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Módulo 2:

Relacionamento da célula com o meio envolvente

Transporte transmembranar
TRANSPORTE NÃO MEDIADO
(difusão simples)

TRANSPORTE MEDIADO

Canais (difusão facilitada)


Permeases (difusão facilitada ou transporte activo)
Difusão simples - cinética

A difusão simples obedece à primeira lei de


Fick:
J = -D !c
!x
J, densidade de fluxo (moles/seg/cm2)
D, constante de difusão (cm2/seg)
!C, gradiente de concentração do soluto
!x, distância percorrida pelo soluto

Através da membrana biológica:

J = -D
x !c
X, espessura da membrana e
espaço envolvente não homogéneo

J = P !c
P, constante de permeabilidade (cm/seg)

Um gráfico de J versus !C deve corresponder a uma linha recta cujo


declive é igual à constante de permeabilidade (P):

(cinética de primeira ordem)


J

[Soluto]
Difusão facilitada

PERMEASES
Ligam-se especificamente ao soluto (estereoespecificidade)
Sofrem alterações conformacionais que promovem o transporte do soluto
Medeiam processos de transporte do tipo passivo (difusão facilitada) ou
activo

CANAIS
Não se ligam especificamente ao soluto
Poros hidrofílicos na bicamada permitem a passagem de solutos específicos
(normalmente iões inorgânicos)
Transporte ocorre a taxas elevadas
O movimento do soluto ocorre unicamente a favor do seu gradiente
electroquímico (transporte passivo)
Difusão facilitada da glucose em humanos

Os seres humanos e outros mamíferos possuem várias


proteínas relacionadas (ISOFORMAS) que actuam como
facilitadores do transporte da glucose

As isoformas do tipo GLUT diferenciam-se pela localização


nos tecidos, parâmetros cinéticos e regulação

GLUT 1:
Eritrócitos

GLUT 4:
Células do músculo esquelético
Células do músculo cardíaco
Células adiposas
Transportadores GLUT da membrana dos eritrócitos

492 aa
12 α-hélices transmembranares
45 kDa
Glicosilada
Difusão facilitada: cinética do transporte mediado

EQUAÇÃO
DE MICHAELIS-MENTEN:

vi = Vmax [S]/([S] + Km)


Modelo de um canal iónico
Difusão facilitada por canais

Ao contrário das permeases, as proteínas do tipo canal


formam poros na membrana que permitem a passagem de
pequenas moléculas de tamanho e carga apropriados
Exemplos de canais

PORINAS membrana externa das bactérias

JUNÇÕES DO TIPO GAP:


- maioria das células animais
- movimento de pequenas moléculas e iões entre células adjacentes

AQUAPORINAS movimento da água

CANAIS IÓNICOS:
- medeiam o transporte de iões através da membrana
- presentes em todas as células
- Nas células animais desempenham um papel fundamental na polarização e
                despolarização da membrana plasmática
- nas plantas desempenham um papel  fundamental no transporte do K+
Peter Agre – Nobel Lecture 2003

The Aquaporin Water Channels

Peter Agre held his Nobel Lecture December 8,


2003, at Aula Magna, Stockholm University. He was
presented by Professor Bengt Nordén, Chairman of
the Nobel Committee for Chemistry.
Estrutura das aquaporinas
Canais iónicos: canais de K+ da bactéria Streptomyces lividans

Roderick MacKinnon – Nobel Lecture 2003

The Atomic Basis of Selective Ion Conduction in


Potassium Channels

Roderick MacKinnon held his Nobel Lecture December 8,


2003, at Aula Magna, Stockholm University. He was
presented by Professor Bengt Nordén, Chairman of the
Nobel Committee for Chemistry.

http://nobelprize.org/chemistry/laureates/2003/mackinnon-
lecture.html
Canais iónicos: canais de K+ da bactéria Streptomyces lividans
Canais iónicos

Taxa de transporte elevada

Exibem elevada selectividade de acordo com o tamanho e carga


do ião (canais específicos para cada um dos seguintes iões Na+, K+, Ca2+ e Cl-)

A maioria dos poros não estão permanentemente abertos


- voltage-gated channels
- ligand-gated channels

Papel fundamental na transmissão de impulsos eléctricos ao


nível da membrana das células nervosas
(Alan Hodgkin e Andrew Huxley, 1952 - neurónios gigantes de lula)
Canais iónicos de células vegetais
Canais iónicos e potencial de repouso em
células animais

(...)
Transportadores activos primários
H+
Plasma membrane proton pump
(plants, fungi, bacteria)
Na+K+ATPase
Na+ ATP
ATP
ATP F-ATPase
H+ V-ATPase
K+ H+ PPase 3.E. light absorption-driven
ATP 3.A. P-P-bond-hydrolysis-driven
transporters
drugs transporters
bacteriorhodopsin
ABC transporters
H+
3.D. oxidoreduction-driven
transporters
ATP Light
Ca2+ e-
cytochrome c oxidase
H+
Transporte activo primário energizado pelo ATP
Masasuke Yoshida

purificação do estudo “catálise 1997,


observação
complexo F1 cristalográfico rotacional”
experimental da
de F1 (1997 Nobel Prize) rotação da
subunidade γ
“The Nobel Prize is for the
persons who
proposed a very original idea,
persisted and
prevailed. Boyer deserved it.”
E ela gira...
Catálise rotacional
Na+ /K+-ATPase

Responsável pela distribuição assimétrica do Na+ e K+


através da membrana plasmática dos eucariontes
superiores
Na+ /K+-ATPase

Evidências experimentais obtidas em estudos efectuados com membranas


plasmáticas de glólulos vermelhos
(concentração de Na+, K+, ATP e inibidores pode ser manipulada de ambos os lados da
membrana):

1. O transporte de Na+ e K+ está fortemente acoplado à hidrólise de ATP;

2. O transporte de Na+ e K+ e a hidrólise de ATP pode ocorrer unicamente quando Na+ e o ATP
    estão presentes na face citoplasmática da membrana e o K+ na face exocitoplasmática;

3. A ubaína inibe o transporte quando presente na face exocitoplasmática (compete com o K+);

4.  Por cada molélula de ATP hidrolisada são bombeados 3 Na+ para o exterior e 2K+ para o
     interior;

5.  A energia livre resultante do movimento do ião Na+ e do ião K+ a favor de gradiente
    electroquímico pode conduzir à síntese de ATP pela Na+/K+ATPase.
Na+ /K+-ATPase
Relevância fisiológica da Na+/K+-ATPase

1. Efeito electrogénico directo

2. Efeito electrogénico indirecto

3. Regulação do volume celular

4. Transporte transmembranar de nutrientes

5. Regulação do pH da célula
? Em que consiste o
efeito electrogénico
indirecto da
+ +
Na /K -ATPase
Transporte activo: permeases do tipo ABC
Transporte activo: permeases do tipo ABC

Com domínios de ligação do ATP altamente conservados (ATP-


binding cassettes)

Bactérias: utilizam a energia associada à hidrólise do ATP


para transportar uma ampla variedade de moléculas incluindo
iões e açúcares

Eucariontes: MDR, multidrug resistence protein


CFTR,cystic fibrosis transmembrane condutance regulator
Transporte activo secundário

H+
+ + pH=5

+
-
ATP
ΔpH
+ ADP
+ Pi pH=7 ΔE
H+ S
ΔG < 0 ΔG > 0

H+ S
Simportador glucose:Na+
Transporte activo secundário
Ampla variedade sistemas de transporte transmembranar
accionados pela energia armazenada em gradientes iónicos em
procariontes e eucariontes

A energia livre associada ao movimento do ião inorgânico (Na+,


H+) a favor do seu gradiente electroquímico é usada como força
motora para o bombeamento através da membrana de outros
solutos contra gradiente de concentração (por intermédio de
uma permease específica)
Exs:
Células animais
Antiportador Na+/H+
Simportador Na + /HCO3-
Simportadores aminoácido/Na+
Simportadores açúcar/Na+
Antiportador Na+/Ca2+
Células vegetais
Antiportador sacarose/H+
Simportadores açúcar/H+
Antiportador Ca2+/H+
Antiportador Na+/H+
Leveduras
Simportadores açúcar/H+
Simportadores aminoácido/H+
Simportadores ác. orgânico/H+
Bactérias
Simportador lactose/H+
Transporte trans-epitelial da glucose

animais
Transportadores em plantas
Transportador lactose/H+ de E. coli

bactérias

Estrutura da permease da lactose de E. Coli. Domínios transmembranares (12) em


α-hélice. Modificação conformacional da proteína associada com o transporte (b).
Verde: Glu325 e Arg302 com cadeias laterais protonáveis. Vermelho: açúcar.
Potencial de membrana e transporte
transmembranar
Potencial de repouso da membrana das células nervosas e
musculares

Potencial de acção
Canais iónicos e potencial de repouso da membrana das
células animais
Equação de Nernst-Planck

Relacão entre a concentração de um dado ião e o potencial


de membrana

V = (RT/zF)ln(Co/Ci)
V, potencial de equilíbrio em volts
R, constante dos gases
T, temperatura absoluta
Z, carga do ião
F, constante de Faraday
C0 e Ci, concentração do ião fora e dentro da célula
Potencial de acção

Inversão rápida do potencial de


membrana resultante da abertura
sequencial seguida de fecho de
canais de sódio e de potássio
sensíveis à voltagem
Canais iónicos da junção neuromuscular

Modelo de um receptor sensível à acetilcolina


Família de canais de Na+, K+ e Ca2+ sensíveis à voltagem
The transporter classification system
http://www.tcdb.org/tcdb/index.php

A permease-specific TC number has 5 components:

V, W, X, Y, Z

V, class
W, sub-class
X, family or superfamily
Y, sub-family in a family or the family in a superfamily
Z, substrate or range of substrates
Transporter classification database

http://www.tcdb.org/browse.php
Endocitose

Incorporação de partículas de elevadas dimensões como


restos celulares e células intactas (ex: bactérias)
Endocitose
Endocitose mediada por receptores
Mecanismo para o transporte selectivo de macromoléculas
específicas (ex: incorporação do colesterol em células de mamíferos)
Endocitose mediada por receptores

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