Guía: Microscopio

. ESCUELA SALUD

GUÍA
MICROSCOPIO

Microscopio de Hooke (izquierda) y Microscopio de Leeuwenhoek (derecha), creadores

de los primeros microscopios.

DIRIGIDO A ALUMNOS DE:

Técnico de Laboratorio Clínico y Banco de Sangre

Técnico Superior de Enfermería
Técnico de radiodiagnóstico y Radioterapia
Informático Biomédico

PRE-REQUISITO:
No tiene
.
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

INTRODUCCIÓN

La microscopía óptica es una de las herramientas más utilizadas en el

Laboratorio, tanto Clínico, como de otra índole. Está ampliamente distribuido en
las áreas de la microbiología y la hematología.
También es posible encontrar microscopía más compleja en los Laboratorios,
en las áreas de la inmunología, de la histología o de la biología celular. Este
tipo de microscopía se diferencian de la microscopía óptica no sólo en lo que
respecta al instrumento en sí, mucho más complejo y costoso, sino que
también en sus fundamentos teóricos.

OBJETIVOS
Al finalizar el taller el alumno será capaz de:
 Reconocer las distintas partes principales de un microscopio óptico, sus
nombres y funciones.
 Realizar correctamente la simulación de observación.
 Realizar la correcta limpieza de las superficies de un microscopio óptico.
 Realizar la correcta limpieza de los objetivos y oculares de un
microscopio óptico.
 Manipular material delicado propio de un laboratorio.

REALIZADO POR:
Tecnólogo Médico, Bioquímico, Químico Farmacéutico, Médico Laboratorista,
Biólogo.

DURACION:
90 minutos.

NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE:

20 alumnos

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

MARCO TEORICO:

Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaños,

formas y composiciones distintas, la mayoría de ellas pueden verse, algunas a
simple vista, y otras mediante instrumentos.

El microscopio óptico es un instrumento de precisión que permite ampliar la

imagen de los objetos que no son visibles para el ojo humano. En el
microscopio, la luz atraviesa de abajo a arriba el objeto a estudiar. Para ver
con el microscopio un objeto, éste debe ser lo más fino posible. Si no lo
atraviesa la luz se verá sólo un grumo deforme y opaco.

Tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm), es decir la distancia

mínima a la que se pueden ver dos objetos separados. Este microscopio
utiliza luz visible. Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden
estar vivas o fijadas y teñidas. Las muestras son depositadas en una lámina de
vidrio denominada PORTAOBJETO, de unos 5 cm de largo por 2 cm de ancho.
En el lugar del portaobjetos donde se puso la muestra puede, además, ponerse
una laminilla muy fina de vidrio llamada CUBREOBJETO.

Los oculares proporcionan diez aumentos de la imagen, y viene expresado x10

en la carcasa del ocular. También los hay x20.

Los objetivos (generalmente cuatro), suelen tener aumentos de x4, x10, x40 y
x100. La ampliación de la imagen resultante al multiplicar los aumentos que
proporciona el ocular y el objetivo serán de 40, 100, 400 y 1000 aumentos.

Ejemplo: Ampliación de 40 aumentos:

Objetivo x4: aumenta 4 veces la imagen

Ocular x10: aumenta 10 veces la imagen ya aumentada 4 veces por el

objetivo

Resultado: 4 aumentos x10 aumentos = 40 aumentos

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

Lo objetivos x4, x10 y x40, se denominan objetivos secos, porque entre la

lente y la preparación a observar, la luz atraviesa el aire proporcionando una
imagen nítida. El objetivo x100, se denomina objetivo de inmersión, porque
para proveer imágenes nítidas, la lente debe estar inmersa en un líquido (aceite
de cedro o similar), con un índice de refracción igual al vidrio, lo que permite
evitar la dispersión de los rayos luminosos. Siempre que utilicemos el objetivo
x100 debemos colocar una gota de aceite de inmersión sobre la preparación
a observar.

Partes de un Microscopio óptico:

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

a) Sistema óptico

 Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
objetivo.
 Objetivo: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta. Sus aumentos de menor a mayor son 4x, 10x, 40x, 100x. Si se
utiliza el aumento 100x es necesario agregar a la preparación aceite de
inmersión. cuya función es evitar la dispersión de los rayos luminosos.
 Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación.
 Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
 Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Oculares y objetivos

b) Sistema mecánico

 Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el

brazo.
 Platina: Lugar donde se deposita la preparación.
 Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser
monocular, binocular.
 Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
 Tornillos de enfoque: El Tornillo Macrométrico que aproxima el enfoque
y el Tornillo Micrométrico que consigue el enfoque correcto.

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

Microscopio conectado a TV

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS

 Sala de simulación de Laboratorio clínico.
 Microscopios ópticos binocular, 1 por cada 2 alumnos ( minimo)
 Portaobjetos: 1 por alumno
 Cubreobjetos: 1 caja por taller
 Paño o toalla de papel suave para limpiar: 1 por alumno
 Aceite de inmersión
 Solventes para limpieza de lentes: alcohol: acetona (7:3) o xilol
(precaución: muy tóxico)
 Frontis sanguíneo teñido ( preparados listos)
 Caja de bioseguridad para eliminación de material cortopunzante
 Recipiente con solución detergente para portaobjetos sucios.

DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO:

NOTA: Recuerde usar su delantal, pelo tomado, sin joyas en las manos, y
realizar lavado de manos al ingresar al laboratorio

Manejo y uso del microscopio óptico:

1. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posición de empleo y

bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió
correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas
condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas
metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o
colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque seguir los siguientes pasos:

 Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el

tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a
través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
 Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el
objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe
algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque
fino.

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y

suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el
enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen,
es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de
percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las
precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se
observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

6. Empleo del objetivo de inmersión:

 Bajar totalmente la platina.

 Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz
que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el
aceite.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio
camino entre éste y el de x40.
 Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo
de inmersión.
 Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo
entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor
que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
 Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no
se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que
bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
 Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y
se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este
momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe
retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
 Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel
especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está
perfectamente limpio.

Mantenimiento y precauciones:

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento

en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la
platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su
funda.

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo

cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si
no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro
de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el
microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite
que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o papel
muy suave, que no deje pelusas. En cualquier caso se pasará el papel
por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza,
porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las
lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico
7. Una vez finalizada la observación, el cubreobjeto debe ser depositado
en una caja para material cortopunzante (safe box) y el portaobjeto se
deja en un bandeja con solución de limpieza, dispuesta en el laboratorio.

ACTIVIDADES
Actividad 1:

El docente realiza el procedimiento de mantención de las superficies y

lentes del microscopio.

Actividad 2:

El docente realiza el procedimiento de simulación de observación,

describiendo en detalle la forma correcta de poner la preparación y
enfocarla.

Actividad 3:

Cada alumno realiza, las veces que sea necesario las actividades 1 y 2.
El docente observa y corrige las actividades de los alumnos.

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

BIBLIOGRAFIA

http://www.angelfire.com/bc2/biologia/microscopia.htm (VISITA
28/12/2004)

http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm (VISITA
28/12/2004 )

http://www.shimadzu.com.br/analitica/port/Produtos/Microscopio/images/
ss-550.jpg (visita 2/1/2005)

http://www3.unileon.es/ins/insaiem/images/microscopio%20electronico.jp
g (visita 2/1/2005)

METODOLOGIA DE EVALUACION
El taller se evalúa a través de una pauta de competencias logradas de
acuerdo a los objetivos planteados:

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC
 Guía: Microscopio

Nombre del alumno:...............................................

Fecha:............................................Nota.......................

Microscopio C MC NC
1. Su presentación personal es correcta para el
taller
2. Identifica al menos 3 partes del microscopio
3. Sabe colocar el aceite en el lugar correcto del
microscopio
4 Usa el microscopio en el orden secuencial
indicado
5. Coloca el porta objeto en el lugar correcto del
microscopio, porque sabe su función.
4. Cumple con el orden y limpieza indicado por el
docente al finalizar el taller
5. Realiza la técnica de mantención del
microscopio

C: competente

MC: medianamente competente

NC: no competente

Autor: BQ Cecilia López Reyes

EU. Eliana Escudero
DuocUC