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Debes preparar un clase que contenga los siguientes aspectos de forma resumida:

Muestras para diagnóstico de virus; Métodos usados; propagación de virus en animales;


propagación en huevos embrionados; en células; diagnóstico serológico; dianostico
molecular; comparación del genoma viral, cuantificación del ácido nucleico viral.

En general, las técnicas de detección viral y diagnostico pueden dividirse en tres


categorías principales: (1) Detección directa, (2) Examen indirecto (aislamiento viral y
(3) Serologia. En el primer caso, el espécimen clínico es examinado directamente para
detectar la presencia de partículas, antigenos o ácidos nucleicos virales. En el examen
indirecto, el espécimen clínico es llevado a cultivo celular en primera instancia (líneas
celulares, huevos o animales) en un intento de lograr replicación de la partícula viral,
esta técnica se denomina aislamiento viral. Actualmente la serología constituye una
parte importante para el trabajo de cualquier laboratorio de virología. Un diagnostico
serológico puede ser realizado mediante la detección de títulos en aumento de los
anticuerpos entre la fase aguda y la fase convaleciente de la infección, o mediante la
detección de las inmunoglobulinas M.

AISLAMIENTO VIRAL Y CULTIVO CELULAR.

Muchas de las ventajas de la virología actual vienen asociadas a la habilidad de


propagar virus en el laboratorio. El aislamiento viral a través de cultivos celulares es el
pilar de muchos de los laboratorios de diagnostico. Con el espécimen apropiado y la
línea celular adecuada esta técnica puede ser bastante sensible y especifica, además se
puede hacer un diagnostico presuntivo asociado al efecto citopático producido sobre la
monocapa celular complementando el estudio con técnicas de inmunotinción. El uso de
dos o tres líneas celulares como células de riñón de mono, una línea celular continua
humana y una línea de fibroblasto humano podrá permitir el diagnostico y detección de
la mayoría de los virus cultivables de importancia clínica como Herpes Simples virus
(HSV), Varicella Zoster Virus (VZV), Cytomegalovirus (CMV), Enteroviruses, Virus
Sincitial Respiratorio (RSV), Adenovirus, parainfluenzavirus, influenza virus y
rhinovirus.

La ventaja principal que ofrece el aislamiento viral consiste en la posibilidad de análisis


a posteriori de la cepa viral como ensayos de susceptibilidad a drogas, tipaje,
secuenciación, análisis de proteínas virales, entre otros que proveen información
importante acerca de la partícula viral con la que se esta trabajando.

Culture

Las técnicas de cultivo de células animales están bien estandarizadas y la mayoría


de las células utilizadas provienen de líneas celulares continuas derivadas de tejidos
humanos u otras especies animales. Los cultivos celulares continuos consisten en
células que han sido inmortalizadas, ya sea en el laboratorio o en el cuerpo del
animal y pueden ser subcultivadas indefinidamente.

La línea celular HeLa (Una de las primeras líneas celulares humanas, obtenida de
Henrietta Lacks, quien falleció de cáncer de útero a partir de cuál se obtuvieron
estas células) es una línea celular continua ampliamente utilizada. A veces es
bastante difícil encontrar una línea celular en la cual un virus pueda replicarse
puesto que sabemos que hay una asociación directa entre los virus y su hospedador
definitivo (receptores de membrana asociados a señales virales). Por muchos años
no se tuvo un sistema de cultivo celular adecuado para hepatitis c por ejemplo,
pero eventualmente se descubrió una línea celular de hematoma humano que es
capaz de soportar la replicación de los aislados de este virus.

Las células son cultivadas en medios que proveen de los nutrientes necesarios para
su crecimiento y multiplicación. Muchos de los medios están suplementados con
suero proveniente de animal (p.e. suero fetal bovino) el cual contiene sustancias
que promueven el crecimiento de muchas líneas celulares. Otro rol importante para
el medio es el mantenimiento de una presión osmótica óptima y un pH para las
células. Los virus pueden ser cultivados en una gran variedad de contenedores
plásticos, donde las células son sumergidas en el medio de crecimiento. La mayoría
de las células que son crecidas en superficies plásticas forman una capa de una
célula de espesor conocida como monocapa. Alternativamente, las células pueden
ser suspendidas en el medio, el cual permanece en agitación para mantener las
células en dicha suspensión.

La contaminación con bacterias y hongos puede ser un gran problema en el trabajo


con cultivos celulares; por tanto para minimizar los riesgos de contaminación de los
cultivos celulares se debe trabajar en una campana de flujo laminar o cabina de
seguridad biológica y suplementar los medios de crecimiento con antibióticos y
antifúngicos. Además muchas líneas celulares requieren una relativamente alta
concentración de dióxido de carbono para poder crecer por lo cual deben ser
suplementadas con este en un incubador especial, donde las condiciones son
relativamente estándar (37°C, 5% de CO2 y 95% de oxigeno).

http://www.jove.com/index/details.stp?id=220
INMUNOFLUORESCENCIA.

Uno de los test mas rapidos y efectivos para el diagnostico es la inmunofluorescencia


directa o indirecta. Inicialmente utilizando un antisuero policlonal y el subsecuente uso
de anticuerpos monoclonales, se puede detectar la presencia de un antígeno en particular
mediante un revelado con un anticuerpo marcado con un indicador o bien un anticuerpo
antiespecie marcado (indirecto). Usualmente la molecula utilizada es fluoresceína.
Ademas cabe destacar que el método indirecto es mucho más sensible debido a que mas
marcadores pueden ser unidos a las células infectadas.

Es una prueba de diagnóstico serológico que tiene dos variedades principales: a)


Inmunofluorescencia directa (IF) aplicada fundamentalmente a la detección de
antígenos en una muestra clínica y b) Inmunofluorescencia indirecta (IFI) aplicada a la
detección de anticuerpos específicos en el suero del paciente frente a un determinado
antígeno o a la detección de un antígeno en una muestra clínica.

- Inmunofluorescencia directa: sobre un portaobjetos depositamos una muestra en la que


buscamos la presencia de un determinado antígeno. Añadimos un suero específico del
antígeno problema marcado con isotiocinato de fluoresceína (conjugado). Si el antígeno
problema se encuentra presente en la muestra, se une el conjugado. En caso contrario el
conjugado se elimina con un lavado del porta.

- Inmunofluorescencia indirecta: sobre un porta que lleva pegado un antígeno conocido,


añadimos el suero problema. Si éste contiene anticuerpos específicos, se unen al
antígeno. Los anticuerpos del suero no específicos del antígeno del porta se eliminan
mediante un lavado. Posteriormente se añade un suero anti-inmunoglobulina humana
marcada con isotiocianato de fluoresceína (conjugado). El conjugado se une a los
anticuerpos específicos o se elimina mediante lavado había anticuerpos específicos en el
suero.

La lectura de ambas modalidades de IF se hace con un microscopio de fluorescencia


cuya luz excita al isotiocianato de fluoresceína haciendo que emita luz fluorescente de
color verde. La observación de luz verde fluorescente “tiñendo” un objeto del porta
indica la presencia del antígeno en la muestra o de anticuerpos específicos en el suero,
según el caso.