1.

Introdução

A lactato desidrogenase (LDH) é uma enzima citoplasmática presente em todos os sistemas

dos organismos. Participa no processo de transformação da glicose em energia das células de
animais, plantas e até de bactérias (Motta, 2005).

O pH tem uma influência importante sobre a actividade enzimática. A maioria das enzimas
tem um pH característico, em que sua actividade é máxima. O pH óptimo não é
necessariamente aquele encontrado no meio intracelular, indicando que este pode ser um
controle intracelular sobre a actividade enzimática (David e Cox, 2002). Extremos de pH
podem causar a desnaturação das enzimas. A temperatura pode aumentar a velocidade da
reação pelo aumento do número de moléculas com energia suficiente para passar o estado de
transição. No entanto, em reações catalisadas por enzimas um aumento muito grande pode
causar a desnaturação das enzimas, com consequente perda da função (Scheffer e Gonzalez,
2009).
2. Objectivos

2.1 Objectivo geral

 Estudar a Determinação da actividade de LDH em relação ao pH

2.2 Objectivos específicos

 Identificar o pH optimo para o funcionamento da lactatodesihidrogenase.
 Compreender o efeito do pH sobre a actividade da LDH do soro equino

1
3. Material

3.1 Instrumentos
 Pipetas;
 Tubos de ensaios;
 Cronómetro;
 Espectrofotómetro;
 Marcador

3.2 Reagentes
 Lactactodesihidrogenase de soro equino;
 Piruvato 0,2 mM, pH= 7;
 NADH 0,1 mM, Ph= 7;
 NaOH 1 N;
 Tampoes Na2PO4/ KH2PO4 0.1 M,
 Soro equino 50x diluído


2
3
 4. Resultados
Figura 1. A tabela representativa os valores de variação da extinção das misturas, pH e
actividade.

Tubo Extinção (cm2/μ ∆E (controle- pH Actividade ( μmol /min)

mol) ensaio)
1 0,315 -0.108 5.0 0.0436
2 0,423
3 0,325 -0.130 5.5 0.0524
4 0,455
5 0,340 -0.130 6 0.0524
6 0,470
7 0,505 -0.005 6.5 -0.0021
8 0,500
9 0,380 0.120 7.0 0.0484
10 0,500
11 0,420 0.075 7.5 0.0302
12 0,495
13 0,420 0.065 8.0 0.0262
14 0,485

A actividade da lactato desidrogenase (LDH ) varia com a o valor do pH, quando o pH

aumenta a actividade da lactato desidrogenase (LDH) diminui.

4
Gráfico 1. Grafico da actividade da enzima lactato desidrogenase em função do pH

5
 5. Anexos
Dados Formulas /resolução
V= 5 l Ec−Ea
A=V ×
t= 2 min ε×t
ε = 6.2 cm2/ μmol
Tubo 1 e 2 0.315−0.423
A=5×
6.2 ×2
Ea = 0.315
A=0.0423 μmol/min
Ec = 0.423

Tubo 3 e 4 0.325−0.455
A=5×
Ea = 0.325 6.2 ×2
Ec= 0.455 A=0.0524 μmol/min

Tubo 5 e 6 0.340−0.470
A=5×
Ea = 0.340 6.2 ×2
Ec= 0.470 A=0.0524 μmol/min

Tubo 7 e 8 0.505−0.500
A=5×
Ea= 0.505 6.2 ×2
Ec= 0.500 A=0.002 μmol/min
Tubo 9 e 10 0.380−0.500
A=5×
Ea= 0.380 6.2 ×2
Ec= 0.500 A=0.0484 μmol/min

Tubo 11 e 12 0.420−0.495
A=5×
6.2 ×2
Ea= 0.420
Ec= 0.495 A=0.0302 μmol/min

Tubo 13 e 14 0.420−0.485
A=5×
6.2 ×2
Ea= 0.420
Ec= 0.485 A=0.0262 μmol/min