Impreso el: mié. feb. 02 2022, 12:56:05 p. m.

(EST) Oficial Vigente al 02-feb-2022 DocId: 4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES

Impreso por: ROBIN NILO Fecha Oficial: Oficial desde 01-dic-2016 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2022 USPC

á341ñ AGENTES ANTIMICROBIANOS—CONTENIDO

Un componente esencial de las Inyecciones conservadas en envases multidosis es el agente antimicrobiano o los agentes
antimicrobianos que se incorporan para reducir el riesgo de que, en el momento de retirar parte del contenido, se produzca
una contaminación microbiana accidental del contenido remanente. Es un requisito farmacopeico que la presencia y la
cantidad agregada de tal(es) agente(s) antimicrobianos se declaren en la etiqueta del envase. Este capítulo general provee
métodos para los agentes antimicrobianos de uso más común. Estos métodos u otros métodos validados de forma adecuada
deben emplearse para demostrar que el agente antimicrobiano declarado está presente pero no excede la cantidad declarada
en la etiqueta en más de 20%.
La concentración de un conservante antimicrobiano agregado a una preparación para uso oftálmico, nasal, ótico y parenteral,
en envases multidosis o monodosis, puede disminuir durante la vida útil del producto. Por ende, el fabricante debe determinar
el nivel mínimo en el que el conservante resulta eficaz y debe formular el producto de modo que se garantice que se excede
este nivel de efectividad durante toda la vida útil del producto. En el momento de su fabricación, el producto debe contener
la cantidad declarada del conservante antimicrobiano (dentro de un ±20% considerando las variaciones originadas en la
fabricación y el análisis). La declaración de la cantidad de conservante que se indica en la etiqueta no está destinada a significar
que la cantidad de conservante declarado se mantiene durante la vida útil del producto; por el contrario, es una declaración
de la cantidad que fue agregada, dentro de las limitaciones del proceso, y que no se excedió en más de 20%. Un ejemplo
de tal declaración en la etiqueta es “___(unidad) agregado como conservante.” [NOTA—“ ____(unidad)” es un número
seguido de la unidad de medida, p. ej., 0,015 mg/mL o 0,1%.]
Los agentes antimicrobianos más usados incluyen alcohol bencílico, clorobutanol, fenol; los cuatro ésteres homólogos del ácido
p-hidroxibenzoico (metil, etil, propil y butil parabenos); y los dos derivados mercuriales, nitrato fenilmercúrico y timerosal.
El método usado para el nitrato fenilmercúrico es polarográfico, mientras que para el timerosal y los cuatro ésteres homólogos

l
del ácido p-hidroxibenzoico se usó cromatografía líquida cuantitativa. Se usa cromatografía de gases para la determinación
de fenol, alcohol bencílico y clorobutanol.
MÉTODOS GENERALES POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Y DE GASES

ia
Los procedimientos generales por cromatografía de gases que se establecen a continuación son aplicables a la determinación
cuantitativa de alcohol bencílico, clorobutanol y fenol. Preparar la Solución de estándar interno y la Solución estándar para
cada agente antimicrobiano, según se indica a continuación. A menos que se indique lo contrario en la monografía individual,
preparar la Solución muestra a partir de porciones medidas con exactitud de la muestra en análisis y la Solución de estándar
fic
interno, de manera que la concentración del agente antimicrobiano y la composición del disolvente se correspondan
estrechamente con la concentración y la composición de la Solución estándar. Se proveen en esta sección parámetros
operativos recomendados para el cromatógrafo de gases.
Los procedimientos generales para cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) que se establecen a continuación son
aplicables a la determinación cuantitativa de parabenos y Timerosal. Preparar la Solución de estándar interno y la Solución
estándar para cada agente antimicrobiano, según se indica a continuación. A menos que se indique lo contrario, preparar la
Solución muestra a partir de porciones medidas con exactitud de la muestra en análisis y la Solución de estándar interno, si
O

fuera aplicable, de manera que la concentración del agente antimicrobiano y la composición del disolvente sean
aproximadamente las mismas que la concentración y la composición de la Solución estándar. Se proveen en esta sección
parámetros operativos recomendados para el cromatógrafo de líquidos.
• ALCOHOL BENCÍLICO
Diluyente: Metanol y agua (20:80)
Solución de estándar interno: 3,8 mg/mL de fenol, que se prepara según se indica a continuación. Disolver una cantidad
adecuada de fenol en un volumen de metanol equivalente al 10% del volumen del matraz y diluir con agua a volumen.
Solución estándar: 1,8 mg/mL de ER Alcohol Bencílico USP y 1,5 mg/mL de fenol, que se prepara según se indica a
continuación. Disolver 180 mg de ER Alcohol Bencílico USP en 20 mL de metanol contenidos en un matraz volumétrico
de 100 mL. Agregar 40,0 mL de Solución de estándar interno y diluir con agua a volumen.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía á621ñ, Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Sílice fundida, de 30 m × 0,32 mm; con una película ligada de fase G16 de 0,5 µm
Temperaturas
Inyector: 200°
Detector: 310°
Columna: Ver la Tabla 1.

Tabla 1
Tiempo de Espera
Temperatura Inicial Rampa de Temperatura Temperatura Final (Hold Time) a la Temperatura Final
(°) (°/min) (°) (min)
150 0 150 5

150 10 230 7

Gas transportador: Helio

Velocidad de flujo (constante): 2 mL/min
Volumen de inyección: 1 µL
Relación de partición: 10:1

https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES 1/5
Impreso el: mié. feb. 02 2022, 12:56:05 p. m.(EST) Oficial Vigente al 02-feb-2022 DocId: 4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES
Impreso por: ROBIN NILO Fecha Oficial: Oficial desde 01-dic-2016 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2022 USPC

Tiempo de corrida: 20 min

Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA—Los tiempos de retención relativos para alcohol bencílico y fenol son aproximadamente 1,0 y 1,25,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,0 entre los picos de alcohol bencílico y fenol
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de alcohol bencílico
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para el cociente de respuesta entre los picos de alcohol bencílico y
fenol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alcohol bencílico (C7H8O) en la porción de muestra tomada:

Resultado = (RU/RS) × (CS/CU) × 100

RU = cociente de respuesta entre los picos de alcohol bencílico y fenol de la Solución muestra
RS = cociente de respuesta entre los picos de alcohol bencílico y fenol de la Solución estándar
CS = concentración de ER Alcohol Bencílico USP en la Solución estándar
CU = concentración nominal de alcohol bencílico en la Solución muestra

• CLOROBUTANOL
Diluyente: Metanol y agua (50:50)

l
Solución de estándar interno: 10 mg/mL de 2,2,2-tricloroetanol en Diluyente
Solución madre del estándar: 5 mg/mL de ER Clorobutanol USP en metanol

metanol a un matraz volumétrico de 10 mL. Diluir con agua a volumen.

ia
Solución estándar: 1,25 mg/mL de ER Clorobutanol USP y 2 mg/mL de 2,2,2-tricloroetanol, que se prepara según se indica a
continuación. Transferir 2,5 mL de Solución madre del estándar, 2,0 mL de Solución de estándar interno y 0,5 mL de

Solución madre de la muestra: Diluir cuantitativamente, si fuera necesario, un volumen medido con exactitud
correspondiente a 2,5 mg/mL de clorobutanol en agua.
fic
Solución muestra: Combinar 5,0 mL de Solución madre de la muestra con 2,0 mL de Solución de estándar interno en un
matraz volumétrico de 10 mL y diluir con Diluyente a volumen.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía á621ñ, Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Sílice fundida, de 30 m × 0,32 mm; con una película ligada de fase G16 de 0,25 µm
Temperaturas
O

Inyector: 260°
Detector: 280°
Columna: 135°
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 0,5 µL
Relación de partición: 10:1
Tiempo de corrida: 12 min
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
[NOTA—Los tiempos de retención relativos para clorobutanol y 2,2,2-tricloroetanol son aproximadamente 1,0 y 1,4,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,0 entre clorobutanol y 2,2,2-tricloroetanol
Desviación estándar relativa: No más de 1,0% para el cociente de respuesta entre los picos de clorobutanol y
2,2,2-tricloroetanol
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de clorobutanol (C4H7Cl3O), con respecto a la sustancia anhidra, en la
porción de muestra tomada:

Resultado = (RU/RS) × (CS/CU) × 100

RU = cociente de respuesta entre los picos de clorobutanol y 2,2,2-tricloroetanol de la Solución muestra

RS = cociente de respuesta entre los picos de clorobutanol y 2,2,2-tricloroetanol de la Solución estándar
CS = concentración de ER Clorobutanol USP en la Solución estándar
CU = concentración nominal de clorobutanol en la Solución muestra

• FENOL
Solución de estándar interno: 2 mg/mL de ER Alcohol Bencílico USP en metanol
Solución madre del estándar: 4 mg/mL de ER Fenol USP en agua

https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES 2/5
Impreso el: mié. feb. 02 2022, 12:56:05 p. m.(EST) Oficial Vigente al 02-feb-2022 DocId: 4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES
Impreso por: ROBIN NILO Fecha Oficial: Oficial desde 01-dic-2016 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2022 USPC

Solución estándar: 0,4 mg/mL de ER Fenol USP y de ER Alcohol Bencílico USP, que se prepara según se indica a continuación.
Combinar 5,0 mL de Solución madre del estándar con 10,0 mL de Solución de estándar interno en un matraz volumétrico
de 50 mL y diluir con agua a volumen.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía á621ñ, Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografía de Gases
Detector: Ionización a la llama
Columna: Sílice fundida, de 30 m × 0,32 mm; con una película ligada de fase G16 de 0,5 µm
Temperaturas
Inyector: 200°
Detector: 310°
Columna: Ver la Tabla 2.

Tabla 2
Tiempo de Espera
Temperatura Inicial Rampa de Temperatura Temperatura Final (Hold Time) a la Temperatura Final
(°) (°/min) (°) (min)
150 0 150 5

150 10 230 7

Gas transportador: Helio

Velocidad de flujo (constante): 2 mL/min

l
Volumen de inyección: 1 µL
Relación de partición: 10:1
Tiempo de corrida: 20 min
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
ia
[NOTA—Los tiempos de retención relativos para alcohol bencílico y fenol son aproximadamente 0,85 y 1,0,
respectivamente.]
fic
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,0 entre alcohol bencílico y fenol
Factor de asimetría: No más de 2,0 para el pico de fenol
Desviación estándar relativa: No más de 1,0% para el cociente de respuesta entre los picos de fenol y alcohol bencílico
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fenol (C6H6O) en la porción de muestra tomada:
O

Resultado = (RU/RS) × (CS/CU) × 100

RU = cociente de respuesta entre los picos de fenol y alcohol bencílico de la Solución muestra
RS = cociente de respuesta entre los picos de fenol y alcohol bencílico de la Solución estándar
CS = concentración de ER Fenol USP en la Solución estándar
CU = concentración nominal de fenol en la Solución muestra

• METILPARABENO Y PROPILPARABENO
Solución amortiguadora: 7 g/L de fosfato monobásico de potasio en agua
Fase móvil: Metanol y Solución amortiguadora (65:35)
Solución de estándar interno: 0,013 mg/mL de ER Etilparabeno USP en Fase móvil
Solución de aptitud del sistema: 0,01 mg/mL de ER Butilparabeno USP, de ER Propilparabeno USP, de ER
Etilparabeno USP, de ER Metilparabeno USP y de ácido p-hidroxibenzoico en Fase móvil
Solución madre del estándar: 0,2 mg/mL de ER Metilparabeno USP y 0,03 mg/mL de ER Propilparabeno USP en Fase móvil
Solución estándar: Combinar 5 mL de Solución madre del estándar con 5 mL de Solución de estándar interno y extraer tres
veces con alícuotas de 10 mL de éter etílico. Filtrar las capas etéreas combinadas a través de sulfato de sodio anhidro.
Evaporar el extracto etéreo hasta sequedad y disolver el residuo en 50 mL de Fase móvil.
Solución muestra: Combinar 5 mL de la muestra en análisis con 5 mL de Solución de estándar interno y extraer tres veces
con alícuotas de 10 mL de éter etílico. Filtrar las capas etéreas combinadas a través de sulfato de sodio anhidro. Evaporar
el extracto etéreo hasta sequedad y disolver el residuo en 50 mL de Fase móvil.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía á621ñ, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 272 nm
Columnas
Guarda columna: 4,0 mm × 3 mm; relleno L1
Columna analítica: 4,6 mm × 15 cm; relleno L1 de 5 µm
Velocidad de flujo: 1,3 mL/min
Volumen de inyección: 10 µL
Tiempo de corrida: 10 min

https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES 3/5
Impreso el: mié. feb. 02 2022, 12:56:05 p. m.(EST) Oficial Vigente al 02-feb-2022 DocId: 4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES
Impreso por: ROBIN NILO Fecha Oficial: Oficial desde 01-dic-2016 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2022 USPC

Aptitud del sistema

Muestras: Solución de aptitud del sistema y Solución estándar
[NOTA—Los tiempos de retención relativos para ácido p-hidroxibenzoico, metilparabeno, etilparabeno y propilparabeno
son aproximadamente 0,58; 1,0; 1,4 y 2,1, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolución: No menos de 2,0 entre ácido p-hidroxibenzoico y metilparabeno, no menos de 2,0 entre metilparabeno y
etilparabeno; Solución de aptitud del sistema
Factor de asimetría: No más de 2,0 para los picos de metilparabeno y propilparabeno, Solución estándar
Desviación estándar relativa: No más de 2,0% para el cociente de respuesta entre los picos de metilparabeno y
etilparabeno, no más de 2,0% para el cociente de respuesta entre los picos de propilparabeno y etilparabeno; Solución
de aptitud del sistema
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de metilparabeno (C8H8O3) en la porción de muestra tomada:

Resultado = (RU/RS) × (CS/CU) × 100

RU = cociente de respuesta entre los picos de metilparabeno y etilparabeno de la Solución muestra

RS = cociente de respuesta entre los picos de metilparabeno y etilparabeno de la Solución estándar
CS = concentración de ER Metilparabeno USP en la Solución estándar
CU = concentración nominal de metilparabeno en la Solución muestra

Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de propilparabeno (C10H12O3) en la porción de muestra tomada:

l
Resultado = (RU/RS) × (CS/CU) × 100

RU
RS
CS
CU
ia
= cociente de respuesta entre los picos de propilparabeno y etilparabeno de la Solución muestra
= cociente de respuesta entre los picos de propilparabeno y etilparabeno de la Solución estándar
= concentración de ER Propilparabeno USP en la Solución estándar
= concentración nominal de propilparabeno en la Solución muestra
fic
El etilparabeno y el butilparabeno pueden determinarse de modo similar, usando soluciones de estándar interno
apropiadas. Sin embargo, debido a que la recuperación de la extracción depende de la matriz, el usuario debe verificar
la aptitud del procedimiento para su medicamento y para diferentes formulaciones de productos.
• TIMEROSAL
Solución A: Ácido trifluoroacético y agua (0,5:1000)
Fase móvil: Metanol y Solución A (60:40)
O

Solución estándar: 25 µg/mL de ER Timerosal USP en agua

Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografía á621ñ, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 222 nm
Columna: 2,1 mm × 10 cm; relleno L1 de 2 µm
Temperatura del muestreador automático: 4°
Velocidad de flujo: 0,35 mL/min
Volumen de inyección: 2,5 µL
Aptitud del sistema
Muestra: Solución estándar
Factor de asimetría: No más de 1,5
Desviación estándar relativa: No más de 1,0%
Análisis
Muestras: Solución estándar y Solución muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de timerosal (C9H9HgNaO2S) en la porción de muestra tomada:

Resultado = (rU/rS) × (CS/CU) × 100

rU = respuesta del pico de timerosal de la Solución muestra

rS = respuesta del pico de timerosal de la Solución estándar
CS = concentración de ER Timerosal USP en la Solución estándar
CU = concentración nominal de timerosal en la Solución muestra

MÉTODO POLAROGRÁFICO
• NITRATO FENILMERCÚRICO
Solución madre del estándar: 0,1 mg/mL de nitrato fenilmercúrico en solución de hidróxido de sodio (1 en 250). Entibiar,
si fuera necesario, para disolver.
Solución estándar: Pipetear y transferir 10 mL de Solución madre del estándar a un matraz volumétrico de 25 mL y proceder
según se indica en la Solución muestra, comenzando desde donde dice “agregar 2 mL de solución de nitrato de potasio
(1 en 100).”

https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES 4/5
Impreso el: mié. feb. 02 2022, 12:56:05 p. m.(EST) Oficial Vigente al 02-feb-2022 DocId: 4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES
Impreso por: ROBIN NILO Fecha Oficial: Oficial desde 01-dic-2016 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2022 USPC

Solución muestra: Pipetear y transferir 10 mL de la muestra en análisis a un matraz volumétrico de 25 mL, agregar 2 mL
de solución de nitrato de potasio (1 en 100) y 10 mL de solución amortiguadora alcalina de borato de pH 9,2 (ver Soluciones
Amortiguadoras en la sección Reactivos, Indicadores y Soluciones) y, si fuera necesario, ajustar a un pH de 9,2 agregando
ácido nítrico 2 N. Agregar 1,5 mL de solución de gelatina (1 en 1000) recientemente preparada, luego agregar la solución
amortiguadora alcalina de borato de pH 9,2 a volumen.
Análisis: Pipetear y transferir una porción de la Solución muestra a la celda polarográfica y desgasificar burbujeando
nitrógeno a través de la solución durante 15 minutos. Insertar el electrodo de goteo de mercurio de un polarógrafo
adecuado (ver Polarografía á801ñ) y registrar el polarograma desde −0,6 hasta −1,5 voltios en comparación con el electrodo
de calomel saturado.
Calcular la cantidad, en µg/mL, de nitrato fenilmercúrico (C6H5HgNO3) en la porción de muestra tomada:

Resultado = 2,5C[(id)U/(id)S]

C = concentración de nitrato fenilmercúrico en la Solución estándar (µg/mL)

(id)U = corriente de difusión de la Solución muestra, como la diferencia entre la corriente residual y la corriente limitante
(id)S = corriente de difusión de la Solución estándar, como la diferencia entre la corriente residual y la corriente limitante

REQUISITOS ADICIONALES
• ESTÁNDARES DE REFERENCIA USP á11ñ
ER Alcohol Bencílico USP
ER Butilparabeno USP
ER Clorobutanol USP
ER Etilparabeno USP

l
ER Metilparabeno USP
ER Fenol USP
ER Propilparabeno USP
ER Timerosal USP

ia
fic
O

https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-C97C9F1B-ABC1-461C-A4FE-77E9A54680E5_1_es-ES 5/5