QUESTÕES - TURMA 1

Grupo 4 - CATARINA VERÍSSIMO, LUANA PINHEIRO, MARIA SOARES, RAQUEL

CAEIRO.

Figura 1.Resultados da eletroforese em gel de agarose a 2% dos produtos de amplificação

de mtDNA. Amplificação da zona HV1: 15997-16391. Observa-se que o poço 14 é o
Marcador Molecular de referência, como controlo negativo temos o poço 1 e 8, sendo o
poço 1 referente aos poços de amostra de mtDNA número 2 à 7 e o poço 8 referente às
amostras de mtDNA nos poços 9 à 13.

3. Qual o poço com controlo negativo?

No Gel de HV1 mtDNA os poços 1 e 8 são o controlo negativo

4. Qual as amostras que não enviava para sequenciar?

No gel de HV1 mtDNA os poços 2, 3, 11, 12 e 13.
Bem como os controlos negativos que estão no poço 1 e 8.

5. Qual o tamanho esperado para os produtos de PCR com os primers que estão no
protocolo das aulas?
O tamanho esperado para os produtos de PCR com os primers no protocolo é 394 pb para
a zona do HVI.

A1-F (L15997 – mtDNA HVI): 5’ CACCATTAGCACCCAAAGCT 3’ (forward)

B1-R (H16391 – mtDNA HVI): 5’ GAGGATGGTGGTCAAGGGAC 3’ (reverse)

6. Como deve ser conservado o DNA para enviar para sequenciação?

O DNA deve ser conservado a uma temperatura de -20°C.

Figura 2. Resultado da eletroforese em gel de agarose a 2% dos produtos de amplificação

de mtDNA (HVII). Amplificação da zona HV2: 48-408. O marcador molecular encontra-se no
poço 11 e nos poços 1-3 e 4-10 as amostras de mtDNA.

3. Qual o poço com controlo negativo?

Neste gel não foi usado controlo negativo.

4. Qual as amostras que não enviava para sequenciar?

As amostras que supostamente não deveriam ser enviadas para sequenciar são as
amostras 3 e 10, todavia,, devido ao ponto anterior, não devemos mandar nenhuma
amostra para ser sequenciada, pois como não foi feito um controlo negativo, os resultados
obtidos podem estar contaminados;

5. Qual o tamanho esperado para os produtos de PCR com os primers que estão no
protocolo das aulas?
O tamanho esperado para os produtos de PCR com os primers no protocolo 360 pb para a
zona do HVII.

Primers:
C1-F (L048 – mtDNA HVII): 5’ CTCACGGGAGCTCTCCATGC 3’ (forward)
D1-R (H408 – mtDNA HVII): 5’ CTGTTAAAAGTGCATACCGCCA 3’ (reverse)
6. Como deve ser conservado o DNA para enviar para sequenciação?
O DNA deve ser conservado a uma temperatura de -20°C.

Medições e Cálculos realizados para Amostras com as Bandas Desejadas

Comprimento da Banda(pb) Medição (cm) Log dos pb Comprimento obtido (pb)

mtDNA fig1 2,86 2,655976 450

mtDNA fig2 3,01 2,782341 450

Tabela 1. Medições, em cm, das bandas relativas às sequências de interesse,
nomeadamente, mtDNA e respetivos comprimentos em pb.

Gráfico 1- Curva de calibração realizada com marcador para análise de mtDNA do HVI-
Logaritmo dos pares de base em função da distância em cm.
Gráfico 2- Curva de Calibração referente a análise de mtDNA HVII - Logaritmo dos pares de
base em função da distância em cm.