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PROGRAMA TEÓRICO
Contenido.
I. Introducción.
II. Desarrollo histórico de la microbiología.
III. Fundamentos de la microbiología.
IV. Genética microbiana.
V. Relación huésped- parásito.
VI. Control del desarrollo bacteriano.
VII. Impacto de los microorganismos en la Ing. Genética y la Biotecnología.
VIII. Interacción e impacto de los microorganismos en el medio ambiente.
I.- INTRODUCCIÓN
Definición:
La Microbiología se define etimológicamente del Griego MICROBIO y del griego LOGOS
que significa tratado. Es una ciencia que estudia o que trata de los organismos vivos invisibles
a simple vista o de tamaño microscópico. Éstos se denominan MICROBIOS,
MICROORGANISMOS o PROTISTAS.
Alcances de la Microbiología:
La Microbiología es una ciencia que se dedica al estudio de las regularidades que rigen la vida
y el desarrollo de los microorganismos; así como sus características, relaciones mutuas y su
relación con otros grupos de organismos. Algunos microorganismos son útiles y otros dañinos
que causan alteraciones tanto en el organismo humano, animal, vegetal, como en la naturaleza
inanimada.
Hoy los microorganismos son utilizados por los investigadores para el estudio de
prácticamente de todos los fenómenos biológicos principales.
Los microorganismos son responsables de muchas enfermedades que han sido plaga de las
civilizaciones durante siglos.
Antes que se descubriese que los microorganismos eran causantes de enfermedades
antiguamente moría bastante gente por brotes de enfermedades como difteria, viruela, peste,
etc.
Sin embargo, la prevención de la enfermedad fue uno de los primeros puentes hacia los que se
enfocó la microbiología y sigue siendo uno de los principales objetivos.
Campos de aplicación de la microbiología
Cabe mencionar que estas disciplinas no abarcan todos los aspectos microbiológicos,
por lo que no es raro que exista una mayor especialización en algunos aspectos biológicos de
un grupo específico de microorganismos, ejemplo: la genética bacteriana, la ficología de las
algas, citología de las bacterias, etc.
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Indudablemente que el mérito no es para el primero que se le ocurrió la idea, sino para aquel
que convence al mundo.
De esta manera, aparecen los nombres más famosos de personas que convencieron ya sea
desarrollando una técnica, ideando un instrumento o exponiendo algún concepto, que explica
sus hallazgos claramente y con atracción; y que finalmente fue adoptado, de tal forma que la
ciencia floreció y evolucionó.
Se mencionará aquí algunos datos históricos, que nos servirán principalmente para
comprender el origen de la microbiología como ciencia, así como la importancia que ésta tiene
en el campo de la investigación.
Las relaciones que hiciera Leeuwenhoek sobre la ubicuidad de los microorganismos, por
ejemplo, permitieron que 200 años más tarde, Louis Pasteur, descubriera la participación de
estos microbios en las reacciones de fermentación. A Koch, Smith y a muchos otros; descubrir
la relación de los microorganismos con las enfermedades.
A Galileo y Robert Hooke, en 1610 y 1665 respectivamente se deben las primeras nociones de
los microscopios. En su constitución eran más semejantes a los modernos que los fabricados
por Leeuwenhoek, aunque los lentes de éste eran mejor tallados.
Leeuwenhoek describió los organismos que otros ya habían visto, no se duda que vio
bacterias, hongos y muchas formas de protozoos.
En 1749, John Needham (1713-1781), experimentando con carne expuesta a cenizas calientes
observó la aparición de organismos que no estaban presentes al principio del experimento.
Spallanzani (1729-1799) hirvió caldo de carne durante 1 hora y después selló los frascos. No
aparecieron los microbios.
Por último el concepto de la generación espontanea que resucitado por última vez por
Pouchet, quien publicó en 1859 un extenso estudio probando su existencia, pero Pouchet
carecía del ingenio, el ímpetu y el tesón de Louis Pasteur (1822-1895).
Y fue Pasteur quien llevó a cabo experimentos que pusieron punto final a la discusión,
publicando sus resultados en 1864. Sus frascos no produjeron signos de vida.
Louis Pasteur empezó su brillante carrera como profesor de química en la Universidad de
Lille, Francia.
Estudió métodos y procesos que intervenían en la producción (vinos y cerveza) para que
fueran de buena calidad y constante.
Observó la fermentación que llevaban a cabo los microbios para obtener alcohol a partir de las
frutas y los granos.
Pasteur señaló que los microbios no deseables podrían ser eliminados por calentamiento, lo
que no alteraba el aroma de los jugos, pero sí para hacer inocuos a los microorganismos.
Observó que manteniendo los jugos a una temperatura de 62º C por media hora se lograba lo
anterior, y que actualmente se conoce como proceso de pasteurización, utilizado ampliamente
en la industria.
Investigó por años sobre la enfermedad pebrina (enfermedad en el gusano de seda) a solicitud
del gobierno francés, debido al daño que este gusano estaba ocasionando en la industria
francesa, y finalmente pudo aislar el parásito causante de la enfermedad.
Después de aislar a los microbios a partir de la sangre de animales enfermos los cultivó en
frascos de laboratorio.
Robert Koch (1843-1910) médico meticuloso y que a veces se olvidaba de ejercer su profesión
para jugar con la nueva y fascinante ciencia como la bacteriología, trabajaba al mismo tiempo
sobre la enfermedad del carbunco en Alemania.
Él fue quien descubrió los bacilos típicos con puntos angulosos en la sangre de bovinos que
habían muerto de carbunco.
A partir de estos experimentos examinó y aisló el microorganismo y fue cuando por primera
vez se demostró su relación con la enfermedad.
Mientras tanto Koch perfeccionó sus métodos para el estudio de las bacterias. El
descubrimiento de cultivos sólidos fue una de sus más grandes contribuciones.
Koch ideó diferentes técnicas con las que estudió muestras de pacientes con tuberculosis y
después de una serie de pruebas anunció el microorganismo que causa la tuberculosis.
Cabe recalcar que la utilización de cultivos puros tiene gran importancia no solo en el estudio
de poblaciones infectadas sino en los avances que se han tenido en otras ramas, como la
microbiología marina, microbiología del conducto intestinal y otras las cuales requieren:
Revisando cada paso de su experimento encontró que en la inoculación había utilizado los
cultivos puros viejos en lugar de los nuevos que había preparado. Esto lo llevó a repetir el
experimento pero inoculando de los dos tipos de cultivo a diferentes grupos de pollos, lo que
le sirvió para demostrar el principio de inmunización.
A los cultivos viejos (atenuados) los llamó vacunas, término derivado de la palabra vaca en
honor de Jenner y aplicó el término vacunación a la inmunización con cultivos de bacterias
atenuadas, aunque no se tenga relación alguna con las vacas.
La fama de Pasteur prevaleció en toda Francia, por lo que no fue sorprendente que se
enfrentara a un mayor reto cuando se le pidió sobre una enfermedad que afectaba a los seres
humanos, enfermedad transmitida al hombre por mordeduras de perros, gatos y otros
animales; la rabia.
Los éxitos de Pasteur y de Koch les hicieron acreedores de honores y premios por sus
compatriotas.
Koch llegó a ser profesor de higiene y director del Instituto de Enfermedades Infecciosas,
fundado por él en la Universidad de Berlín.
Debido a estos logros y los anteriormente expuestos, el periodo de 1880 y 1900 se considera
como la primera época de oro y un paso sustancial de la infancia a la adolescencia para la
microbiología. Por otro lado en el continente europeo, un cirujano inglés, Joseph Lister utilizó
una solución diluida de ácido fénico como desinfectante de las heridas postoperatorias con la
finalidad de combatir la infección de las mismas por microorganismos, obteniendo tan grande
éxito, que la técnica se aceptó rápidamente, a la vez que sirvió para establecer los principios de
las técnicas asépticas utilizadas en la actualidad.
Los microbiólogos empezaron a aparecer y de alguna manera fueron muy influidos por Koch,
Pasteur y Joseph Lister. Igualmente los Bacteriólogos en Europa y América. Entre los
americanos que directa o indirectamente fueron responsables del desarrollo de la bacteriología
en Estados Unidos son: William, Harold, Clarence, Ernst y H. L. Russell.
Se esbozaran algunos aspectos importantes que corresponden a la segunda época de oro ya que
sería demasiado larga la lista de todos aquellos que contribuyeron al desarrollo de la
microbiología, pero que si se desea dar una referencia completa se puede consultar el libro
THE HISTORY OF THE BACTERIOLOGY, de William Bulloch.
Las relaciones que hiciera Leewenhoek sobre la ubicuidad de los microorganismos, por
ejemplo, permitieron que, 200 años más tarde, Louis Pasteur descubriera la participación de
estos microbios en la reacción de fermentación. A Koch, Smith y a muchos otros, descubrir la
relación de microorganismos con la enfermedad.
En 1905, Robert Koch recibe Premio Nobel por haber contribuido importantemente en la
creación de la microbiología como ciencia.
Se le recuerda por haber aislado las bacterias que causan el carbunco y la tuberculosis.
El trabajo de Theobald Smith sobre la transmisión de la fiebre de Texas, señaló el camino para
los trabajos subsiguientes de Reed sobre la epidemiología de la fiebre amarilla. La persistencia
de Paul Ehrlich, por encontrar un compuesto químico que destruyera a la espiroqueta que
causa la sífilis en el ser humano y sin producir daños a las células de los tejidos, abrió paso a
los logros obtenidos en el futuro, sobre el uso de compuestos químicos en el tratamiento de la
enfermedad; lo cual le permitió compartir con Elie Metchnikoff, Premio Nobel en 1908.
Como se puede ver, la historia no sólo trata del pasado, sino que se hace cada día, a medida
que nuestros conocimientos aumentan con cada nuevo descubrimiento y cada suceso.
La microbiología inició desde que el hombre empezó a pulir piezas de vidrio y a combinarlo
para lograr amplificaciones grandes y poder observar a los microorganismos.
Fritz Lipman y Hans Krebs fueron distinguidos con el Premio Nobel en 1953, por sus estudios
fundamentales sobre células vivas y por los avances sobre fisiología y metabolismo.
En 1958, Premio Nobel de medicina y fisiología Joshua Lederberg, George Beadle y Edward
Tatum quienes descubrieron que los genes regulan los procesos químicos de la célula, que
están organizados y que pueden alterarse por el proceso de recombinación.
Desde este descubrimiento hasta 1968, se hicieron aportaciones por descubrimientos sobre los
ácidos nucleicos, herencia y código genético.
En 1969, el Premio Nobel de medicina fue para otros norteamericanos, Max Delbruck, Alfred
D. Hershey y Salvador E. Luria quienes estudiaron procesos vitales en los bacteriófagos y
ayudaron a establecer la moderna biología molecular.
Otros descubrimientos en 1972 hasta 1975 sobre la estructura de anticuerpos y partículas
virales de cáncer en células tumorales son parte de la misma historia que como puede
apreciarse no tiene fin y permanecerá así, mientras haya hombres y mujeres con talento y
dispuestos a enfrentarse a otros retos.
Los protistas superiores o eucariotes poseen células grandes (con núcleo verdadero),
muy semejante a las de animales y plantas; contienen una membrana nuclear, múltiples
cromosomas en el interior de cada núcleo y un aparato mitótico que garantiza la equipartición
de los elementos que resultan de la replicación cromosómica entre los núcleos hijos. En este
grupo o categoría se incluyen los protozoos, los hongos y la mayoría de las algas.
Los protistas inferiores o procariotes, se caracterizan por poseer células más pequeñas
en las cuales el núcleo está constituido por un único cromosoma que carece de membrana
nuclear, carecen de diversas estructuras rodeados por membranas. En este grupo se incluyen
todas las bacterias y un grupo pequeño de algas azul-verdes (cianobacterias).
Poco después Whittaker (en 1969), propuso un sistema de clasificación en cinco reinos
y que en la actualidad es ampliamente aceptado, porque considera los siguientes aspectos:
Los niveles superiores de la clasificación, como el género, tribu, familia, orden y clase;
carece de una definición clara y práctica.
De esta manera, una vez que las características de un organismo queden perfectamente
descritas, es posible compararlos con otros microorganismos con la finalidad de determinar y
establecer similitudes, así como diferencias.
Estos son solo unos aspectos pero hay más consideraciones que son importantes.
HONGOS Y LEVADURAS
En algunos hongos, las hifas tienen paredes transversales llamadas SEPTAS y a las
hifas se les nombra Hifas Septadas, entre septa y septa transversal existe un espacio el cual es
llamado artículo. Las hifas que no poseen estas paredes transversales se les llama hifas
CENOCITICAS; ahora si tenemos un conjunto de hifas ya sean septadas o no septadas,
entonces tenemos las MICELAS.
Así como hay hongos de provecho también hay hongos que son perjudiciales para el
hombre como lo son: COCCIDIOIDIS INMILIS que causa lesiones en la piel, huesos y
endémicos principalmente en Sonora y Baja California.
Las levaduras pueden ser de forma esférica, alargada, ovoides y son mucho más
grandes que las bacterias. Su reproducción es asexual por el proceso de Gemación.
Los virus solo se pueden reproducir dentro de las células de animales, vegetales y otros
microorganismos, por esta razón se le considera como parásitos obligados intracelulares.
Los virus dependen de las células del hospedador para su reproducción debido a que
carecen en gran parte de maquinaria metabólica propia, son incapaces de generar energía o de
sintetizar proteínas y dependen de las células del hospedador para realizar estas funciones.
Sin embargo los virus pasan información genética al igual que las células del
hospedador para la reproducción y para apoderarse de los sistemas generadores de energía y
de síntesis de proteínas de las células hospedadoras.
El material genético que poseen es DNA o RNA pero no ambos, este material genético
se encuentra encerrado en una cubierta de proteína altamente especializada, que lo protege
cuando el virus se encuentra fuera de la célula hospedadora, a la vez le sirve como vehículo
de entrada cuando penetra en dicha célula.
A los virus estructuralmente completos maduros e infectivos se les conoce como
VIRIONES.
A los virus que infectan a las bacterias se les llama bacteriófagos. Estos fueron
descubiertos independientemente por Frederick W. Twort, en Inglaterra en 1915 y por Félix D'
Elle en 1917.
El segundo paso es la penetración que es un hecho mecánico que permite la entrada del
fago a la célula hospedadora gracias a una enzima llamada lisosima la cual va en la cola del
fago y digiere la pared celular, aunque la penetración se logre una vez que las fibras de la cola
se fijan a la célula y la vaina se contrae induciendo el tubo de la cola en la célula y este inyecta
su DNA y la cubierta de proteína que forma la cabeza y la estructura de la cola del virus
permanece fuera de la célula. En aquellos que no poseen vaina contráctil todavía no está claro
cómo penetra el ácido nucleico en la célula.
CULTIVO DE VIRUS
Los virus se pueden cultivar inoculando ratones o utilizando tejidos. La inoculación en
ratones, cobayos, conejos y primates se han utilizado para el cultivo de los virus ya que son un
buen instrumento de diagnóstico, debido a que pueden mostrar síntomas típicos de la
enfermedad siendo posible examinar cortes histológicos al microscopio.
En cuanto a las vacunas preparadas a partir de cultivos tienen una ventaja sobre las
preparadas en embriones de pollo, ya que se reduce al mínimo la posibilidad de que un
paciente presente hipersensibilidad o alergia a la albúmina de huevo.
Inicio
III. FUNDAMENTOS DE LA MICROBIOLOGÍA
PARED CELULAR: Es una estructura muy rígida que se encuentra entre la membrana
citoplasmática y cápsula o capa mucosa, se encuentra en todas las células vivas, tienen cierta
elasticidad varía de acuerdo con la bacteria y sus condiciones. El espesor de la pared de la
mayoría de las bacterias varía entre 10 y 35 Nm. sin embargo, algunos son considerablemente
gruesas resistentes a los agentes químicos como susceptibles a las tinciones.
MEMBRANA CITOPLASMÁTICA
Se encuentra debajo de la pared celular, llamada también membrana protoplasmática o
membrana plasmática su medida es de 7, 5nm.
- Es extremadamente importante por qué controla el paso de sustancia química en solución
hacia adentro y fuera de la célula, es capaz de tomar y retener cantidades adecuadas de
nutrientes y de descargar el exceso y/o los productos de desecho.
- Proporciona además la maquinaria bioquímica para transportar iones inorgánicos,
azucares, aminoácidos y otros metabolitos a través de esta membrana.
INCLUSIONES CITOPLASMÁTICA:
Dentro del citoplasma pueden acumularse diferentes clases de sustancias químicas y
formar granulos y glóbulos denominados CUERPOS DE INCLUSIÓN. Ejemplo: hay
bacterias que acumulan grandes cantidades de azufre que aparecen como glóbulos dentro del
citoplasma. Otros cuerpos de inclusión están formados por compuestos de: polifosfato, lípidos,
glucógeno o almidón.
Puede ser una fracción de un diámetro de la célula o mucho más grande en grosor que
la misma célula bacteriana.
- La relación exacta entre la cápsula y el resto de la célula no se conoce.
- Se cree que el material que forma la cápsula es segregado a partir de la célula y debido a
su viscosidad no pueden difundirse quedando solo alrededor de la pared celular. Ejemplo:
las bacterias con cápsula que crecen en la leche producirán un espesamiento de esta.
- La cápsula le proporciona a las bacterias una cubierta protectora y sirve de reservario de
alimento almacenado.
- Las cápsulas de ciertas bacterias que producen enfermedad aumentan la capacidad
infectiva de las bacterias. Ejemplo: KLEBSIELLA PNEUMONEAE.
- Si las bacterias pierden su cápsula totalmente pueden perder su virulencia y por tanto su
capacidad para producir enfermedades.
- Las bacterias capsuladas también son responsables en algunos procesos industriales:
a) Pueden tupir los filtros (por exceso de material viscoso o sustancias mucosas en el
equipo de fabricación).
b) Recubrir tuberia.
c) Afectar la calidad del producto (fábricas de papel, mediante la formación de sustancias
mucosas, cápsula en la planta).
La vaina no es una parte vital de la célula, sino que la bacteria con vaina constituye en
grupos importantes de m. o.
IMPORTANCIA
La importancia radica en que es una propiedad de un grupo pequeño de bacilos con
características en común. Todos los bacilos formadores de esporas se pueden encontrar en el
suelo, en el tracto intestinal (humano y animal). Algunos pueden ser patógenos y la mayoría
son saprófitos. Ejemplo:
AEROBIAS. Las que necesitan de presencia de oxígeno atmosférico, para poder desarrollarse.
ANAEROBIAS. Las que no necesitan de oxígeno atmosférico para poder desarrollarse.
ANAEROBIAS FACULTATIVAS. Las que crecen y se desarrollan en presencia o en
ausencia de oxígeno atmosférico.
MICROAEROFILAS. Las que pueden crecer en pequeñas cantidades de oxígeno atmosférico.
ACIDEZ O ALCALINIDAD. La mayoría de las bacterias crecen en condiciones de cultivo
con PH de 6.5 a 7.5.
Es muy probable que el pH cambie como resultado del efecto de compuestos ácidos o
básicos, producidos durante el metabolismo, esto se puede evitar incorporando al medio,
soluciones buffers o tampones como amortiguadores de PH.
Fue inventado por Giovanni Farber en 1625 y aproximadamente 48 años más tarde, el
verdadero impulsor de la microscopia fue el holandés Anton Van Leewenhoek (1632-1723),
quien desarrolló un microscopio funcional en 1673.
Cada tipo de microscopio y cada método utilizado para preparar muestras, ofrecen
ventajas para demostrar algunos aspectos morfológicos de los microorganismos.
Todas aquellas lentes con montura o sin ella, gruesas o pequeñas, biconvexas o
planoconvexas; que amplifiquen los objetos que consideran microscopios simples.
Está formada por una fuente luminosa, espejo, condensador, diafragma, diafragma del
condensador y de lámpara, filtros y colector.
La fuente luminosa puede ser natural o artificial. Artificial cuando la fuente luminosa
es un filamento de tungsteno (w).
Este condensador tiene un disco negro en la parte central de las lentes, las cuales hacen
que los rayos luminosos entren solo por las orillas no oscurecidas, originando así que en vez
de obtenerse un haz de luz completo, solo se obtiene un haz anular. Esta luz no entra
normalmente al objetivo por salir del condensador en ángulo muy oblicuo y el campo
microscópico se ve obscuro. El objeto se ve brillante en el fondo oscuro a diferencia de la
microscopía de campo claro que es la normalmente usada en laboratorios, en donde el
microscopio posee un condensador normal. Este deja pasar la luz o rayos luminosos tanto
centrales como periféricos, produciendo campo brillante o claro.
El resultado es el ver un objeto más claro que lo normal y rodeado de un fondo más
oscuro que lo normal.
Análisis de estructuras que vistas por microscopía ordinaria son poco visible; debido a
que sus índices de refracción son muy parecidos. Estas pequeñas diferencias en el índice de
refracción hacen que la luz del condensador se desvíe un poco.
La luz ultravioleta tiene una longitud de onda más corta (entre 180 a 400 nm) frente a
400 a 700 nm de la luz visible, lo que le dará un aumento en el poder de resolución alrededor
del doble obtenido por microscopía de luz luminosa.
MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA
Algunos colorantes denominados fluorocromos tienen la propiedad de ser excitados
(pasar a un nivel superior de energía) cuando absorben luz UV (luz de λ corta). A medida que
las moléculas excitadas regresan a su estado normal liberan el exceso de energía en forma de
luz visible de mayor λ que la radiación excitante. Esta propiedad se le denomina fluorescencia.
La microscopía fluorescente se basa en la ley física que dice: "una molécula excitada
no puede ceder energía a otras moléculas, sino que las emite como radiación, en este caso
como luz de mayor longitud de onda".
Existen muchos aparatos que se utilizan en este campo, pero todos tienen en común
ciertos componentes como: fuente de luz, filtros selectivos de excitación y filtros secundarios
oculares, todos ellos adaptados al microscopio.
Absorbe a 365mμ
Emite a 542 mμ
Anaranjado de acridina
VENTAJAS
Permite obtener resultados rápidos.
En ciertos casos se puede obtener un diagnóstico de certeza a partir de frotis directo, sin
necesidad de esperar un cultivo.
Es posible identificar un pequeño número de microorganismos de un cultivo mixto.
Es posible identificar microorganismos muertos o que no pueden ser cultivados.
Se pueden utilizar pequeñas cantidades de colorante en la fijación del microorganismo
para tener resultados positivos en comparación con otras técnicas de tinción.
Es un método más sensible.
Los colorantes fluorescentes se combinan químicamente con los anticuerpos. Esto hace
posible identificar células individuales que reaccionan con el anticuerpo. A esta aplicación se
le conoce como técnica de Anticuerpos fluorescentes o Inmunofluorescencia.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
Trabaja no con rayos luminosos sino con rayos electrónicos propagados en el vacío que
concentrados y refractados por campos magnéticos se proyectan sobre la preparación y se
proyectan en un foco donde proyectan una imagen no visible, pero que puede fotografiarse o
revelarse en una pantalla especial. Se logran aumentos de 30 000 a 100 000 diámetros. Puede
resolver partículas a 0.001μm.
Técnica de sobreado
Técnicas electrónicas
Técnica de cortes ultrafinos
Técnica de sombreado
Consiste en depositar un fino baño de metal (p. ej. platino) sobre el objeto, colocándolo
en el trayecto de un haz de iones metálicos en el vacío.
El haz se dirige oblicuamente de manera que el objeto adquiera una "sombra" en forma
de un área no bañada en el otro lado.
Los electrones dispersados por el metal pesado son reunidos y enfocados para formar
la imagen final.
MÉTODOS Y TÉCNICAS PARA EL ESTUDIO DE MICROORGANISMO
Todos los microorganismos en estudio pueden ser examinados, ya sea en estado vivo y
sin teñir o después de haber sido teñidos por colorantes, para que resalten con más claridad.
Para esta finalidad se han ideado métodos de preparación de los especímenes, como lo
son suspensión de los organismos en un líquido y utilización de películas delgadas o frotis
secos, fijados y teñidos. Las técnicas que se conocen son: Técnica de montaje húmedo, técnica
de gota pendiente, técnica de bloque pendiente, y la técnica de preparaciones fijadas y teñidas.
Las técnicas más utilizadas son la técnica de montaje húmedo y técnica de gota
pendiente las cuales hacen posible examinar organismos en condiciones de vida normal
suspensos en un líquido. Y la técnica de preparaciones fijas y teñidas la cuál hace posible
examinar organismos en cuanto a su morfología y ordenamiento característico pero en
condiciones no vivas.
Se utiliza una laminilla especial para gota suspendida (placa excavada), se coloca un
poco de vaselina con un palillo alrededor de la concavidad y de la suspensión bacteriana se
pone una gota en el centro de un cubreobjetos, posteriormente se tapa con una laminilla
excavada de tal forma que la concavidad coincida con el centro del cubreobjetos donde se
encuentra la gota, se invierte suavemente la lámina y se presiona para evitar la evaporación, de
esta manera queda la gota suspendida y lista para observarse con el objetivo seco débil y con
el diafragma cerrado unas dos terceras partes hasta enfocar y encontrar la gota suspendida y
pasar gradualmente al objetivo de mayor aumento.
En general las técnicas de montaje húmedo son preferibles en los siguientes casos:
Los colorantes no solo se emplean para la tinción directa de materiales biológicos sino
además para demostrar las funciones fisiológicas de los microorganismos.
También sirven como indicadores de cambios de pH en los medios de cultivo y como
indicadores Redox para demostrar la presencia o ausencia de condiciones anaerobias.
Casi todos los colorantes biológicamente útiles son derivados del alquitrán y la
estructura fundamental alrededor del cual están constituidas químicamente la mayoría de los
colorantes es el anillo bencénico. Difieren en el número y disposición de estos anillos y a la
sustitución de los átomos de hidrógeno por otras moléculas.
1. Colorantes de trifenilmetano.
2. Colorantes de oxacina.
3. Colorantes de tiacina.
La clasificación de los colorantes es algo compleja, pero generalmente está basada en
los cromóforos presentes, y prácticamente de acuerdo al comportamiento químico del
colorante.
Desde el punto de vista práctico, los colorantes ácidos reaccionan con sustancias
básicas ( como estructuras citoplasmáticas). Los básicos tiñen estructuras de naturaleza ácida
como la cromatina nuclear de las células.
Los neutros son sales formadas por un colorante ácido y un colorante básico, p. ej. el
eosinato azul de metileno. Lo más común son los dos primeros procesos.
Las proteínas y los ácidos nucleicos celulares, pueden participar en la formación de las
sales con iones positivos:
- +
Célula bacteriana (Na)
+ -
El ión coloreado está positivo: MB Cl, colorante cloruro azul de metileno.
- + + -
Célula bacteriana Na + MB Cl (reemplazo).
- + + -
Célula bacteriana MB + Na Cl
Los colorantes son compuestos orgánicos que constan de anillos bencénicos y grupos
cromófonos y auxócromos, para poder fijar el colorante a un objeto es necesario el uso de un
mordente.
MORDENTE. Es toda sustancia química que fija el colorante de tal modo que el
material teñido lo retiene, p. ej. sulfato ferroso, ácido tánico, yodo, etc.
✻ Simples o directas
✻ Diferenciales: Gram, ácido resistente, Giemsa,
Coloraciones coloraciones especiales para descubrir estructuras
✻ Tinción negativa
COLORACIÓN SIMPLE: (COLORACIÓN DIRECTA). Método de tinción de bacrerias o de
otros organismos, por aplicación de una sola solución de un colorante a una película fijada o
frotis.
Los colorantes utilizados pueden ser, azul de metileno, verde de malaquita, etc. A
veces en el interior de las células, aparecen granulos más profundamente teñidos que el resto
de la célula, lo cual indica la presencia de entidades químicas activas en forma de partículas
que tienen mayor afinidad por el colorante que la célula en conjunto.
Este método incluye varias técnicas, dependiendo de lo que se desee conocer o estudiar
sobre los microorganismos.
De las técnicas más utilizadas están la Técnica de tinción Gram, Técnica de tinción
ácido resistente o de Ziehl Neelsen, Técnica de tinción Giemsa.
Técnica de tinción Gram. tinción diferencial más utilizada en bacteriología, debido a que
prácticamente todas las bacterias pueden ser clasificadas como Gram positivas o como Gram
negativas. Estas dos categorías pueden diferenciarse por este método de acuerdo a su
estructura en la composición de la pared celular.
La técnica incluye las siguientes substancias; Cristal violeta como colorante primario,
lugol como mordente, alcohol-acetona como solvente orgánico y safranina como colorante de
contraste. Estas substancias se deben aplicar en el mismo orden ya que cualquier cambio
puede afectar a la reacción.
Las Micobacterias poseen cápsula gruesa y cerosa, resistentes a la tinción; sin embargo
una vez teñidas, esta cápsula resiste a la decoloración cuando es tratada con potentes solventes
orgánicos, por tal razón, los microorganismos que tienen esta propiedad se llaman ácido
resistentes.
Los colorantes y reactivos utilizados en esta técnica son: Carbolfucsina como colorante
primario, alcohol-ácido como decolorante y Azul de metileno como colorante de contraste.
Afín de que el colorante primario penetre a través de la cápsula cerosa de los bacilos
ácido resistentes, se requiere de cierto tratamiento físico. Esto en la técnica convencional de
Ziehl Neelsen en la cual se utiliza calor después de cubrir la muestra con carbolfucsina como
tratamiento físico, para que pueda penetrar el colorante. Esto se logra pasando el mechero
varias veces a través del portaobjetos hasta observar desprendimiento de vapores de la
solución del colorantes, es necesario evitar que se produzca ebullición.
MÉTODO DE GIEMSA
Este método es útil para poner de manifiesto las Ricketsias localizadas dentro de la
célula huésped. Estos organismos adquieren una coloración diferencial y se ven dentro del
citoplasma de dicha célula.
También tiene utilidad, para teñir frotis de sangre en el examen de protozoos, para
visualizar inclusiones virales o de otros organismos en las células infectadas, así como la
presencia de otros parásitos como toxoplasmas en tejido cerebral.
GLUCOSA
La glucosa: la fermentan muchas bacterias distintas de muchas formas diferentes.
A. E. Coli, Salmonella, Enterobacter al fermenta la glucosa dan como productos una mezcla
de compuestos ácido succinico, Acetil CoA, Alcohol, Ac. Acético, Ac. Fórmico, CO2, H2.
B. Streptococcus lactis: fermentan a la glucosa hasta Ac. Láctico casi exclusivamente.
Clostridium, Eubacterium, Bacillus: Ac. Butírico, Butanol, Acetona, Isopropanol, Ac.
Acético, Fórmico, Etanol, H2, CO2, etc.
1. Bacterias fototropicas: o sea, los m. o. que utilizan la luz como fuente de energía.
2. Bacterias Quimiotróficas: que son m. o., que emplean sustancias químicas en calidad de
fuente de energía.
3. Bacterias Autotróficas: que son m. o. que aprovechan el ácido carbónico (CO2) en calidad
de fuente de C. Algunas bacterias tienen la propiedad de asimilar el polietileno, ácido
bórico, Fenol y otras sustancias inorgánicas.
4. Bacterias Heterotrofas: Son bacterias que precisan el carbono orgánico (carbohidratos,
ácidos grasos) para su nutrición.
NUTRICIÓN
En las bacterias existen los dos. Todos los organismos vivos son FOTOTROFOS O
QUIMIOTROFOS.
Todos los organismos requieren de carbono en alguna forma, CO2 aún en pequeñas
cantidades, la mayoría requiere de compuestos orgánicos de carbono.
EN TÉRMINOS NUTRICIONALES
Tipo Fuente de energía Fuente de C. Ejemplo
Fototrofo
Autotrofo Luz solar CO2 Chromatium
Heterotrofo Luz solar Comp. Org. Rhodopseudomonos
Quimiotrofo
Autotrofo Ox. de comp. org. CO2 Thiobacillus
Heterotrofos Ox. de comp. org. Comp. org. Escherichia
Req. De N
Plantas: Obt. de sales de inorgánicas de Nitrógeno, ejemplo: KNO3.
Animales: Obt. de comp. orgánicos de Nitrógeno, ejemplo: prot. y productos de degradación
(peptidos y ciertos ácidos).
Bacterias: Algunas N2 atmosférico.
Algunos compuestos orgánicos de Nitrógeno.
Algunos N2 de compuestos orgánicos nitrogenados.
Req. de S y P
Animales: de compuestos orgánicos de S.
Vegetales: de compuestos inorgánicos de S.
Algunas bacterias: compuestos orgánicos de S.
Algunas bacterias: compuestos inorgánicos de S.
Algunas bacterias: S elemental.
Bacterias: El P a partir de Fosfatos, ejemplo: sales de ácido fosfórico.
Req. de varios elementos metálicos
Todos los Na, K, Ca, Mg, Mn, Fe, Zn, Cu, Co, para su org. crec. y bact. en partes pro millón.
Los métodos más utilizados son: el de Brewer, que consiste en una caja especial a la
cual se le añade tioglicolato de sodio mezclado con agar para extraer el oxígeno presente y
después inocular, se cubre con la tapa de Brewer la cual tiene deprimida casi toda la porción
central, de tal modo que queda una capa de aire muy delgada por encima del agar y que se
extrae por la sustancia que se adiciona al medio.
Otros métodos que no son muy utilizados son: la utilización de recipientes anaerobios
de fósforo, recipientes anaerobios con fósforo de Varney, recipientes bajo presión aumentada
de CO2, etc.
TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE BACTERIAS
Los cultivos puros representan condiciones artificiales para el desarrollo de las
bacterias y otros microorganismos y las condiciones son impuestas mediante su manejo en el
laboratorio. Existe una gran variedad de técnicas por medio de las cuales las diferentes
especies de una muestra natural pueden ser aisladas y desarrollarse como un cultivo puro.
Ahora dependiendo de sus capacidades para sintetizar los componentes, las bacterias se
pueden clasificar como: AUTOTROFICAS, HETEROTROFICAS E HIPOTROFICAS.
Las bacterias HETEROTROFICAS, tienen poca habilidad sintética, por lo que son más
exigentes en su nutrición. Requieren de proteínas ya formadas, de vitaminas, factores de
crecimiento y gases indispensables, que se descompone por enzimas hidrolíticas haciéndolas
asimilables, las cuales ya dentro de las células son ensambladas y utilizadas por la célula.
Ejemplo: Escherichia coli, Lactobacilos, Salmonella typhi, proteus, estafilococos, etc.
SINTÉTICOS: Son medios que generalmente son utilizados para estudiar los
requerimientos nutricionales de los organismos. En estos sus constituyentes químicos están
químicamente definidos en su composición.
A) MEDIOS LÍQUIDOS
No sintéticos. Ejemplo: leche: sustrato de origen natural, cuya composición favorece el
crecimiento bacteriano.
Son caldos o soluciones acuosas de substancias de origen natural tales como peptonas,
levaduras y extractos de carne cuya composición no está bien definida, pero que favorecen el
crecimiento bacteriano. En su composición no contienen substancias como gelatina o agar y
por lo tanto no solidifican o gelifican pero se puede preparar a partir de estos medios sólidos.
C) MEDIOS SÓLIDOS
Están hechos a base de compuestos orgánicos como: rebanadas de papa, trozos de
zanahoria, suero sanguíneo coagulado, útiles para el crecimiento y taxonomía. También puede
contener compuestos inorgánicos: silice, usado como solidificante cuando los agentes
orgánicos como el agar interfieren con el crecimiento específico de la bacteria.
Los medios sólidos constan generalmente de agar, gelatina o albúmina. Son necesarios
para el estudio de las características coloniales; así como para el aislamiento de especies
bacterianas.
El agar se disuelve en el agua cerca del P. E., se solidifica alrededor de los 38 grados
centígrados y no vuelve a licuarce hasta que se hierve de nuevo. (el agar se disuelve alrededor
de una concentración del 2 al 3% y la gelatina del 10 al 15% y solidifica a una temperatura de
25 grados centígrados.
Esto significa que se pueden seleccionar las bacterias que solo se desarrollan en
presencia de compuestos orgánicos poco comunes, agregándolas al medio de cultivo y
omitiendo todos los demás compuestos.
Estos medios fueron ideados para ensayar los microorganismos según sus actividades
metabólicas particulares.
Por lo anterior mencionado, se utilizan una gran variedad de medios de cultivo; que se
toman en cuenta como pruebas que se relacionan con el metabolismo bacteriano.
Algunos ejemplos son: Voges- Proskauer, Rojo de Metilo, Producción de Indol, Prueba
de Ureasa, Citrato, reducción de Nitratos, SIM, Agar Férrico con Azúcar Triple (TSI), Agar
Hierro Kligers (KIA), Malonato, etc.
IV. GENÉTICA BACTERIANA
Introducción:
La teoría sobre la herencia y variabilidad de los organismos vivos fue creada por C.
Darwin en 1859, quien demostró que todas las especies vegetales y animales existentes sobre
la tierra aparecieron mediante variabilidad, esto a partir de formas orgánicas.
LA GENÉTICA es la disciplina que estudia los mecanismos por los cuales los
caracteres pasan de un organismo a otro.
Teoría de la inmunidad: Con el término "inmunidad" ( del latín IMMUNITAS, liberación del
tributo o salvación de alguna cosa). Se sobre entiende la insusceptibilidad del organismo de las
infecciones o agentes no infecciosos que le es genéticamente heterogéneas. El organismo
animal y humano distingue con suma exactitud la "propia" de lo "extraño", propiedad gracias a
la cual se asegura la defensa contra la introducción no solo de m.o. patógenos, sino contra las
sustancias extrañas entre proteínas polisacáridos, lipopolisacáridos y otras. La ciencia que se
ocupa de los problemas de inmunidad y que se a denominado INMUNOLOGÍA, se convirtió
en una rama independiente. Ella se dedica a un amplio campo de fenómenos biológicos:
Mecanismos de defensa contra los agentes de las enfermedades infecciosas y tumores,
establecimientos de vínculos genéricos entre el mundo vegetal y animal, problemas de la
inmunohematología, inmunogenética, inmunohistoquímica, inmunodiagnóstico, etc.
V. RELACIÓN HUÉSPED - PARÁSITO
La mayor parte de los microorganismos que habitan en el cuerpo humano lo hacen porque se
benefician de los nutrientes y del hábitat protegido que este cuerpo humano les provee. Pero
desde el punto de vista del cuerpo humano esta relación puede ser mutualismo, comensalismo
o parasitismo, según sea beneficiosa, neutral o perjudicial, respectivamente.
Independientemente del tipo de relación, todas comienzan con el contacto, algunos
microorganismos se establecen permanentemente colonizándolo (microbiota normal), otros
desaparecen rápidamente (transeuntes) y otros invaden los tejidos. Este contacto con los
microorganismos conduce a la infección, condición en la cual el microorganismo patógeno
elude las defensas del huésped, penetra en los tejidos y se multiplica. Cuando los efectos
acumulativos de la infección dañan los tejidos se produce una enfermedad infecciosa. La
relación huésped - parásito comienza con el contacto, progresa a la infección y finaliza en
enfermedad. Cuando un microorganismo potencialmente infeccioso está presente en el cuerpo
sin invadirlo todavía se le denomina contaminante, por lo que estar contaminado no es lo
mismo que estar infectado ya que no todas las contaminaciones acaban en infección y no todas
las infecciones acaban en enfermedad. De hecho, la contaminación sin infección y la infección
sin enfermedad es la regla.
Piel
La epidermis junto con la dermis forman una barrera frente a muchos microorganismos debido
a que son impermeables a éstos, por lo que a la piel se la denomina la primera línea de
defensa. La constante exposición de la piel al medio ambiente implica que en ésta existan
muchos microorganismos transeuntes. Sin embargo la superficie de la piel es hostil a la
supervivencia y crecimiento de muchas bacterias debido a su sequedad, bajo pH (3-5) y
sustancias inhibitorias (lisozima que destruye el peptidoglucano). A pesar de estos factores
algunas bacterias pueden sobrevivir en la piel, crecer y formar la microbiota normal ya que las
glándulas sudoríparas y sebáceas excretan agua, aminoácidos, urea, sales y ácidos grasos que
sirven como nutrientes a estos microorganismos. La mayor parte de estas bacterias son
especies de Staphylococcus (S. epidermidis) aunque también existen Micrococcus y
Corynebacterium. En la parte más profunda de las glándulas sebáceas existen bacterias
anaeróbicas como Propionibacterium acnes que al ser parte de la microbiota, normalmente no
es perjudicial; sin embargo, ha sido asociado con el acné, una enfermedad de las glándulas
sebáceas de la piel. Debido a su localización profunda, el número de estas propionibacterias se
vé muy poco afectado por el lavado o por las soluciones desinfectantes.
Ojos
La conjuntiva es lavada contínuamente por las lágrimas que además de remover a los
microorganismos contiene lisozima. Consecuentemente, la microbiota de la conjuntiva es
esporádica. Los principales microorganismos encontrados son Staphylococcus epidermidis,
Staphylococcus aureus, Corynebacterium, Streptococcus pneumoniae, Neisseria spp.
Tracto respiratorio
El tracto respiratorio es un sitio difícil para la colonización de los microorganismos ya que en
el tracto respiratorio alto los microorganismos que están en el aire que respiramos pasan a
través de las fosas nasales a la nasofaringe quedando pegados en el moco el cual contiene
lisozima; al pasar este moco a la faringe, las bacterias atrapadas en el moco pueden ser
tragadas y destruídas por el HCl del estómago. A pesar de ésto existen numerosos
microorganismos en las fosas nasales debido a la habilidad de adherirse a las células
epiteliales de las membranas mucosas. Las bacterias más frecuentemente encontradas en las
fosas nasales son Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus; en la nasofaringe
cepas avirulentas de ßtreptococcus pneumoniae. El tracto respiratorio bajo no posee
microbiota debido a que los microorganismos se eliminan mecánicamente por los cilios de la
tráquea. Si alguna bacteria pasa a través de la tráquea es fagocitada por los macrófagos.
Boca
La abundante y constante presencia de alimento disuelto en la boca hacen de ella un ambiente
ideal para el crecimiento bacteriano. Sin embargo, el contínuo flujo de saliva hace que los
microorganismos se tragen y destruyan por el HCl del estómago. Consecuentemente la mayor
parte de los microorganismos que constituyen la microbiota de la boca resisten estos
mecanismos al adherirse firmemente a las distintas superficies de la cavidad oral. Los dientes
son un área de esta adherencia bacteriana, de hecho la placa dental es una agregación de
bacterias y materia orgánica. La caries está iniciada por Streptococcus mutans al hidrolizar la
sacarosa en glucosa y fructosa. La glucosa es polimerizada en glucano y la fructosa
metabolizada a ácido láctico. El glucano actúa como cemento uniendo las bacterias a los
dientes y el ácido láctico actúa como abrasivo. Una vez iniciado el ataque por Streptococcus
mutans, otras bacterias como Lactobacillus y Actinomyces contribuyen como invasores
secundarios en el desarrollo de la caries. La microflora normal de las encías consiste
fundamentalmente en bacterias Gram (+) como Streptococcus sanguis y especies de
Actinomyces.
Tracto gastrointestinal
La mayor concentración de microbiota normal del cuerpo humano se encuentra en el tracto
gastrointestinal.
Estómago: aunque el estómago está recibiendo constantemente bacterias transeuntes de la
cavidad oral, un estómago sano contiene muy pocas bacterias debido al efecto bactericida del
HCl y enzimas digestivos. Los pocos microorganismos que se encuentran son lactobacilos y
levaduras (Candida spp.).
Intestino delgado: en el duodeno sobreviven pocas bacterias debido a la combinación del
ambiente fuertemente acídico del estómago y la acción inhibitoria de la bilis. De los
microorganismos presentes, la mayoría son cocos y bacilos Gram (+). En el yeyuno se
encuentran especies de enterococos, lactobacilos y corinebacterias. También puede
encontrarse la levadura Candida albicans. La última parte del intestino delgado, el íleon, posee
una microbiota más abundante y parecida a la del intestino grueso. En el íleon crecen bacterias
anaerobias como Bacteroides y anaerobios facultativos como Escherichia coli.
Intestino grueso: el colon es la parte del cuerpo humano que contiene la mayor población
microbiana. Se calcula que un adulto excreta alrededor de 30 billones de células bacterianas
diariamente a través de la defecación. Se han aislado alrededor de 300 especies bacterianas
diferentes de las heces humanas. En el intestino grueso existen 300 veces más bacterias
anaerobias (Bacteroides y Fusobacterium) que anaerobios facultativos (Escherichia, Proteus,
Klebsiella y Enterobacter); también se encuentra la levadura Candida albicans. Una
prolongada terapia con ciertos antibióticos pueden eliminar muchos microorganismos de la
microbiota normal intestinal permitiendo el crecimiento de especies resistentes a los
antibióticos lo que puede causar transtornos gastrointestinales como es la diarrea. La
administración oral de la bacteria Gram (+) Lactobacillus acidophilus puede aliviar estos
desórdenes intestinales ya que la ingestión de estos microorganismos reemplaza a los
organismos intestinales indeseables. Existen en el mercado muchos productos comerciales con
fines terapéuticos que contienen lactobacilos.
Tracto genitourinario
En individuos sanos los riñones, uréteres y vejiga están libres de microorganismos por lo que
la orina en la vejiga también lo está. Sin embargo existen bacterias en la parte inferior de la
uretra tanto en hombres como mujeres (Staphylococcus epidermidis, Streptococcus faecalis y
corinebacterias) de tal manera que la orina adquiere estos microorganismos cuando pasa de la
vejiga al exterior del cuerpo humano en la parte inferior de la uretra. El tracto genital
femenino tiene una microbiota compleja. Durante los años que existe actividad en los ovarios
(pubertad --> menopausia) la microbiota principal de la vagina son lactobacilos ácido
tolerantes (bacilos de Doderlein); éstos hidrolizan el glucógeno producido por el epitelio
vaginal en estos años debido a la acción de los estrógenos, formando ácido láctico. Como
resultado, el pH de la vagina se mantiene entre 4,4 y 4,6. Los microorganismos capaces de
crecer a este bajo pH son los que se encuentran en la vagina (enterococos, corinebacterias y
Candida albicans). Este glucógeno no está presente antes de la pubertad ni después de la
menopausia, con lo que las secreciones vaginales son suavemente alcalinas y contienen
microorganismos normales de la piel y colon.
a.- Adhesión
Es el proceso mediante el cual los microorganismos consiguen una posición más estable en el
portal de entrada, lo que les permite no ser fácilmente eliminados y estar listos para invadir los
compartimentos estériles del cuerpo. Los mecanismos que utilizan los patógenos bacterianos
en la adhesión incluyen fimbrias o pilis, flagelos y cápsulas. Los virus se unen a través de
receptores especializados.
Sustancias extrañas:
1. Virus, 2. Toxinas: Sustancia inmunosa elaborada por un organismo. 3. Toxoide: Toxina que
ya ha sido tratada para destruir su propiedad tóxica sin afectar sus propiedades antigénicas, 4.
Bacterias, 5. Vacunas.
- Estas pueden activar el sistema inmune ya que son reconocidas como sustancias extrañas o
antigenos.
INMUNIDAD
La respuesta inmunitaria tiene como resultado:
1. La formación de anticuerpos específicos que circulan por el torrente sanguíneo
(INMUNIDAD HUMORAL).
2. La estimulación del número de células reactivas específicas llamadas linfocitos
(INMUNIDAD CELULAR). (Capacidad incrementada para distinguir otras células) o
células activadas.
Tanto los anticuerpos como los linfocitos especializados reaccionan con el antígeno
utilizado como inmunizante.
1. Proteínas, 2. Polisacáridos.
PROTEÍNAS: Por lo general estimulan la producción de anticuerpos con mayor eficacia que
los polisacáridos, sólo los polisacáridos complejos (grandes) ejemplo: capsulares del
Pneumococo son buenos antígenos.
FUNDAMENTOS: La salud de una nación (hombre) está determinada por la capacidad de sus
habitantes o del hombre mismo, para controlar eficazmente las poblaciones microbianas.
Por lo general el hombre utiliza procedimientos muy específicos cuando por ejemplo:
Depósitos de agua. filtración y cloración se someten: a). Se dice que con solo 0.5 ppm
de cloro libre eliminará los patógenos entéricos del agua.
Esto no significa que la leche fresca no deba tratarse para controlar los
microorganismos de leche contaminada que constituye un vehículo de entrada de muchas
enfermedades como lo son la tuberculosis y la fiebre ondulante causada por Brucella entre las
más importantes y otras producidas por infecciones en las vacas con estreptococos del grupo
A, Salmonellas, praphycoccus aureus, etc., o por infecciones de las personas que trabajan en
las lecherías; como fiebre tifoidea, disentería, hepatitis, etc.
Las células viejas poseen una menor actividad metabólica, a la vez que su pared celular
entre más vieja sea la célula va perdiendo su permeabilidad.
Por lo anterior podemos decir que el control de microorganismos que son indeseables
en medicina, en la industria, en la agricultura, etc. utiliza diversos métodos y/o artificios para
su inhibición o destrucción como los que a continuación se mencionan: AGENTES FÍSICOS,
AGENTES QUÍMICOS, AGENTES ANTIMICROBIANOS y AGENTES
QUIMIOTERAPEUTICOS.
Tanto la esterilización por calor húmedo y por calor seco, pueden ser generados en
diversos aparatos y en ambos casos hay factores que condicionan la efectividad de sus
procesos, como lo son: la cantidad de agua, temperatura, tiempo de contacto, superficie de
esterilización, pH, edad de las bacterias, presencia de esporas, composición del medio de
suspensión, etc.
De las técnicas más utilizadas en el laboratorio para la esterilización son las siguientes:
Horno (gas o eléctrico)
CALOR SECO
Incineración
CALOR SECO
Por lo general se consideran suficientes dos horas de exposición a 160ºC ó 180ºC por
espacio de una hora, por lo tanto, no deberán esterilizarse en el horno objetos de hule natural o
sintético, ni material de plástico. Tampoco conviene esterilizar al horno recipientes con líquido
de cualquier naturaleza, pues se evaporan.
INCINERACIÓN
Es una técnica que se utiliza rutinariamente para esterilizar por ejemplo el asa o para
eliminar animales de laboratorios contaminados.
CALOR HÚMEDO
La esterilización por ebullición tiene sus limitaciones sobre todo porque no es posible
elevar la temperatura por encima de los 100ºC. sin embargo, el vapor de agua cuando es
comprimido dentro de un espacio, adquiere presión logrando temperaturas altas y esta
propiedad es utilizada en el aparato llamado autoclave, que es parecida en su forma y principio
a una olla de presión de cocina.
Este aparato es ordinariamente de gran capacidad y tiene forma de un cilindro
metálico, generalmente de doble pared.
El principio sobre el cual funciona el autoclave es el siguiente: al nivel del mar el agua
hierve a 100ºC, sin embargo en el pico de una montaña puede hervir a 35ºC. Si hacemos el
vacío en un recipiente cerrado el agua puede hervir a 100ºC.
Este método se usa para esterilizar todo tipo de material: vidriería, medios de cultivo,
sondas, guantes, instrumental quirúrgico, telas, batas, soluciones, etc.
PASTEURIZACIÓN
Cuando estas sustancias son usadas debe asegurarse que ataquen la microbio y no a las
células del huésped, lo que se conoce como TOXICIDAD SELECTIVA y es en lo que se basa
la quimioterapia.
Debido a que los agentes antibacterianos deben ser inocuos para todo organismo
huésped, en las condiciones en que son empleados (toxicidad selectiva) el número de agentes
antibacterianos que comúnmente se emplean es mucho más bajo que el número de venenos
celulares e inhibidores.
ALCOHOLES
FENOL
Las esporas bacterianas y los virus son más resistentes a ellos que las células
vegetativas bacterianas.
La mayoría de los metales pesados, solos o en ciertos compuestos son dañinos para los
microorganismos.
Los metales que se consideran más efectivos son el Hg, Ag, y Cu. Las sales de estos
metales a altas concentraciones desnaturalizan las proteínas; estas sales son demasiado
perjudiciales para los tejidos humanos por lo que no son usados en esta forma. Comúnmente
se emplean a bajas concentraciones, en estas condiciones actúan combinándose con los grupos
sulfhidrilo. El Hg combinándolo con compuestos orgánicos (p. ej. Mercurochrome,
merthiolate) puede ser empleado. Excepto cuando se utilizan sobre las superficies limpias de
la piel, se consideran de valor práctico dudoso, ya que son inactivados rápidamente por acción
de la materia orgánica extraña.
La Ag como el Cu, aun en pequeñas cantidades ejercen un efecto letal sobre las
bacterias.
En una placa inoculada se coloca un trozo de metal limpio (Cu o Ag), asépticamente
con unas pinzas estériles, se incuba por 24 horas a temperatura de 37ºC y después de la
incubación se observará una zona de inhibición alrededor del metal (no hay crecimiento).
En el caso del HgCl2, tiene efecto inhibidor en las enzimas que contienen grupos
sulfhidrilo inactivándolos. A esta acción se le conoce como OLIGODINAMICA (capacidadd
que tienen los metales pesados de inactivar las enzimas).
AGENTES OXIDANTES
Los agentes oxidantes fuertes inactivan a las células oxidando grupos sulfhidrilos
libres. Entre los agentes útiles se pueden mencionar el H2O2, I2, hipocloritos, Cl2 y
compuestos que liberan cloro lentamente (cloruro de cal). En el caso del I2 es un agente
altamente efectivo y se cree que sea único en cuanto a la efectividad contra toda clase de
bacterias, esporas, hongos y virus.
AGENTES ALQUILIZANTES
En su efecto puede variar sobre algunas superficies y/o materiales sobre los que se
aplica, esto significa que:
a) Lesión al DNA
b) Desnaturalización de la proteína
c) Rompimiento de la membrana o de la pared celular
d) Remoción de grupos sulfhidrilo libres
e) Antagonismo químico.
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VII. IMPACTO DE LOS MICROORGANISMOS EN LA INGENIERÍA GENÉTICA
BIBLIOGRAFÍA
Michael J. Pelczar (1982), Microbiología. Editorial Mc. Graw Hill, Cuarta Edición, México.