma suspensão enzimática de batata. microrg anismos e invertebrados. 3. Além disso. lipidos. a união dos íons precedentes da solução podem também cooperar na presença do substrato na catálise da reação. estão localizados nesta fenda. Uma característica comum de todas as enzimas é a presença e uma fenda em sua estrutura. Encontra-se principalmente em sementes. estando associadas a grupos não -protéicos. proteínas e aminoácidos.

3. O calor excessivo pode afetar a qualidade das proteínas pela oxi dação do enxofre da cistinae metionona e pela formação de reação de Maillard entre o grupo amino da lisina e carboidratos. Para ser ativada.05 a 0. as enzimas encontram -se muito rígidas e quando se supera um valor considerável (maior que 50°C) a atividade cai bruscamente porque. Com a finalidade de combater os problemas relacionados com os fatores antinutricionais da soja. Em bactérias. vários processos são desenvolvidos. Assim. Entretanto.parece que a própria enzima da planta é um inse ticida.20. As folhas de soja também contêm urease. a enzima se desnatura. Porém. apesar de podermos especular. índice de urease elevado (>0. sendo que o mais utilizado é o tratamento térmico. e a atividade enzimática decresce rapidamente até anular se. Acima desta temperatura. pois se for usado de forma inadequada. A amônia que resulta da rea ção pode também proteger as células da planta de agentes patogénicos . proporcionará a perda de alguns aminoácidos diminuindo seu valor nutritivo.05). A temperaturas baixas. é constituída por duas ou três subunidades diferentes. Em geral. Prova da urease O objetivo desta prova é determinar a capacidade do microrganismo para desdobrar a ureia através da enzima urease. O papel da urease nos feijões de soja não é completamente claro. indica que o calor foi excessivo.Bioquímica Industrial _________________________ ANÁLISE QUALITATIVA DAS ENZIMAS CATALASE E UREASE hexâmero ± consiste em seis cadeias idênticas ± e localiza-se no citoplasma. se ndo proteínas a partir de certa temperatura começam a desnaturar -se pelo calor. Nos feijões. sendo que faixa na qual se considera um proces samento adequado varia de 0. A temperatura influi na atividade e o ponto étimo representa o máximo de atividade. A temperatura na qual a atividade catalítica e máxima chama-se temperatura ótima. Sabe -se que a enzima das folhas ajuda a reciclar o azoto presente nas proteínas (as proteínas são transformadas em ureia). Este visa à inativação ou destruição dos fatores antinutricionais de forma a melhorar a digestibilidade da proteína da soja. sobretudo a presença dos inibidore s de tripsina. A intensidade do tratamento térmico é avaliada através da inativação da enzima urease. a urease precisa ligar-se a dois íons níquel por subunidade. 2 .1. a urease faz o mesmo durante a germinaç ão. mas nelas a enzima é mil vezes menos ativa que nos feijões. As reações catalisadas por enzimas seguem esta lei geral. o aumento de velocidade da reação devido à temperatura e compensado p ela perda de atividade catalítica devido à desnaturação térmica. os aumentos de temperatura aceleram as reações químicas: a cada 10°C de aumento a velocidade de reação se duplica. não é um método satisf atório.20) indica que o calor aplicado foi insuficiente e índice de urease baixo (<0. como proteína. tornando a lisina indisponível para absorção.

em alguns casos. A urease é uma enzima hidrol ítica que ataca a ligação entre o azoto e o carbono em compostos como a ureia. Quando a ureia é desdobrada pela urease. o íon superóxido (O 2-). os microrganismos produzem peróxido de hidrogénio (H2O2) e. A acumulação destas substâncias leva à morte das células. a amô nia acumula-se no meio tornando -o alcalino. pero xidase ou superóxido dismutase é que os tornam intolerantes ao oxigénio.    No entanto. A batata contém uma enzima denominada catalase. anaeróbios facultativos e microaerófilos usam o oxigénio como receptor final de electrões. vermelho de fenol. além de CO 2 e H2O.2. forman do o produto final alcalino. sendo uma reacção positiva para a prese nça de urease. sem fazer parte do sistema reacional. A incapacidade dos microrganismos anaeróbios para sintetizar catálase. basta que ocorra o aparecimento de uma zona do mei o rosa para se considerar a rea ção positiva. a não ser que aquelas possam ser enzimaticamente degradadas. o peróxido de hidrogénio decompõe -se mais rapidamente em água e oxigénio molecular. A ausência da coloração rosa indica uma reacção negativa.Bioquímica Industrial _________________________ ANÁLISE QUALITATIVA DAS ENZIMAS CATALASE E UREASE A urease é uma enzima produzida por alguns microrganismos. Prova da catalase O objetivo desta prova é determinar a capacidade dos microrganismos de produzir a enzima catalase par a degradar o peróxido de hidrogê nio. Durante a respiração aeróbia. ou seja. Os microrganismos com capacidade para produzir catálase ou pero xidase degradam o peróxido de hidrogénio a água e oxigénio. amô nia. a enzima catalase aumenta a velocidade d a reação química. Essas substâncias são produzidas quando aeróbios. apenas os microrganismos que produzem precocemente urease têm capacidade para modificar a cor de todo o meio para rosa forte. A superóxido dismutase é a enzima responsável pela degradação dos iões superóxido nos microrganismos catálase negativo. 3 . A presença de urease detecta -se quando o microrganismo cresce num meio com ureia (meio de ureia de Christensen) que contém também o indicador de pH. Ao adicionar -se um pequeno pedaço de batata ao peróxido de hidrogénio. 3. Este aumento de pH faz com que o indicador de pH passe de amarelo a rosa. mas é especialmente importante para identificar espécies de Proteus relativamente a bactérias entéricas lactose negativa.

Foi feito um branco com a adição apenas de tampão.  Água oxigenada 0. em meio em rampa. A ausência de formação de bolhas de gás é uma prova negativa. Teste da Urease 4.1M.1. 4mL da solução de uréia. Se a bactéria produzir esta enzima ( catalase positiva) ocorre o desdobramento do peróxido de hidrogénio com libertação imediata de bolhas de gás (oxigénio).2. Materiais  Suspensão enzimática de batata em tampão fosfato pH 7. Teste da Catalase 4. Se a catálase foi produzida pelo microrganismo ocorre libertação de bolhas de gás (oxigénio livre) e a prova é positiva.  Indicador vermelho de fenol. 4. Método Adicionou-se.1. a ausência deste borbulhar é uma prova negativa. Materiais  Amostra de farelo de soja cru e tostado.0.0.1. 4.1.1. Um procedimento alternativo consiste em determinar a produção de catalase adicionando uma porção de bactérias.  Solução de uréia 3% em tampão fosfato pH 7. 4.Bioquímica Industrial _________________________ ANÁLISE QUALITATIVA DAS ENZIMAS CATALASE E UREASE A produção de catálase pode ser determinada adicionando o substrato H 2O2 a uma cultura.2. 4 .2. PROCEDIMENTO 4. incubada previamente. em tubos de ensaio com tampa contendo 1g de farelo de soja cru ou tostado. Deixou -se em repouso por 30 minutos a 30°C e após foram adicionadas gotas do indicador vermelho de fenol. previamente colocadas numa lâmina. umas gotas de peróxido de hidrogénio.

pdf 5 . 1976. in dicando apenas a presença do indicador.145. Sites acessados: http://www.2.1M. p.lucato. 6. CONCLUSÃO REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BRADFORD. a coloração vermelha. New York.72.scienceinschool.org/print/957 http://200. Método A 10mL de água oxigenada 0.M. M. adicionou -se 5mL de suspensão enzimática de batata. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of proteins utilizing the principle of protein -dye binding. Teste da Catalase: Com a aplicação deste teste. comprovando a presença de Uréia e indicando positividade ao teste. v. ao adicionar o indicador. Analytical Biochemistry.150/seer/index. O desprendimento de gás foi observado.br/Extrusar%20Soja%20VANTAGENS.. Já na soja tostada foi possível observar a coloração amarela. Esta reação indica positividade do teste. RESULTADOS E DISCUSSÃO Teste da Urease: Com o teste da urease foi possível verificar na soja crua.248-254. 5.php/alimentos/article/viewFile/127/135 http://www.71. verificou -se umdesprendimento de gás.Bioquímica Industrial _________________________ ANÁLISE QUALITATIVA DAS ENZIMAS CATALASE E UREASE 4.ind.2.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful