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CTC-LA-MT1-009 2/13
DETERMINAÇÃO DE SULFITO POR
Versão: Data:
ESPECTROFOTOMETRIA EM AÇÚCAR
01 03/01/05
1 Escopo e Aplicação
2 Resumo do Método
A amostra é dissolvida em água e adicionado solução de fucsina e aldeído fórmico que formam um
complexo com o sulfito presente, desenvolvendo uma coloração que é medida através de
espectrofotometria a 560 nm.
3 Documentos Normativos
ICUMSA - Methods Book – Supplement 2000. Method GS2/1/7 – 33 (2000). The Determination of
Sulfite by the Rosaniline Colorimetric Method in White Sugar, in VVHP Raw Sugar and Cane Sugar
Juices and Syrups. Published by ICUMSA. Publications Operations Service, Science c/o British Sugar
plc, Peterborough, England, 2000.
4 Documentos Complementares
5 Segurança
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DETERMINAÇÃO DE SULFITO POR
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6 Equipamentos e materiais
7 Reagentes e Soluções
7.1 Água deionizada (Tipo III)
− Pesar 1,0 g ± 0,1 g de fucsina, transferir para béquer de 250 mL e acrescentar 100 mL de água
deionizada;
− Aquecer até 50 oC ± 5 oC e resfriar com agitação;
− Deixar a solução em repouso por 48 horas e filtrar;
− Armazenar esta solução em frasco âmbar;
− Validade: três meses.
Nota 1: A Fucsina Básica (cloridrato de rosanilina) deve ser pró-análise (p.a.), não serve a utilizada só
para microscopia por apresentar baixa pureza.
− Pipetar 4 mL da solução saturada de fucsina e transferir para balão volumétrico de 100 mL;
− Adicionar 6 mL de ácido clorídrico conc.;
− Completar o volume com água deionizada;
− A descoloração ocorre em curto espaço de tempo, mas a solução somente poderá ser utilizada após
1 hora;
− Validade: consumir no mesmo dia do preparo.
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− Pesar 4,0 g ± 0,1 g de hidróxido de sódio p.a. e transferir para balão volumétrico de 1000 mL com
água deionizada;
− Dissolver e completar o volume;
− Armazenar esta solução em frasco de polietileno;
− Validade: três meses.
− Transferir 8,5 mL de ácido clorídrico concentrado p.a. para balão volumétrico de 100 mL;
− Completar o volume com água deionizada;
− Armazenar esta solução em frasco âmbar;
− Validade: três meses.
− Pesar 20,0 g ± 0,1 g de iodeto de potássio e transferir para balão volumétrico de 1000 mL com 40
mL de água deionizada;
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− Pesar 1,260 g ± 0,005 g de sulfito de sódio anidro e transferir para balão volumétrico de 500 mL,
com auxilio da água deionizada;
− Acrescentar 50,0 g ± 0,1 g de sacarose p.a.;
− Dissolver e completar o volume com água deionizada;
− Homogeneizar;
− Pipetar 25 mL da solução de iodo 0,05 mol/L e transferir para erlenmeyer de 250 mL;
− Acrescentar 10 mL da solução de ácido clorídrico 1 mol/L e 100 mL de água deionizada;
− Titular o excesso de iodo com a solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/L até a coloração palha;
− Acrescentar 3 mL da solução indicadora de amido 1 %, sob agitação, continuar a titulação até
desaparecer a cor azul, anotar o volume gasto (v1);
− Pipetar 25 mL da solução de iodo 0,05 mol/L e transferir para erlenmeyer de 250 mL;
− Acrescentar 10 mL da solução de ácido clorídrico 1 mol/L e 100 mL de água deionizada;
− Pipetar 25 mL da solução de sulfito de sódio e adicionar ao erlenmeyer sob agitação;
− Titular o excesso de iodo com a solução de tiossulfato de sódio 0,1 mol/L até a coloração palha;
− Acrescentar 3 mL da solução indicadora de amido 1 %, sob agitação, continuar a titulação até
desaparecer a cor azul, anotar o volume gasto (v2);
− Validade: consumir no mesmo dia do preparo.
− Pipetar 2 mL da solução referência de sulfito de sódio (item 7.11) para balão volumétrico de 200
mL e completar o volume com água deionizada;
− Validade: consumir no mesmo dia do preparo.
− A concentração desta solução será:
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8 Curva de Calibração
8.1 Técnica
− Homogeneizar;
− Transferir 10 mL de cada solução para tubos de ensaio numerados de 1 a 8;
− Adicionar 2 mL da solução de fucsina descorada e 2 mL da solução de formaldeído 0,2 % em
cada tubo;
− Homogeneizar e deixar os tubos em repouso por 30 minutos ± 5 minutos;
− Proceder a medida da absorbância das soluções a 560 nm, em célula de 10 mm utilizando como
branco água deionizada;
− Anotar as leituras no registro CTC-LA-RQ-095;
− Construir a curva de calibração a partir das leituras absorbância x concentração de sulfito em µg
SO2/mL.
8.1.1 Periodicidade
A curva é considerada aceita se a porcentagem residual não apresentar resultados maiores que ± 10 %,
exceto para o ponto referente a 0 µg SO2/mL.
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8.2 Exemplo
Sejam os valores obtidos na padronização da solução de referência de sulfito de sódio 0,0002 mol/L:
v1 = 25,0 mL
v2 = 15,5 mL
C (µg SO2/mL) = (t1 - t2) x 3,203 x 0,4
C (µg SO2/mL)= (25,0 - 15,5) x 3,203 x 0,4
C (µg SO2/mL) = 12,1714
Logo, tem-se:
a = 29,2397
b = - 1,6221
r = 0,9993
Nota 1: r indica a correlação existente entre os dados e é aceitável um fator de no mínimo 0,9950.
9 Procedimento
9.1 Aplicável ao açúcar cristal, açúcar refinado amorfo e açúcar refinado granulado.
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- Pesar 20,0 g ± 0,1 g de amostra e transferir para balão volumétrico de 100 mL;
- Dissolver com água deionizada;
- Adicionar 4 mL da solução de hidróxido de sódio 0,1 mol/L;
- Completar o volume com água deionizada e homogeneizar;
- Transferir 10 mL da solução para tubo de ensaio;
- Adicionar 2 mL da solução de fucsina descorada e 2 mL da solução de formaldeído 0,2 %;
- Homogeneizar e deixar o tubo em repouso por 30 minutos ± 5 minutos em temperatura ambiente;
- Proceder a medida da absorbância da solução a 560 nm em célula de 10 mm e utilizar água
deionizada como branco;
- Anotar a leitura no registro CTC-LA-RQ-025.
- Pesar 40,0 g ± 0,1 g de amostra e transferir para balão volumétrico de 100 mL;
- Dissolver com água deionizada;
- Adicionar 4 mL da solução de hidróxido de sódio 0,1 mol/L;
- Completar o volume com água deionizada e homogeneizar;
- Transferir 10 mL da solução para dois tubos de ensaio;
- Identificar um tubo como amostra e outro como prova em branco;
- No tubo identificado como amostra adicionar 2 mL da solução de fucsina descorada e 2 mL da
solução de formaldeído 0,2 %;
- No tubo identificado como prova em branco adicionar 2 mL da solução de formaldeído 0,2 % e 2
mL de água deionizada;
- Homogeneizar cada tubo e deixar em repouso por 30 minutos ± 5 minutos em temperatura
ambiente;
- Proceder a medida da absorbância da solução a 560 nm em célula de 10 mm, utilizando a solução
do tubo identificado como prova em branco para zerar o equipamento;
- Anotar a leitura no registro CTC-LA-RQ-025.
Nota 2: Para cada amostra deve ser preparada uma prova em branco utilizando a própria amostra.
Nota 3: Quando a leitura em absorbância ultrapassar o último valor obtido na curva de calibração,
refazer a análise utilizando a metade da massa de amostra utilizada inicialmente, seja utilizando o
procedimento do item 9.1 ou do item 9.2.
10 Cálculos
A concentração de Sulfito é obtida a partir da equação de regressão linear e pela fórmula abaixo:
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(L x a + b) x 10
SO 2 (mg/kg) =
m
Onde:
11 Exemplo
11.1 Exemplo para açúcar cristal, açúcar refinado amorfo e açúcar refinado granulado
Logo:
(L x a + b) x 10
SO 2 (mg/kg) =
m
SO 2 (mg/kg) = 6
Logo:
(L x a + b) x 10
SO 2 (mg/kg) =
m
SO 2 (mg/kg) = 0,03
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12 Resultados
Expressar os resultados em mg/kg de SO2 e com número inteiro. Resultados abaixo do limite de
detecção expressar como < 1 mg/kg.
13 Confiabilidade Metrológica
A incerteza expandida de medição (Ue) é ± 1 mg/kg (NC = 95,45 % e K = 2,07) para a faixa de
trabalho de 1 mg/kg a 18 mg/kg.
14 Referência Bibliográfica
Copersucar - Trabalhos em laboratório - Instruções de Segurança. Cadernos Copersucar, série
Segurança Agroindustrial nº 0019 - Centro de Tecnologia Copersucar, 2ª edição, março 1985, 11p;
Copersucar - Normas de Procedimento para trabalhos em laboratório - Divisão de Segurança
Agroindustrial e Laboratório Central de Análise do Centro de Tecnologia Copersucar - DEAC-SP,
maio 1985, 36p;
Copersucar - Instruções Gerais de Segurança. Normas da Diretoria da Copersucar, 2ª edição, 1982,
54p.
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Curva de Calibração
Consultar
Numerar 08 balões Pesar 10,0 g ± 0,1 g
procedimento de
volumétricos de sacarose, diluir
Oper./ Calib dos
(100 mL) com água deionizada
equipamentos
Adicionar
0 mL; 1 mL; 3 mL;
5 mL; 7 mL; 10 mL; 12 mL e 15 mL
de solução de sulfito 0,0002 mol/L
Transferir 10 mL Adicionar 4 mL da
Completar o volume
de cada solução solução de
com água deionizada
p/ tubos de ensaio hidróxido de sódio 0,1 mol/L
e homogeneizar
numerados em cada balão
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Consultar
Transferir para balão
procedimento de Pesar 20,0 g ± 0,1 g
volumétrico (100 mL),
Oper./ Calib dos de amostra
diluir com água deionizada
equipamentos
Adicionar 4 mL da
Completar o volume
Homogeneizar solução de
com água deionizada
Hidróxido de sódio 0,1 mol/L
Medir absorbância
a 560 nm, em célula Homogeneizar e
de 10 mm, utilizar deixar em repouso
água deionizada como por 30 minutos ± 5 minutos
branco
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Consultar
Transferir para balão
procedimento de Pesar 40,0 g ± 0,1 g
volumétrico (100 mL),
oper./ Calib dos de amostra
diluir com água deionizada
equipamentos
Adicionar 2 mL da
Adicionar 2 mL de água
solução de
deionizada
formaldeído 0,2%