¿Es toxico el (O2)?

Una introducción la toxicidad del O2 y

radicales libres
Cesar Sanchez Bautista
El 0xigeno y el ambiente

Animales y plantas: para la eficiente producción de energía

De mayor prevalecía en la tierra 53.8%: atmósfera, mares, lagos, ríos

(presión parcial 159 mmHg)
En la sangre venosa 40 mmHg
8 veces mas soluble en solventes orgánicos (daño oxidativo en las
membranas biológicas)

Oxigeno y organismos anaeróbicos

Estrictos: Treponema denticola y varias Clostridias
Moderados: Bacteriodes fragilis o Clostridium novyi ( 10% O2).
Microaerofilos: Requieren bajo oxigeno para crecer (21% O2)
¿Que causa los efectos tóxicos del oxigeno?
El O2 inhibe a las enzimas celulares:

Inhibe la nitrogenasa (enzima de clostridum pasteurianum) reducción

de Nitrógeno
La presión de O2 inhibe el crecimiento de E. coli por una rápida
inhibición enzimática
Los animales que convulsionan es correlacionado con el contenido
cerebral de GABA inhibe el glutamato deshidrogenasa (GAD).

Glutamato GABA + CO2

En 1954 Rebeca Gerstman y Daniel Gilbert (USA) propusieron que los

efectos dañinos del oxigeno podrían ser atribuidos a radicales libres
de oxigeno
¿Por qué es toxico el oxigeno?
Porque el O2 que respiramos es BI-RADICAL (Triplete O2)
A partir del uso del O2 en la cadena respiratoria mitocondrial de las
células es cuando su avidez de electrones se manifiesta generando
lo que se denominan “Especies Reactivas de Oxigeno”(ROS)

¿qué es un radical libre?

Cualquier especie química, molécula o átomo portadora de uno o mas
electrones desapareados y es altamente reactivo, ya que buscan
con avidez completar su par electrónico.
Reaccionan con: proteínas, amino ácidos,
lípidos, carbohidratos, ácidos nucleicos y
membranas.
Producen lesión oxidativa en la pared de las
mitocondrias, pierde la capacidad de
respirar y generar energía, lesionan la
pared del núcleo, afectan al ADN presente
en las mitocondrias y también el núcleo.
Producen reacciones en cadena.
¿Por qué es toxico el oxigeno?
Porque el O2 que respiramos es BI-RADICAL (Triplete O2)
A partir del uso del O2 en la cadena respiratoria mitocondrial de las
células es cuando su avidez de electrones se manifiesta generando
lo que se denominan “Especies Reactivas de Oxigeno”(ROS)

¿Que es un radical libre?

Cualquier especie química, molécula o átomo portadora de uno o mas
electrones y es altamente reactivo, ya que buscan con avidez
completar su par electrónico.
Reaccionar con: proteínas, aminoácidos, lípidos, carbohidratos, ácidos
nucleicos y membranas.
Producen lesión oxidativa en la pared de las mitocondrias, pierde la
capacidad de respirar y generar energía, lesionan la pared del
núcleo, afectan ADN presente en las mitocondrias y también núcleo.
Producen reacciones en cadena
Papeles biológicos de los radicales libres
Transducción de señales.
Transcripción de genes.
Regulación de la actividad de la guanilato ciclasa soluble en las
células.
Oxido nítrico (NO) endotelio: regula relajación y proliferación de
células del músculo liso vascular adhesión de leucocitos,
agregación de plaquetas angiogenesis, trombosis, tono vascular.
Neuronas: es neurotransmisor.
Macrófagos: es mediador para la respuesta inmune.

Se generan en las células por

Absorción de energía radiante (luz UV, rayos X).
Metabolismo enzimático de fármacos y productos químicos.
Reacciones de oxido-reducción en procesos metabólicos normales.
Metales de transición (Fe y Cu) aceptan o donan electrones durante
las reacciones formando OH (reacción de Fenton).
El NO, puede ser convertido en anion peroxinitrito (ONOO-).

Formación de radicales libres:

Cuando la unión covalente se rompe
Fisión homolitica Si el electrón de cada átomo que compartía se queda
con cada uno
A XX B Ax + Bx H2O H + OH (radical hidrogeno + radical hidroxilo)

Fisión Heterolitica en la cual un átomo recibe ambos electrones.

A XX B A x- X + B + H 2O OH- H+

H2O 10-7 moles /L de OH – y de H + a 25° C

 El oxigeno es un buen agente oxidante
Conceptos de Oxidación y Reducción

Oxidación: perdida de electrones por una átomo o molécula

átomo Na Ion Na +

Agente reductor: es un donador de electrones (como el Na)

Reducción : ganancia de electrones por un átomo o molécula.

Átomo Cl ion Cl –
Agente oxidante: absorbe electrones de la molécula que oxida (como
el Cl)
 Medición de daño oxidativo a
proteínas.
• Oxidación de proteínas: Modificación
covalente de proteínas inducida por
intermediarios reactivos de oxígenos o por
productos del estrés oxidativo.
• Carbonilación, nitración, perdida de
grupos sulfhidrilos, etc.
• Carbonilacion y nitración: -espectroscopia
–HPLC –Western Blot –
Inmunohistoquimica.
Radicales libres
Superoxido (O2). Especies reactivas de oxigeno y de
Hidroperoxilo (HOO *). nitrógeno.
Hidroxilo (HO*). (ROS) (RNS)
Peroxilo (ROO*). Peroxido de nitrógeno (H2O2).
Alcoxilo (RO*). Ácidos hipohalosos (HOX; hipocloroso,
Oxido nítrico (NO*). hipobromoso, etc)
Aminas N-clorinadas (NHCl)
Peroxinitrito (ONOO*)
Peroxido de hidrógeno (H2O2).
liquido viscoso, punto de fusión 150°C se mezcla
rápidamente con el agua y funciona como un agente
oxidante.
O2 dos electrones reducción (mas H ) H2O2 (forma protonada del O2).
2

Oxida a biomoleculas como ascorbato, comp, conteniendo

sulfhidrilos,
H2O2 energía 2HO

Radical hidroxilo (HO)

Los metales reactivos de oxigeno interactuan con metales
de transición Fe o Cu para formar especies de oxigeno
mas reactivas como el HO.
 Reacción de Fenton

O2- + Fe3+ O2 + Fe2+

H2O2 + Fe2+ HO + HO- + Fe3+

O 2 - + H 2O 2 HO + HO- + O2

Cu+ + H2O2 Cu2+ + HO* + HO-

• Otros mecanismos por los que pueden ser formados HO

O2 + NO ONOO
ONOO + H ONOOH HO + NO2
O2 + HOCI HO + O2 + CL

El HO es una especie extremadamente reactiva (107- 1010 M-1 sec-1).

Tiene una vida ½ corta y reacciona en el sitio donde fue formado.

El HO dañino para las células si el metal catalizador está localiza

sobre biomoléculas esenciales como DNA, fosfolípidos o proteínas.
 Radical peroxilo (ROO)
• HO Interactúan con carbohidratos, proteínas, bases nucleotídicas y
lípidos para producir ROO como intermediarios.
• Reaccionan a sitios distantes de donde fue producido el HO.
• Ejemplo: peroxidación de ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs)
iniciado por HO

HO + LH HOH + L LH=lípido poliinsaturado

L + O2 LOO L=lípido alkilo

LOO + LH LOOH + L LOO=lípido hidroperoxil

LOOH=lípido hidroperoxido

• Los ROO oxidan proteínas, carbohidratos y componentes

sulfhidrilos y hemoliza eritrocitos.
 Protección por enzimas

Contra O2: Superóxido dismutasas

• Superóxido dismutasa (SOD): Cataliza la reacción de destrucción
de O-2 mediante su transformación en peróxido de hidrógeno, el
cual puede ser destruido a su vez por las actividades catalasa o
glutatión peroxidasa.

Enzima Cu+2 + O-2 E Cu + O2

E Cu + O-2 + 2H E Cu+2 + H2O2
O-2 + O-2 + 2H H2O2 + O2

• CuZn-SOD Intracelular, localizada en citosol

Homodímero con un PM 32.5 kDa y contiene Cu y Zn
en su sitio activo
• Mn-SOD Se localiza en mitocondria
Homotetrámero con magnesio en su sitio activo PM 88
kDa.
Contiene sitios de unión para varios factores de
transcripción (NF-kB)
Estimulado por el estado celular redox, citocinas
inflamatorias como TNF-a, IL-1, IL-6, IFN-g, LPS, hipoxia,
etc.

• EC-SOD Se localiza en fluidos extracelulares

Es una glucoproteína tetramérica secretora, PM 135 kDa.
Contiene Cu y Zn en su sitio activo
La expresión es inducida por TNF-a, IL-, TGF-B
Contra H2O2: Catalasa y peroxidasas
• Catalasa: Enzima tetramérica, con cuatro subunidades idénticas de
60 kDa, dispuestas tetraédricamente y contiene cuatro
grupos de Fe (III)-protoporfirina unidos a su sitio activo.
Localizada en peroxisomas.
Se induce por hiperoxia y citocinas.
En todos los órganos, principalmente en hígado y en
eritrocitos.
En cantidades bajas en cerebro, corazón y músculo
esquelético.
2H2O2 2H2O + O2

Catalasa Fe (III) + H2O2 Compuesto I K1= 1.7 x 107 M-1 s-1

Compuesto I + H2O2 catalasa Fe (III) + 2H2O2 + O2 K2= 2.6 x 107 M-1s-1

Peroxidasas:
• Glutatión peroxidasa (GPx):
Remueve el H2O2 a H2O con oxidación de glutatión reducido (GSH).

Esta formada por cuatro subunidades idénticas, cada una contiene un

átomo de selenio en su sitio activo (como selenocisteina) que es
esencial para su actividad enzimática.

Es un tripéptido: forma reducida como GSH y en su forma oxidada

GSSG.

H2O2 + 2GSH GSSG + H2O

Proteína tetramérica localizada en citosol principalmente y algo en

mitocondria.

Es considerada más importante que catalasa en condiciones

fisiológicas.
Se han encontrado al menos cinco isoenzimas de GPx en mamíferos
Protección contra radicales de oxígeno en
sistemas biológicos

Antioxidantes Ubicación celular Propiedades

enzimáticos antioxidantes

Mn superóxido Mitocondria Dismuta radicales

dismutasa peróxido

Cu-Zn superóxido Citosol Dismuta radicales

dismutasa peróxido

GPx Citosol y mitocondria Remueve H2O2e

hidroperoxidos
 Protección contra radicales de oxígeno en
sistemas biológicos
• Protección por antioxidantes
Antioxidantes no Ubicación celular
enzimáticos
Compuestos fenólicos solubles en
Vitamina E lípidos; localizada en membranas
Vitamina C (Ac. Soluble en agua, localizada en citosol
Ascórbico)
GSH Citosol y mitocondria
Tiol endógeno localizado tanto en la
Ac. Lipoico fase acuosa como en la lipídica
Derivados de quinona soluble en
Ubiquinonas lípidos; localizadas en membrana
Soluble en lípidos; localizados
Carotenoides principalmente en membranas
Propiedades antioxidantes
Principal antioxidante que interrumpe
la cadena de peroxidación lipídica
Neuraliza una amplia variedad de
ROS en fase acuosa; regenera
vitamina E
Sustrato de la enzima GPx en la
remoción de H2O2 y para
dehidroascorbato reductasa
Interviene en el reciclado de la
vitamina C; puede ser un buen
sustituto de GSH
Las formas reducidas son
antioxidantes eficientes
Antioxidantes; reducen la
peroxidación lipídica
 Enfermedades en las que participan
radicales libres
• Cáncer (diferente tipos)
• Isquemia / reperfusión
• Arteriosclerosis
• Diabetes mellitus
• Inflamación
• Infecciones (Helicobacter pylori, hepatitis, HIV, neumonia, artritis
reumatoide)
• Alcoholismo
• Síndrome de shock séptico
• Síndrome de Dawn
• Desarreglos en hemoglobina
• Distrofia muscular de Duchenne
• Enfermedad de Crohn
• Problemas ópticos: glaucoma
• Enfermedades neurodegenerativas:

Alzheimer
Parkinson
Huntington
Esclerosis lateral amiotrófica
Demencia vascular
Trauma
Isquemia cerebral
Encefalomielitis
 Posibles mecanismos en la
neurodegeneración
• Deficiencias energéticas:
Desórdenes en el que el suministro de sustratos está reducido
(Isquemia, hipoglucemia )
Transtornos crónicos (enfermedad de Huntington, Parkinson,
Alzheimer o esclerosis lateral amiotrófica)

• Hiperactividad de los neurotransmisores acídicos:

Ácido glutámico Degeneración y muerte neuronal
Ácido aspártico

• Participación de los radicales libres:

Originados en el metabolismo
Medición del daño oxidativo al DNA
• Formación de 8-OHdG/8-oxoG

• Determinación de 8-hidroxideoxiguanosina
 Medición del daño oxidativo a
lípidos.
• Medición de
compuestos
fluorescentes.
 Protección contra radicales de
oxigeno en sistemas biológicos.
• Protección por antioxidantes no
enzimáticos.

• Vitamina C (Ac. Ascórbico)

• Sólido cristalino muy soluble en agua. Se
requiere en la dieta.
• Actúa como un agente reductor (donador
de electrones) 1e
• Regenera a la Vit.E
• Beta caroteno (precursor de la Vitamina A)
• Es liposoluble
• Reacciona directamente sobre los
radicales libres; inactivándolos.
 Vitamina E (alfa-tocoferol)
• Esencial en la dieta
• Liposoluble
• Se concentra en el interior de la membrana
• Reacciona en inactiva al 1 gO2
• Reacciona con el O2
• Puede reaccionar con los radicales peroxilípidos
para formar radicales de la Vit. E
(Insuficientemente reactivos para abstraer H de
los lípidos de la membrana), terminando la
reacción en cadena.
 … otra clasificación de los
sistemas antioxidantes.
enzimáticos: Súper oxido
dismutasa catalasa.
Glutation peroxidasa
• Proteicos

no enzimáticos: Transferrina
ceruloplasmina.
Albúmina
Acido úrico.
 Vit. C
Hidrosulobles Bilirrubina
Glutation.
• No proteicos.
Vit. E
Liposolubles Beta carotenos
Licopeno
Ubiquinol 10