1) Clonagem Ao unir dois ou mais fragmentos de DNA, um pesquisador pode ajustar a

sequência na junção de várias maneiras sutis, como visto nos exercícios a seguir.

(a) Desenhe a estrutura de cada extremidade de um fragmento de DNA linear produzido por
uma digestão de restrição EcoRI (incluindo aquelas seqüências remanescentes da seqüência de
reconhecimento EcoRI).

(b) O que acontecerá se estas pontas forem incubadas com DNA polimerase I, dNTPs nas
condições adequadas para amplificação dos ácidos nucleicos

(C) Desenhe a estrutura produzida se a estrutura derivada em (a) for tratada com uma
nuclease que degrada apenas DNA de cadeia simples.

2) DNA Sequencing The following DNA fragment was sequenced by the Sanger method. The
red asterisk indicates a fluorescent label.

Uma amostra do DNA foi reagida com DNA polimerase e cada uma das misturas nucleotídicas
(num tampão apropriado) listadas abaixo. Dideoxinucleótidos (ddNTPs) foram adicionados em
quantidades relativamente pequenas.

O DNA resultante foi separado por eletroforese em gel de agarose e as bandas fluorescentes
no gel foram localizadas. O padrão de bandas resultante da mistura de nucleotídeos é
mostrado abaixo. Assumindo que todas as misturas foram executadas no mesmo gel, como
eram as outras faixas do gel?
3) A doença de Huntington (DH) é um distúrbio neurodegenerativo hereditário, caracterizado
pelo comprometimento gradual e irreversível das funções psicológicas, motoras e cognitivas.
Os sintomas geralmente aparecem na meia-idade, mas o início pode ocorrer em quase todas
as idades. O curso da doença pode durar de 15 a 20 anos. A base molecular da doença está se
tornando melhor compreendida. A mutação genética subjacente à DH foi atribuída a um gene
que codifica uma proteína (Mr 350.000) de função desconhecida. Em indivíduos que não
desenvolverão HD, uma região do gene que codifica o terminal amino da proteína possui uma
sequência de códons CAG (para glutamina) que é repetida 6 a 39 vezes em sucessão. Em
indivíduos com HD de início na idade adulta, esse códon é tipicamente repetido 40 a 55 vezes.
Em indivíduos com HD na infância, esse códon é repetido mais de 70 vezes. A duração dessa
repetição simples de trinucleotídeo indica se um indivíduo desenvolverá HD, e
aproximadamente a que idade os primeiros sintomas irão ocorrer.

Uma pequena sequência referente a região amino terminal do gene de HD de 3,143-codons é

apresentada abaixo. A sequência nucleotídica do DNA é mostrada a preto, a sequência de
aminoácidos correspondente ao gene é mostrada a azul e a repetição CAG é sombreada.
Delineie um teste baseado em PCR para DH que poderia ser realizado usando uma amostra de
sangue. Suponha que o primer de PCR deve ter 25 nucleotídeos de comprimento. Identifique o
tamanho dos produtos de PCR para as três situações possíveis, ausência de DH, DH juvenil e
adulta.

4) Quais as características básicas que um plasmídeo deve ter?

 De maneira bem humorada e com certo exagero, a figura faz referência aos

a) organismos transgênicos, nos quais genes de uma espécie são transferidos para outra
espécie de modo que esta última expresse características da primeira.

b) organismos geneticamente modificados, nos quais técnicas de engenharia genética

permitem que se manipulem genes da própria espécie, fazendo-os expressar
características desejáveis.

c) animais híbridos, obtidos a partir do cruzamento entre indivíduos de espécies

diferentes, o que permite que características de uma espécie sejam expressas por espécies
não aparentadas.

d) animais obtidos por seleção artificial, a partir da variabilidade obtida por acasalamentos
direcionados, processo que permite ao homem desenvolver em espécies domésticas
características de interesse comercial.

e) animais resultantes de mutação gênica, mecanismo a partir do qual os indivíduos da

espécie produzem novas características, em resposta às necessidades impostas pelo
ambiente.

5) Com base nos conhecimentos sobre biotecnologia, considere as afirmativas.

I - Na biotecnologia aplicada, os organismos transgênicos, como, por exemplo, bactérias,

fungos, plantas e animais geneticamente melhorados, podem funcionar para a produção de
proteínas ou para propósitos industriais.

II - Organismos transgênicos caracterizam-se pela capacidade de produzir em grandes

quantidades a proteína desejada, sem comprometer o funcionamento normal de suas células,
e de transferir essa capacidade para a geração seguinte.

III - O melhoramento genético clássico consiste na transferência do material genético de um

organismo para outro, permitindo que as alterações no genoma sejam previsíveis; já a
engenharia genética mistura todo o conjunto de genes em combinações aleatórias por meio
de cruzamentos.

IV - A engenharia genética compreende a manipulação direta do material genético das células,

sendo que o gene de qualquer organismo pode ser isolado e transferido para o genoma de
qualquer ser vivo, por mais divergentes que estes seres estejam na escala evolutiva. Assinale a
alternativa CORRETA.
a) Somente as afirmativas I e II são corretas.

b) Somente as afirmativas I e III são corretas.

c) Somente as afirmativas III e IV são corretas.

d) Somente as afirmativas I, II e IV são corretas.

e) Somente as afirmativas II, III e IV são corretas.

6) Três em cada quatro pessoas nunca ouviram falar sobre os produtos alterados em
laboratório (transgênicos). A respeito dos transgênicos, são feitas as afirmações abaixo.

I. São sempre indivíduos incapazes de se reproduzir.

II. Aumentam a produtividade dos alimentos.

III. São organismos tanto vegetais quanto animais, produzidos pela Engenharia Genética, que
contêm genes de outra(s) espécie(s).

IV. São vegetais produzidos por radiação que se tornam resistentes a predadores.

Assinale

a) se somente I e II estiverem corretas.

b) se somente II e III estiverem corretas.

c) se somente I e III estiverem corretas.

d) se somente II e IV estiverem corretas.

e) se somente III e IV estiverem corretas.

7) Para um pesquisador transferir um gene de interesse, diferentes etapas são cumpridas em

laboratório, entre as quais: a utilização de enzima do tipo (1), para o corte e a separação do
segmento de DNA a ser estudado; a extração e o rompimento de (2), e a inclusão em (2) do
segmento obtido (gene isolado) com o auxílio de enzimas do tipo (3). Os números 1, 2 e 3
indicam, respectivamente:

a) Enzima de restrição, plasmídio e enzima ligase.

b) Enzima transcriptase reversa, cromossomo circular e enzima de restrição.
c) DNA recombinante, RNA plasmidial e enzima exonuclease.
d) Enzima transcriptase reversa, plasmídio e enzima de restrição.
e) Enzima de restrição, RNA plasmidial e enzima transcriptase reversa.

8) Determine se as afirmações abaixo estão verdadeiras ou falsas, justificando e corrigindo

estas últimas.
a) Certos microrganismos podem ser manipulados em laboratório para incorporarem, em
seu material genético, segmentos do DNA de outro organismo. O DNA recombinante
então obtido pode ser clonado e utilizado, por exemplo, na produção de hormônios
para a espécie humana.
b) Organismos geneticamente modificados ou transgênicos são obtidos através da
transferência de algumas células de um organismo X para um outro organismo Y.
c) Organismos geneticamente modificados ou transgênicos são obtidos através da
expressão do DNA recombinante de um organismo doador nas células de um
organismo aceptor
9) Defina a função das estruturas básicas de um plasmídeo
a) Sítio de policlonagem
b) Gene de resistência a antibióticos
c) Origem de replicação
10) Explique a função das enzimas de restrição no processo de clonagem gênica.

11) Proponha em até 100 palavras um estudo do seu interesse envolvendo clonagem gênica,
destaque os métodos que serão empregados, o potencial para a ciência, sociedade e economia
do produto a ser gerado.