Efecto de la serie de Hofmeister en las propiedades ácido-base de la I N F I Q C

albúmina sérica humana: estudio experimental y modelo teórico

Franco P. Bonafé , Osvaldo R. Cámara , Fabiana Y. Oliva
INFIQC-Departamento de Fisicoquíımica, Facultad de Ciencias Químicas,
Universidad Nacional de Córdoba,
Córdoba, Argentina
CONICET
U N C
Efecto electrostático
5
La serie de Hofmeister propuesta por Franz Hofmeister en 1888 propone un orden para cationes y aniones basado en su El modelo electrostático tampoco introduce ningún elemento de 10

capacidad para aumentar o disminuir la solubilidad de proteínas. La serie para aniones, especificidad de iones en el sistema, pero da una explicación más 9

CO32- > SO42- > S2O32- > H2PO4- > F- > Cl- > Br- > NO3- > I- > ClO4- > SCN- satisfactoria del comportamiento experimental observado y permite 4
8

7
muestra a la derecha los iones que favorecen la solubilidad de proteínas, conocidos tradicionalmente como caótropos, y a la extenderse fácilmente para incluir interacciones no electrostáticas. Se parte 6

izquierda iones que favorecen la precipitación de proteínas, conocidos como cosmótropos. La denominación de caótropos y de la expresión para el potencial químico de una especie cerca de la interfaz: 5

/J
3
4
cosmótropos surgió a causa de que originalmente se pensaba que la acción de estos iones estaba dada por habilidad para (3) 3

/J
desordenar u ordenar, respectivamente, las moléculas de agua del seno de la solución. Mediante diversas técnicas se ha Usando la ecuación de Poisson-Boltzmann para obtener un resultado 2
2
probado que el efecto de la serie de Hofmeister no está dado por tal cambio de ordenamiento, y recientemente se han autoconsistente de potencial electrostático de superficie, tenemos: 1

0
propuesto diversas explicaciones para el fenómeno1. (4) 4 5 6 7 8 9 10 11
1
En el presente trabajo se pretende dar una explicación tentativa para este fenómeno mediante la observación del desarrollo de pH

carga de la albúmina sérica humana (ASH), al realizar titulaciones potenciométricas ácido-base en diferentes electrolitos Se puede obtener una solución uni-dimensional de esta ecuación en caso de
cuyos aniones pertenecen a la serie de Hofmeister. Se utilizaron sales de sodio en todos los casos y se analizó el efecto del tratarse de un electrolito simétrico y potenciales de superficie altos, 0

anión. En primer lugar se utilizó una aproximación conocida basada en posibles cambios conformacionales de la proteína que consiguiendo la siguiente expresión:
(6) 4 5 6 7 8 9 10 11
producirían bloqueo u obstrucción estérica de grupos ácidos y básicos imposibilitando la participación de todos sus grupos
pH
ante el agregado de ácido o base. Posteriormente se propuso modelar el sistema en términos electrostáticos utilizando la La densidad superficial de carga en la superficie de la doble capa es:
5
ecuación de Poisson-Boltzmann para evaluar el efecto de la atracción/repulsión electrostática de la proteína sobre los (7) 1400

protones como posible factor determinante del comportamiento ácido-base observado. Finalmente se introdujo un término no Integrando entre d e infinito, se obtiene 1200
4
electrostático en la ecuación y se recalcularon los parámetros con el fin de dotar al modelo de especificidad en los iones (8) 1000

participantes. 800
3
Despreciando el término negativo de la exponencial, desarrollando la

/J
600

exponencial positiva mediante la serie de Taylor y tomando la aproximación 400

/J
2
lineal, se obtiene el siguiente resultado: 200

La albúmina sérica humana (fracción V) fue provista por Sigma (CAS 70024-90-7) y utilizada sin ningún tratamiento (9) 0
1
adicional de purificacion. Las sales de sodio fueron provistas por Merck. Las soluciones de proteína (1 mg mL-1) fueron Suponiendo que no existe interacción específica, es claro que la densidad 4 5 6 7 8 9 10 11
pH
preparadas en distintos electrolitos con fuerza iónica de 10-1M a 10-3M utilizando agua Milli-Q (Millipore System). Las superficial de carga en la superficie de la proteína debe ser la misma en la
titulaciones potenciométricas se realizaron utilizando un titulador automático 905 Titrando (Metrohm) con un electrodo de superficie que delimita la doble capa, entonces 0

vidrio y burbujeo de nitrógeno durante todo el proceso. Se utilizaron soluciones de hidróxido de sodio y ácido clorhídrico (10)
0.1 M previamente estandarizadas. La concentración de proteína fue determinada espectrofotometricamente a 279 nm Y para una proteína con l = k+j grupos ionizables y área a se obtiene que -1
5 6 7 8 9 10 11
(11)
pH

Figura 2. Valores de potencial

Sustutiyendo (11) en (9), se llega a la expresión final para el potencial electrostático (rojo) y no electrostático
(negro) para fuerza iónica 0.01 M (arriba)
Efecto del número de grupos electrostático utilizada: y 0.1 M (abajo).
(12)
40 -50
a) b) c)
0

0 -50
Efecto no electrostático: fuerzas de dispersión y polarizabilidad del anión
-100
-100
-40 Trabajos previos2,3 han propuesto una aproximación para considerar la energía dada por interacciones no
+

+
ZH
+

ZH
ZH

-150
electrostáticas que percibe un ion cerca de una partícula esférica:
-80 -200

-150
-250
-120 Esto permite incluir la identidad de los iones en el modelo pues el coeficiente de dispersión B depende entre otros
3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10
-300
3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10 4 5 6 7 8 9 10 4 5 6 7 8 9 10
factores de la polarizabilidad de los iones. Se tomó para este trabajo B=0 para el NaCl y B= –10.10-50 J m-3 para el
pH pH pH pH pH pH NaSCN. En la figura 3 se muestran las curvas experimentales y teóricas para la titulación de ASH en NaCl y
d) e) f) NaSCN. Es evidente que el efecto de la polarizabilidad permite obtener un ajuste mucho mejor para el NaSCN 10-2
0 0
0 M a comparación de la curva que sólo considera factores electrostáticos.
0 0

-50 -20
-50 -50 -20
+

+
ZH

+
ZH

ZH

NaCl 0.01 M
+

-40
ZH

-40
NaSCN 0.01 M

-100
-40
-100 -100
-60

4 5 6 7 8 9 10
pH -60
+

-150
ZH

ZH

-150 -150
3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10 3 4 5 6 7 8 9 10 -80
pH pH pH pH pH pH
-60

Figura 1: a) H2O b) Na2SO4 c) NaF d) NaCl e) NaI f) NaSCN. En cada caso el gráfico de la izquierda superpone los datos experimentales con el ajuste -100
teórico considerando todos los grupos presentes, mientras que el de la izquierda muestra la curva obtenida para la cantidad de grupos disponibles en la
titulación en agua. -120
5 6 7 8 9 4 5 6 7 8 9 10
pH pH
Los resultados de las titulaciones se muestran en la
Figura 3. ZH+ vs. pH para ASH en NaCl (azul) y NaSCN (rojo) en concentraciones 0.01 M (izquierda) y 0.1 M (derecha). El ajuste teórico para la
Figura 1 como ZH+ vs. pH, donde ZH+ es la cantidad de Número de grupos titulación en NaCl considera el efecto electrostático y desprecia el no electrostático. Para el caso del NaSCN se muestra en línea negra el ajuste
protones tomados/liberados por una molécula de Grupo pK int + med Número de grupos
disponibles en agua considerando el efecto electrostático solamente y en rojo los efectos electrostáticos y no electrostáticos.
proteína a cada valor de pH. α-Carboxilo 3,8 1 1
Para ajustar la curva teórica se parte del balance de
β-,γ-Carboxilo 4,0 105 60
carga para la titulación (ecuación (1)) considerando
todos los grupos titulables de la proteína que se Imidazol 6,9 17 10 Se concluye que tanto las interacciones electrostáticas como las fuerzas de dispersión no electrostáticas son
muestran en la tabla (1) con sus respectivos valores de α-Amino 7,8 1 1
relevantes en el análisis de los efectos de la serie de aniones de Hofmeister sobre la ASH. Los iones más
pKint+med. polarizables (caótropos, a la derecha de la serie) presentan interacciones no electrostáticas más importantes y puede
ε-Amino 9,8 60 14
La fórmula final para el volumen de base en función de penetrar más profundamente en las proximidades de la superficie de la proteína, por lo que pueden favorecer una
OH Fenólico 10,4 20 20 disminución en la tensión superficial, desordenamiento de las moléculas de agua de la interfaz (en contraposición
[H+]=10-pH/γH+ se muestra en la ecuación (2). Esta
ecuación incluye el término de la fuerza iónica pues Guanidilo >12 23 23 con las ideas originales sobre el orden del seno de la solución) y una consecuente exposición de grupos ionizables,
contempla los coeficientes de actividad, aunque no da generando mayor desarrollo de carga. Este desarrollo de carga sumado a un desplazamiento del equilibrio hacia el
Tabla (1). pKa de grupos con actividad ácido-base presentes en la ASH.
cuenta de ningún tipo de especificidad del ion. estado desplegado debido al cambio de tensión superficial, puede explicar la mayor solubilidad de las proteínas en
presencia de estas sales. Los iones menos polarizables (cosmótropos, a la izquierda de la serie) pueden penetrar
menos en la interfaz, presentan un ordenamiento mucho mayor en su esfera de hidratación y aumentan la tensión
(1)
superficial, favoreciendo al estado nativo de la proteína e impidiendo la ionización de grupos que se encuentran
estéricamente desfavorecidos; por consiguiente generando un menor desarrollo de carga en los experimentos de
titulaciones potenciométricas.
(2)

Al observarse una diferencia significativa entre la curva teórica utilizando todos los grupos y la experimental, se propuso Los autores agradecen a CONICET y SeCyT-U.N.C. por el apoyo financiero otorgado a través de subsidios al presente
como primera hipótesis que cierta cantidad de grupos podrían encontrarse impedidos para reaccionar debido a cambios proyecto de investigación.
conformacionales que pueden ocurrir en el medio de reacción. Se buscó entonces una cantidad de grupos que ajustara la curva
de titulación en agua, y se tomó ésta como base para comparar con las demás curvas. En efecto, el ajuste resultó ser mucho
mejor, pero esta aproximación carece de cualquier tipo de especificidad en el tratamiento de los distintos electrolitos. 1. Zhang , Cremer, Current Opinion in Chemical Biology, 2006, 10:658–663
2. Boström, Lonetti, Fratini, Baglioni, Ninham, J. Phys. Chem. B, 2006, 110:7563–7566
3. Boström, Williams, Ninham, Biophysical Journal, 2003, 86:686–694