ESPECTROFOTOMETRÍA

UV VISIBLE
ESPECTROFOTOMETRÍA UV - Vis
• Introducción
• Definiciones básicas
• Sistemas absorbentes
• Sistemas conjugados
• Influencia del disolvente en las transiciones
• Instrumentación. El espectrofotómetro
– Fuente de energía radiante
– Monocromadores
– Celdas de muestras
– Detectores de radiación
• Aplicaciones analíticas
• Bibliografía
 INTRODUCCIÓN

• Método que se aplica para:

– Análisis cuantitativo de sustancias
– Determinación de estructuras moleculares
• Zonas del Espectro
– UV lejano (10 a 200 nm) “al vacío”
– UV próximo (200 a 400 nm)
– Visible (400 a 800 nm)
• Método de Absorción Molecular
– La absorción de REM provoca “salto” de los e-
exteriores a niveles de energía superiores
 INTRODUCCIÓN

> Frecuencia Espectro Visible < Frecuencia

longitud de onda (nm)

Violeta: 400 - 420 nm

Indigo: 420 - 440 nm
Azul: 440 - 490 nm
Verde: 490 - 570 nm
Amarillo: 570 - 585 nm
Naranja: 585 - 620 nm
Rojo: 620 - 780 nm
 DEFINICIONES BÁSICAS
• Espectro
– Representación gráfica de Absorbancia frente a λ
• Cromóforo
– Cualquier grupo de átomos que absorbe R.E.M.
• Auxocromo
– Grupo saturado que cuando se une a un
cromóforo desplaza la λ a valores mayores y
aumenta intensidad de absorción (OH-, NH2, S=).
 DEFINICIONES BÁSICAS
• Efecto Batocrómico
– Cambio en la absorción de energía hacia una λ
mayor.
• Efecto Hipsocrómico
– Cambio en la absorción de energía hacia una λ
menor.
• Efecto Hipercrómico
– Aumento en la intensidad de absorción.
• Efecto Hipocrómico
– Disminución en la intensidad de absorción.
 SISTEMAS ABSORBENTES

• Pueden absorber en UV Vis :

• Electrones de un enlace entre átomos
– Orbital enlazante (baja energía o estado
fundamental)
– Orbital antienlazante (alta energía o excitado)
• Electrones no compartidos (N2, O2, S2 y X)
 SISTEMAS ABSORBENTES
• La radiación aporta la energía suficiente para que se
den las transiciones electrónicas entre orbitales:
ƒ σ - σ∗
ƒ π - π∗
ƒ η - σ∗
ƒ η - π∗
 Tipos de Transiciones
σ σ*

ƒ Dos orbitales atómicos s se combinan para

dar orbitales moleculares σ y σ∗
ƒ Compuestos SATURADOS
ƒ La energía requerida es muy elevada
ƒ UV lejano
ƒ C – H (125 nm)
ƒ C – C (135 nm)
 Tipos de Transiciones
n σ*

ƒ Compuestos orgánicos saturados con pares de

e- no compartidos
ƒ -C-O, -C-S, -C-N, -C-Cl
ƒ 150 a 200 nm
 Tipos de Transiciones
π π* , n π*

ƒ Compuestos orgánicos INSATURADOS

ƒ Alquenos, carbonilo, alquinos
ƒ π a π∗ (160 – 200 nm)
ƒ n a π∗ (280 – 700 nm)
 SISTEMAS CONJUGADOS
• Poseen enlaces dobles y
sencillos alternos
– C=C-C=C-
– C=C-C=O
• Presentan transiciones π a
π ∗ y n a π∗
• Absorben a λ > que no
conjugado
• Debido a interacción entre
orbitales de cada enlace
OH O CH3
• Todas las sustancias CO2H O
H
coloreadas tienen un N

sistema de enlaces π HO
OH O
OH N
H
O
conjugados. ácido carmínico índigo
 EFECTO DEL DISOLVENTE
• El disolvente no ha de presentar absorción en UV
próximo o Visible, pero sí en el UV lejano
– Hidrocarburos saturados
– Metanol
– Eter dietílico
• Un aumento de la polaridad del disolvente desplaza
la λ 10 a 20 nm (Efecto Batocrómico o
desplazamiento al rojo)
• Cuando hay e- no compartidos, el disolvente polar
(agua, alcohol) desplaza la λ a valores < (Efecto
Hipsocrómico o desplazamiento al azul)
 EFECTO DEL DISOLVENTE
• Efecto Batocrómico (desplazamiento al rojo)
– En las transiciones π a π∗ los estados excitados son más
polares que los fundamentales
– Un aumento en la polaridad del disolvente hace que por la
interacción dipolo – dipolo, disminuya más la energía del
estado excitado que la del fundamental
– Lo cual produce un desplazamiento de las λ a valores
mayores (10 ó 20 nm)
• Efecto Hipsocrómico (desplazamiento al azul)
– En el caso de e- no compartidos se forman puentes de H
con los H+ del disolvente polar (agua, alcohol) y los e- no
compartidos
– La transición requiere mayor energía
 DISOLVENTES

Disolvente λ mínima (nm)

Acetonitrilo 190
Agua 191
Ciclohexano 195
Hexano 195
Metanol 201
Etanol 204
Eter 215
Metil Cloruro 220
Cloroformo 237
Tetracloruro de C 257
 INSTRUMENTACIÓN
• Tipos
– Colorímetro
– Fotómetro
– Espectrofotómetro
• Componentes
• Fuentes de radiación
• Selectores de longitud de onda
• Recipientes para muestras
• Detectores de radiación
 COLORÍMETRO

• Instrumento muy simple

• Ojo humano como sistema de detección
• Compara la intensidad de color de una
disolución problema con disoluciones
patrón de concentraciones conocidas
• A partir de la cual se determina la
concentración de la muestra problema.
 FOTÓMETRO

• Dispositivo que permite medir la

intensidad de una radiación
electromagnética
• Dispone de un "filtro", que selecciona
una zona estrecha de longitudes de
onda
• Fotocélula o fototubo para medir la
intensidad de la radiación.
 ESPECTROFOTÓMETRO
• A diferencia del fotómetro dispone de un
"monocromador“
• En lugar de filtros, hace una selección más
exacta de λ
• Ello permite hacer un barrido en una zona
amplia de λ
• El sistema de detección está constituido por
un fototubo o fotomultiplicador de mayor
sensibilidad.
 FUENTE DE RADIACIÓN

• Térmicas
– Lámpara de filamento de wolframio
que emite en la zona del visible.
• Descarga eléctrica a través de
gases.
– En la región UV se usan fuentes de
descarga eléctrica tales como la
lámpara de hidrógeno o la de
deuterio.
 MONOCROMADORES
• Sistemas para dispersar la radiación policromática y
aislar una radiación monocromática (una sola λ).
• Filtro
– Absorbe las λ que no interesan
• Monocromador
– Produce una anchura de banda más estrecha.
– Ranura de entrada
– Espejo colimador (haz paralelo)
– Prisma o red de difracción
– Elemento de enfoque.
• Poder de resolución, R
– Capacidad de separación de dos λ. R= λ /∆λ
RECIPIENTE MUESTRA

• Permite el paso de la
radiación sin absorberla
o dispersarla.
• Cuarzo o sílice fundida
• La longitud es de 1 cm
 DETECTORES
• Miden la intensidad de radiación del haz
emergente.
• Fotoeléctricos.
• Los fotones tienen suficiente energía para
excitar a los electrones exteriores del cátodo,
produciendo su ionización
• Se genera una corriente de electrones
proporcional a la intensidad de la radiación
que llega al detector.
 DETECTORES
• Fototubo de vacío
– Cubeta de vidrio con entrada de cuarzo, transparente a la
radiación UV.
– En su interior hay un cátodo de un compuesto ionizable y un
ánodo central.
– Al chocar la radiación con la superficie del cátodo, los
fotones son absorbidos por el material que lo recubre
– La energía se comunica a los electrones exteriores de los
óxidos que hay sobre la superficie.
– Estos electrones son atraídos por el ánodo y se produce una
corriente eléctrica que es proporcional a la potencia de la
radiación incidente.
 DETECTORES
• Tubo
fotomultiplicador
– Similar a un fototubo de
vacío
– Respuesta rápida
– Sensibilidad muy elevada
– Los electrones son
arrastrados por un campo
eléctrico, adquiriendo mayor
energía.
– Al chocar con un dínodo
transmite su energía y
desplaza más electrones y
así sucesivamente.
– Cada dínodo está a un
potencial eléctrico mayor
que el anterior.
 APLICACIONES

• Análisis cualitativo.
– El espectro de absorción Vis-UV permite
identificar especies a partir de las bandas
de absorción de mayor intensidad
– Sin embargo, la región IR es mejor para
ello
 APLICACIONES

• Análisis cuantitativo.
– Es una de las técnicas más útiles para
realizar determinaciones cuantitativas
– Muchas especies inorgánicas y orgánicas
absorben selectivamente en esta zona
– Sustancias con grupos cromóforos o
coloreadas.
 APLICACIONES
• Gran sensibilidad
• Puede analizar sustancias en
concentraciones entre 10-4 y 10-5 M.
• Es una técnica selectiva.
• Se puede encontrar una banda de λ en la
que solo absorba el componente deseado.
• Buena precisión y facilidad de manejo.
• Las especies no absorbentes pasan a serlo
cuando reaccionan y dan productos
coloreados.
 PROCESO
1. Elección de λ = máximo de absorción de la muestra
2. Preparación de patrones de concentraciones
conocidas
3. Medición de la absorbancia de los patrones
4. Construcción de la recta de calibrado
5. Ley de Lambert-Beer (concentración – absorbancia)
6. Lectura de la absorbancia de la muestra problema
7. Interpolación en la recta de calibrado
8. Determinación de la concentración desconocida.