UNIVERSIDAD DE CONCEPCIÓN

FACULTAD DE MEDICINA
TECNOLOGIA MÉDICA

GUIA DE TRABAJO PRACTICO

ULTRAMICROTOMIA
2011

Docente: Patricia Grez S.

Microscopia Electrónica y Microanálisis Celular. 1

Tecnología Medica. Morfofisiopatologia y Citodiagnóstico.
Objetivos del Práctico:

Al finalizar el trabajo práctico, los alumnos deberán ser capaces de:

1. Confeccionar cuchillos de vidrio
2. Tallar los bloques
3. Obtener cortes semifinos
4. Recoger cortes semifinos
5.- Teñir cortes semifinos

Indice
I.- Confección de cuchillos de vidrio

 Preparación del vidrio

 Corte de la barra
 Confección de la balsa

II.- Tallado de los tacos o bloques

III.- Obtención corte semifino

IV.- Horario de practico.

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Tecnología Medica. Morfofisiopatologia y Citodiagnóstico.
 5. I.- CONFECCION DE CUCHILLAS DE VIDRIO

Pasos a seguir para la confección de cuchillos de vidrio.

Paso 1: Preparación del vidrio

Lavado del vidrio que se va a utilizar para la confección de las cuchillas, es importante que
el material este limpio sin grasa.
Tomar el extremo inferior del vidrio con un papel de seda, agregar una pequeña cantidad de
detergente suave y esparcir por todo el vidrio, luego enjuagar con agua corriente. Secar con
toalla nova, sin tocar con las manos.

Paso 2: Corte de la barra en cuadrados

Las barras de vidrio son de aproximadamente de 20 x 2.5 cm x 6 mm de espesor. Se deben
cortar en tantos cuadrados como sea posible.

Para esto se utiliza la máquina para fabricar las cuchillas (Marca LKB ver Fig 1 o Fig 2).
Consta de una plataforma con medios de apoyo y centrado del vidrio donde se apoya y fija
para cortarlo. Un soporte con arista de posición ajustable, además de un tornillo que regula
una plataforma que permite que el vidrio quede inmóvil para el corte, además posee un
sistemas que realiza el corte por medio de un diamante el cual se encuentra en una palanca
que avanza manualmente. En su parte inferior e inmediatamente bajo el vidrio se encuentra
un diamante, así mediante el empuje y presión de una palanca que se encuentra en la cara
anterior de la maquina se logra marcar el vidrio por la zona donde ira el corte.

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 Maquina LKB para confeccionar
cuchillas de vidrio

Rueda que al girar aplica

presión sobre el vidrio y este se
fractura por la zona de fractura
anteriormente marcada con
diamante.
Fig. 1

Manilla de ajuste
Vidrio para que el vidrio no
se mueva

Palanca deslizante que lleva

el diamante para cortar el
vidrio

Fig. 2

La palanca se retira hacia fuera de

la maquina y esto permite que el
diamante que está bajo el vidrio
marque la zona de fractura.

Fig 3

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 Paso 3. Obtención de 2 triángulos rectángulos.

Aplicar presión suavemente,

hasta que se quiebre el
Colocar la tapa de la maquina. vidrio, justo en la zona
donde se marcó.

Fig 4

Imagen ampliada del vidrio luego del corte.

1)Inspeccione las esquinas y

los lados del cuadrado con
cuidado. Seleccione la esquina
que sea la más lisa (sin
melladuras) y la más
perpendicular al cuadrado de
2.54 cm.
2) Colocar el cuadrado de cristal
sobre el plato superior con la
esquina seleccionada asentada
en la muesca del plato.
Los bordes escarificados del
cuadrado de cristal deberían
aumentar.
NOTA: Colocar un cristal con
bordes escarificados en la
muesca del plato, podría causar
Fig 5 cuchillos de mala calidad.

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Paso 4. Elección de los mejores cuchillos.

Se obtiene así 2 triángulos con

un ángulo de 90°
ANAQUEL

El anaquel (Shelf A) determina el ángulo de

cuchillo. Si este es pequeño, más agudo es el
ángulo de cuchillo. a la inversa, un anaquel
más grande determina un ángulo de cuchillo
mas amplio. El ajuste fino de los ángulos del
cuchillo es posible ajustando la perilla de
ajuste vernier de ángulo en la primera
posición.
Examine el anaquel para determinar si su
borde de cuchillo correspondiente es
aceptable.
A) La anchura del anaquel debería ser menos
que o igual: 0.5 mm para cristal de 6 mm y 1
mm para cristal de 9 mm.
B) El borde de cuchillo (tocando la
hipotenusa) debería ser visualmente
perpendicular (en un ángulo de 90°)

Para comprobar la calidad de las cuchillas luego del corte se observa el borde del filo en
una lupa, donde principalmente se debe observar la Arruga de fractura que debe tener una
caída brusca, además de que el pico de deflexión sea mínimo o nulo, carecer de borde
escarificado, ser una línea de corte lo mas recta posible u poseer un filo útil mínimo (4 a 5
mm)

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Paso 5: Confección de las balsas

Luego de obtener las cuchillas, con una cinta adhesiva preferentemente metálica, se
procede a la confección de una balsa en la que se colocara el agua para recoger los cortes
en el ultramicrótomo. Esta balsa se debe sellar en su base con esmalte para uñas.

II.- TALLADO DE LOS TACOS

Luego de 24 horas después de la polimerización los tacos están aptos para ser cortados,
pues han estabilizado todas sus fuerzas internas. Para ello se retiran del envase donde se
incluyo y se procede a tallar el taco con cuchillas firmes de acero, con el fin de retirar todo
el epón que rodea el tejido. Para ello se talla de manera que se forme una pirámide truncada
que deje en su vértice solo al tejido que se quiere cortar.

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III.- OBTENCION DE CORTE SEMIFINO

Paso 1: luego de tallado el taco, se coloca la cuchilla de vidrio en el ultramicrótomo, se le

agrega agua a la balsa, esta debe tener el mismo nivel de la cinta para el correcto
deslizamiento del tejido en ella y para observar el color del corte.

Paso 2: una vez que se ha degastado el bloque y que se obtenga el tejido completo, se
activa el avance mecánico, para obtener los cortes semifinos, Mediante el sistema óptico
del ultramicrótomo debe ser controlado el color del corte. El color adecuado para el corte
semifino es la coloración púrpura (150 a 190 nm)

Paso 3: Una vez obtenidos varios cortes en la balsa, se detiene el ultramicrótomo y se

procede a recoger los cortes, para esto se tiene una varilla de madera que en su extremo
posee una pestaña, visualizados al sistema óptico del ultramicrótomo se recogen los cortes,
tomándolos desde la cara que queda bajo el agua y depositándolos en un portaobjetos al
cual previamente se le ha colocado una gota de agua.

Paso 4: una vez colocado varios cortes en el portaobjetos , se coloca este en una platina
caliente por 20 segundos y los cortes quedan adheridos al vidrio. Los cortes semifinos se
tiñen directamente con azul de toluidina al 1% en borax. Depositando una gota de este
sobre el tejido, luego de esto se coloca nuevamente sobre la platina caliente, cuidando que
no se seque, cuando solo los bordes están secos se lava con agua destilada hasta retirar el
exceso de colorante.

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 Fig.1 Fig.2 Fig.3

Fig.4 Fig.5

Fig.1 a Fig.5, muestra la secuencia a seguir para la toma de los cortes semifinos.(dibujos F.
Cárcamo 2009)

Proceso para la obtención y observación del corte semifino al microscopio optico, donde se
seleccionará la zona optima, donde se retallará el bloque. (Dibujos A. Jimenez 2009)

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