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MATERIAIS E METODOS
Com o objetivo de observar a afinidade de diferentes corantes ácidos e
básicos com os componentes celulares de Saccharomyces cerevisiae, foi
realizada uma preparação temporária do referido fungo com água destilada
numa placa de Petri, a preparação foi logo tranferida a um tubo de ensaio.
Com o uso de uma pipeta de Pasteur foi colocada uma gota da solução numa
lâmina de vidro que foi coberta superiormente por uma lamela. Com o uso do
microscópio ótico, foi observada a amostra com ampliações de 50x, 100x,
400x e 1000x. Para a observação em ampliações de 1000x, foi usado óleo de
imersão (colocou-se uma gota numa zona de interesse da lâmina, fazendo
contacto direto com a objetiva de 100x). Após o registo das observações
realizadas, usou-se xilol para a limpeza do óleo de imersão, empregando para
o efeito um cotonete de algodão e limpando com movimentos circulares a
objetiva, a lâmina e o condensador.
Os corantes usados nesta experiência foram o azul de metileno, Lugol
de Gram, Giemsa e o Carmim acético. Para o emprego dos corantes primeiro
aplicaram-se duas gotas da preparação temporária numa lâmina de vidro que
foi posteriormente secada com calor usando uma lamparina de álcool e uma
pinças de madeira; logo, foram aplicadas duas gotas de corante e deixaram-
se atuar por um tempo: azul de metileno (1 minuto), Lugol de Gram (1
minuto), Giemsa (7 minutos) e Carmim acético (15 minutos). Após do tempo,
escorreram-se as lâminas com água corrente e água destilada. Após a sua
secagem ao ar, foram cobertas superiormente por uma lamela e observadas
em todas as ampliações do microscópio, segundo o mesmo procedimento
usado na observação das leveduras sem coloração. A seguir mostram-se
esboços das observações realizadas com ampliação de 1000x, das leveduras
sem coloração (figura 4) e com os corantes anteriormente referidos (figura 5, 6,
7 e 8).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Para todas as preparações foram observadas
pequenas estruturas arredondadas,
aglomeradas entre si de forma variável e que
evidenciavam em alguns casos pequenas
saliências (isto é, evidenciavam o processo de
gemulação); estas estrutururas arredondadas
correspondiam as leveduras da espécie
Saccharomyces cerevisiae. Para a
determinação das dimensões médias destes
organismos, foram realizadas cinco (5)
medições da largura e do comprimento
das células das leveduras a partir da
Figura 8 – Leveduras com Carmim
figura 9 (Costa, 2020):
acético
CONCLUSÕES
Para este tipo de observações, o Microcópio Eletrónico de
Transmissão (MET) é ideal para a visualização mais detalhada dos
componentes tecidulares basófilos e acidófilos de Saccharomyces cerevisiae;
provindo imagens mais claras e consequêntemente melhores resultados
experimentais. Embora no presente trabalho laboratorial tenha sido utilizado o
microcópio ótico (que, em comparação com o MET possui menor resolução)
foi ainda possível observar organelos intracelulares com o azul de metileno e
o Lugol de Gram. Entre estes dois corantes, aquele que permitiu uma melhor
e mais variada visualização de organelos foi o azul de metileno, foi o corante
mais interessante na opinião do investigador.
É possível concluir então que os corantes com melhor afinidade para os
componentes de Saccharomyces cerevisiae foram o azul de metileno e o
Lugol de Gram; adicionalmente seria também possível concluir de maneira
hipotética que o giemsa e o carmim acético possuem menores afinidades
com os referidos componentes tecidulares.
REFERÊNCIAS
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