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RT-qPCR
e qPCR

Universidade Federal Do Pampa - CAMPUS URUGUAIANA

 Características Gerais

Amplificação de ácidos nucleicos.

Detecção e identificação do DNA/RNA do vírus.
Quantificação dos ácidos nucleicos da amostra.
Etapas:
1. extração do ácido nucleico;
2. amplificação;
3. detecção do produto amplificado.
A amplificação pode ser monitorada enquanto
ocorre, através de:
Sondas marcadas com substâncias
indicadoras;
Corantes intercalantes de DNA.

Fonte: Canva
 Princípios da técnica
Ciclos repetidos de aquecimento e resfriamento
desnaturam a molécula de DNA.
A enzima tac polimerase adiciona nucleotídeos às
fitas, reproduzindo cópias da fita original.
Para vírus de RNA, utiliza-se a técnica de
transcrição reversa.
O agente fluorescente liga-se à cada fita dupla
produzida e emite um sinal de fluorescência.
Só é possível análise em equipamentos adequados
para leitura da fluorescência.

Fonte: Canva Fonte: Khan Academy

 Vantagens X Desvantagens
Pode ser realizado nos
primeiros dias de sintomas.
Exame confirmatório, não
sendo necessário fazer
exames complementares.
Maior especificidade e
sensibilidade no diagnóstico.
Detecta e quantifica, em
tempo real, a amplificação
da amostra e seus ácidos
nucléicos, requerendo 1000x
menos material genético
para análise.
Maior tempo de espera para
obter um diagnóstico pela
especificidade do exame
(quando comparado ao teste
rápido).
Necessita-se de uma
estrutura laboratorial
equipada para a análise final
das amostras.
Precisa-se de uma equipe
qualificada, pois trata-se
de um exame complexo e
que deve ser realizado com
medidas de segurança
especiais.
Alto custo do equipamento.
 Aplicação
Diagnóstico confirmatório de doenças virais de
importância veterinária e humana.
Uma das utilizações dos testes RT-qPCR e qPCR
ocorre em casos que o paciente apresenta sinais
que levam a suspeita clínica da doença, porém
apresentaram resultados negativos no teste
rápido de diagnóstico.
Exemplos: Imunodeficiência felina (FIV)
Coronavírus (SARS-COV-2)
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Salve para não esquecer!

Autoria: Clarissa Moreira, Gabriel Fialho, Isabela Marçal, Larissa Weide, Letícia Schlabendorff
Universidade Federal Do Pampa - CAMPUS URUGUAIANA