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quedar centrada.
o con una jeringa ya que la cámara se llena con una gota. El llenado debe ser
• La cámara no puede quedar seca esto se detecta porque en las esquinas del
recuadro
Para realizar el conteo se pasa al ocular de 40X, donde se visualiza cada uno
cámara de conoce como AP (alto poder). Con el lente de 40X cada cuadro se
ve de la siguiente manera:
realizar el conteo siguiendo las flechas para evitar que se cuenten las células
que hay tres líneas que delimitan el cuadro, que son fundamentales en el
momento del conteo ya que definen cuales células son contables o cuales
están fuera del campo de conteo. Las células que no tocan la segunda línea
se puede apreciar la forma correcta de conteo. Las células que tiene una X son
por unidad de volumen. Para esto se utiliza el área de cada cuadro, el espacio
ocupado por el líquido en el que están las células que es el mismo espacio que
Método de Lowry
Para obtener la curva estándar de Albúmina se preparan 5 soluciones patrones de
Albúmina en NaCl al 0.9% (P/V) de las siguientes concentraciones: 15.2, 80, 200,
300 y 400 μg/mL. Si la concentración de Proteína es menor de 500 μg/mL se lee
la absorbancia a 750 nm, si está entre 1000 y 2000 μg/mL se lee a 550 nm. Se
prepara un blanco que no lleva Albúmina y en su reemplazo se adicionan 0.5 mL
de solución salina (NaCl) al 0.9% (P/V). Se aplica el mismo procedimiento que a
las demás muestras.
Procedimiento:
• Servir en tubos de ensayo 0.5 mL de las soluciones patrón de albúmina, las
muestras problema y NaCl al 0.9% como blanco. Deben estar marcados para
conservar el orden de concentraciones para la curva.
• Adicionar a cada tubo 0.5 mL de NaOH 2N y llevar al baño María precalentado
a 100°C por un tiempo de 10 minutos.
• Dejar enfriar hasta que alcance la temperatura ambiente.
• Agregar a cada tubo 5 mL de la solución complejante, mezclar y dejar reposar
por 10 minutos.
• Adicionar 0.5 mL del reactivo de Folin-Ciocalteu 1:1, vortexiar durante 20
segundos.
• Reposar en un cuarto oscuro durante 30 minutos.
Leer la absorbancia a 750 nm y con las soluciones patrón construir la gráfica
Absorbancia vs. Concentración de albúmina sérica de bovina (BSA); con esta se
puede determinar la concentración de las muestras problema interpolando el valor