19/04/2021 2.2.1. Clareza e grau de ... - Farmacopeia Europeia 10.

Avisos gerais aplicam-se a todas as monogra as e outros textos.

Veja a seção de informações sobre monogra as gerais .

07/2017 : 20201

2.2.1 . CLAREZA E GRAU DE OPALESCÊNCIA DE LÍQUIDOS

Opalescência é o efeito da luz sendo absorvida ou espalhada por partículas submicroscópicas ou falta de
homogeneidade da densidade óptica. A ausência de qualquer partícula ou heterogeneidade em uma solução
resulta em uma solução límpida.
Um líquido é considerado claro se sua clareza for a mesma da água R ou do solvente usado, ou se sua
opalescência não for mais pronunciada do que a da suspensão de referência I (ver Tabela  2.2.1 .-1), quando
examinado nas condições descritas abaixo.
Os requisitos nas monogra as são expressos em termos do método visual, comparando com as suspensões de
referência de nidas (ver Tabela 2.2.1 .-1). No entanto, métodos instrumentais também podem ser usados para
determinar a conformidade com os requisitos da monogra a, uma vez que a adequação do instrumento tenha
sido estabelecida conforme descrito abaixo e a calibração com as suspensões de referência I-IV e com água R ou
o solvente usado tenha sido realizada.

MÉTODO VISUAL

Usando tubos de ensaio idênticos de vidro neutro, transparente e incolor com uma base plana e um diâmetro
interno de 15-25 mm, compare o líquido a ser examinado com uma suspensão de referência preparada
recentemente como descrito abaixo. Certi que-se de que as profundidades das camadas nos 2 tubos de ensaio
são iguais (cerca de 40 mm).
Compare os líquidos em luz diurna difusa 5 min após a preparação da suspensão de referência, visualizando
verticalmente contra um fundo preto.
Adequação do sistema . A difusão da luz deve ser tal que a suspensão de referência I possa ser facilmente
distinguida da água R , e que a suspensão de referência II possa ser facilmente distinguida da suspensão de
referência I (ver Tabela 2.2.1 .-1).

MÉTODO INSTRUMENTAL

A avaliação instrumental de clareza e opalescência fornece um teste mais discriminatório que não depende da
acuidade visual do analista. Resultados numéricos são mais úteis para controle de processos e monitoramento
de qualidade, especialmente em estudos de estabilidade. Por exemplo, dados numéricos anteriores sobre
estabilidade podem ser extrapolados para determinar se um determinado lote de uma preparação excederá os
limites de vida útil antes da data de validade.

TURBIDIMETRIA E NEFELOMETRIA
Quando uma suspensão é vista perpendicularmente à direção da luz incidente, o sistema parece opalescente
devido ao espalhamento da luz pelas partículas da suspensão (efeito Tyndall). Uma certa parte do feixe de luz
que entra em um líquido turvo é transmitida, outra parte é absorvida e a parte restante é espalhada pelas
partículas em suspensão. O efeito de espalhamento de luz de partículas suspensas pode ser medido
indiretamente pela observação da luz transmitida (turbidimetria) ou diretamente pela medição da luz espalhada
(nefelometria). A turbidimetria e a nefelometria são mais con áveis em faixas de baixa turbidez, onde há uma
relação linear entre os valores de turbidez e os sinais do detector. Conforme o grau de turbidez aumenta,
Para medições quantitativas, a construção de curvas de calibração é essencial. A linearidade deve ser baseada
em pelo menos 4 níveis de concentração. As suspensões de referência devem apresentar um grau de turbidez
su cientemente estável e devem ser produzidas em condições bem de nidas.

MEDIÇÕES NO MODO DE PROPORÇÃO

A determinação da opalescência de líquidos coloridos é feita por meio de instrumentos com modo de proporção,
pois a cor fornece uma interferência negativa, atenuando a luz incidente e espalhada e diminuindo o valor de
turbidez. O efeito é tão grande, mesmo para amostras moderadamente coloridas, que nefelômetros
convencionais não podem ser usados.

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Na turbidimetria ou nefelometria com modo de proporção, a proporção da medição de transmissão para a

medição de luz espalhada de 90 ° é determinada. Este procedimento compensa a luz que é diminuída pela cor
da amostra. Instrumentos com modo de razão usam como fonte de luz uma lâmpada de tungstênio com
sensibilidade espectral em cerca de 550 nm operando em uma temperatura de cor de lamento de 2700 K.
Outras fontes de luz adequadas também podem ser usadas. Fotodiodos e fotomultiplicadores de silício são
comumente usados como detectores e registram mudanças na luz espalhada ou transmitida pela amostra. A luz
espalhada a 90 ± 2,5 ° é medida pelo detector primário. Outros detectores medem a dispersão para frente e
para trás (luz re etida), bem como a luz transmitida.
Os instrumentos usados são calibrados contra padrões de turbidez conhecidos e são capazes de medição
automática de turbidez. Os resultados do teste são obtidos diretamente do instrumento e comparados com as
especi cações da monogra a individual.
Alternativamente, a in uência da cor da amostra também pode ser eliminada usando um diodo emissor de luz
infravermelha (IR LED) tendo um máximo de emissão em 860 nm com uma largura de banda espectral de 60 nm
como a fonte de luz do instrumento.

REQUISITOS DE INSTRUMENTOS
Os instrumentos em conformidade com as seguintes características e veri cados usando suspensões de
referência, conforme descrito abaixo, podem ser usados em vez do exame visual para determinação da
conformidade com os requisitos da monogra a.
- Unidade de medida: NTU (unidades de turbidez nefelométrica). O NTU é baseado na turbidez de um padrão
primário de formazina. FTU (unidades de turbidez de formazina) ou FNU (unidades nefelométricas de
formazina) também são usados e são equivalentes a NTU em regiões de baixa turbidez (até 40 NTU). Essas
unidades são usadas em todos os 3 métodos instrumentais (nefelometria, turbidimetria e modo de razão).
- Faixa de medição: 0,01-1100 NTU.
- Resolução: 0,01 NTU dentro do intervalo de 0-9,99 NTU; 0,1 NTU dentro do intervalo de 10,0-99,9 NTU; e 1 NTU
para o intervalo> 100 NTU.
- Precisão: ± (10 por cento da leitura + 0,01 NTU) dentro da faixa de 0-20 NTU; ± 7,5 por cento dentro da faixa de
20-1100 NTU.
- Repetibilidade: ± 0,05 NTU dentro da faixa de 0-20 NTU; ± 2 por cento da leitura no intervalo de 20-1100 NTU.
Instrumentos com faixa de medição ou resolução, precisão e capacidade de repetibilidade diferentes dos
mencionados acima podem ser usados, desde que sejam su cientemente validados e sejam capazes de fazer o
uso pretendido.

CONTROLE DO DESEMPENHO DO INSTRUMENTO

- Calibração: realizado com pelo menos 4 suspensões de referência de formazina cobrindo a faixa de medição
de interesse. As suspensões de referência descritas neste capítulo ou padrões de referência adequados
calibrados contra as suspensões de referência primárias podem ser usados.
- Luz dispersa: <0,15 NTU dentro do intervalo de 0-10 NTU; <0,5 NTU dentro do intervalo de 10-1100 NTU. A luz
dispersa é de nida como aquela luz que atinge o detector nefelométrico sem ser resultado da dispersão da
amostra. A luz dispersa é sempre uma interferência positiva e uma fonte signi cativa de erro em medições de
turbidez de baixo alcance. Fontes de luz dispersa incluem: imperfeições e arranhões nas células de amostra,
re exos internos do sistema óptico, contaminação da óptica ou da câmara da célula de amostra com poeira e
ruído eletrônico. O projeto do instrumento também pode afetar a luz difusa. A in uência da luz difusa torna-
se insigni cante nas medições do modo de proporção.
A metodologia de ensaio para a substância / produto especí co a ser analisado também deve ser veri cada para
demonstrar a sua capacidade analítica. O instrumento e a metodologia devem ser consistentes com os atributos
da substância a ser examinada.
As medições de padrões e amostras devem ser realizadas nas mesmas condições de temperatura,
preferencialmente entre 20 ° C e 25 ° C.

SUSPENSÕES DE REFERÊNCIA

Formazin tem várias características desejáveis que o tornam um excelente padrão de turbidez. Pode ser
preparado de forma reproduzível a partir de matérias-primas testadas. As características físicas tornam-no um
padrão de calibração de dispersão de luz desejável. O polímero de formazina consiste em cadeias de
comprimentos diferentes, que se dobram em con gurações aleatórias. Isso resulta em uma grande variedade de
formatos e tamanhos de partículas, o que permite a análise de diferentes tamanhos e formatos de partículas
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encontrados em amostras reais. As suspensões de formazina estabilizadas que podem ser usadas para preparar
padrões de turbidez diluídos estáveis estão disponíveis comercialmente e podem ser usadas após comparação
com os padrões preparados conforme descrito.
Todos os passos da preparação de suspensões de referência conforme descrito abaixo são realizados a 25 ± 3 °
C.
Solução de sulfato de hidrazina. Dissolva 1,0 g de sulfato de hidrazina R em água R e dilua até 100,0 mL com o
mesmo solvente. Deixe repousar por 4-6 h.
Suspensão opalescente primária (suspensão de formazina). Em um balão de 100 mL de solo com rolha de
vidro, dissolver 2,5 g de hexametilenotetramina R em 25,0 mL de água R . Adicione 25,0 mL da solução de sulfato
de hidrazina. Misture e deixe repousar por 24 h. Esta suspensão é estável 2 meses, desde que acondicionada em
recipiente de vidro livre de defeitos super ciais. A suspensão não deve aderir ao vidro e deve ser bem misturada
antes do uso.
Padrão de opalescência. Diluir 15,0 mL da suspensão opalescente primário para 1000,0 mL com água R . Esta
suspensão é preparada de fresco e pode ser armazenada por até 24 horas.
Suspensões de referência. Prepare as suspensões de referência de acordo com a Tabela 2.2.1 .-1. Misture e
agite antes de usar.

Mesa  2.2.1 .-1

eu II III 4

Padrão de opalescência 5,0 mL 10,0 mL 30,0 mL 50,0 mL

Água R 95,0 mL 90,0 mL 70,0 mL 50,0 mL

As medições das suspensões de referência I-IV no modo de razão mostram uma relação linear entre as
concentrações e os valores de NTU medidos (ver Tabela 2.2.1 .-2).

Mesa  2.2.1 .-2

Suspensões de Formazina Valores opalescentes (NTU)

Suspensão de referência I 3

Suspensão de referência II 6

Suspensão de referência III 18

Suspensão de referência IV 30

Padrão de opalescência 60

Suspensão opalescente primária 4000

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