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Revisão: 13/04/2007

Arquivo: Solucoes_tampoes

Soluções e tampões

TE (10X) – 100mM Tris / 10mM EDTA


500µl Tris-HCl 2M
200µl EDTA 0,5M
9,3mL H2O milli-Q
Esterelizar por autoclavação.
Ajustar o pH final da solução para 7,2 – 7,4 utilizando fita

TE (1 X) – 10mM Tris / 1mM EDTA


50µl Tris-HCl 2M
20µl EDTA 0,5M
9.93mL H2O milli-Q
Ajustar o pH final da solução para 7,2 – 7,4 utilizando fita

Tris 2M
9,69g Tris
40mL H2O milli-Q q.s.p.
Filtrar

EDTA 1M (cálculo para EDTA hidratado)


14,89g EDTA
40mL H2O milli-Q q.s.p.
Filtrar

P1 – mesmo que TE 1X

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P2 – 0,2mM NaOH / 1% SDS


5mL SDS 20%
2mL NaOH 10N
93mL H2O milli-Q

P3 – Acetato de sódio 3M pH 4,9


24,6g para 100mL de H2O milli-Q
Filtrar em nitrocelulose

TBE 10X
108g Tris base (Trizma)
55g Ácido bórico
7,44g de EDTA
Completar para 1000mL de H2O milli-Q
Filtrar em nitrocelulose
SDS 20%
20g SDS (mesmo que Lauryl sulfate) em 100mL de H2O milli-Q
Aquecer para dissolver e depois filtrar em nitrocelulose

NaOH 10N
40g de NaOH em 100mL de H2O milli-Q
Filtrar em nitrocelulose
HCl 10N
HCl concentrado = 12N
Diluir 100mL de HCl concentrado em 20mL de H2O milli-Q

Tampão de amostra 6X
0,25% (0,025g) de azul de bromofenol

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0,25% (0,025g) de xilenocianol


15% de ficoll ou 30% de glicerol (para gel de agarose)
Aquecimento e agitação forte para dissolução.
Para 10mL:
0,025g de azul de bromofenol
0,025g de xilenocianol
1,5g de ficoll ou 3,5g glicerol 87% ou 3g de glicerol 100%
Completar o volume com água morna

Separar alíquotas de 1mL em tubos eppendorf , estocar a –20oC


Fonte: Sambrook & Maniats, 1989. Volume 1, 6.3, p.6-12

Tampão de amostra 2X glicerol


Tampão concentrado 6X..............................1,0ml (Tampão 6X em glicerol)
Glicerol...........................................................3,0ml
Água Milli-Q....................................................6,0ml
TOTAL ...........................................................10,0ml

Preparar em um tubo falcon de 15ml, pipetar primeiro a água para facilitar a


homegeneização. Homogeneizar bem.

EPB Glicosado
Reagente Adicionar Conc.
HEPES 1M - pH 7,5 10,5 mL 21mM
NaCl 1M 68,5 mL 137mM
KCl 1M 2,5 mL 5mM
Na2HPO4 0,5M 0,7 mL 0,7mM
Glicose 1M 16,9 mL 33,8mM

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Água milli-Q Completar para 500mL

Esterilizar por filtração em 0,22µm e estocar em geladeira.

TAE 50X
500mL de H2O milli-Q
121g Tris Base
28,5mL Ácido acético glacial
50mL de EDTA 0,5M pH 8,0
Filtrar em nitrocelulose, estocar à temp. ambiente
CaCl2 1M
54g CaCl2.6H2O em 200mL de H2O milli-Q
Esterilizar por filtração em 0,22µm, aliquotar em tubos com 1mL a –20oC

Citrato de sódio 3,8%


Dissolver 3,8g de citrato de sódio em 100mL.
Distribuir em tubos contendo cerca de 1mL.
Autoclavar e estocar a 4oC.

Solução de White
NaCl 4,0g
KCl 0,4g
Na2HPO4 8,0g
Glicose 2,0g
Triptose 1,25g
Completar para 1000 mL com água destilada
Estocar ao abrigo da luz

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PBS 10X
NaCl 80,0g
KCl 2,0g
Na2HPO4 14,4g (Se dihidratado, usar 18g) – dissolver aos poucos!
KH2PO4 2,4g
800 mL de água miliQ

Completar o volume para 1000 mL e esterilizar por autoclavação. Estocar em


geladeira.

PBS 1X
Diluir a partir do PBS 10X
100ml de PBS 10X + 800ml de água miliQ
Ajustar o pH para 7.4
Completar o volume para 1000ml
Esterelizar por autoclavação

KCl 3M (para phmetro)


PM= 74,56
11,2g KCl em 50ml água miliQ

Tampão fostato misto (p/ Giemsa)


0.44g Na2HPO4 + 0.56g de KH2PO4 em 1 litro água destilada

Ou fazer stock: 2g de Na2HPO4 + 2,5g de KH2PO4 (4:5)


Solução de uso: dissolver 1g da mistura em 1 litro de H20 dest.

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Ampicilina
Preparar solução a 25mg/mL em água milli-Q e esterilizar por filtração em
mebrana de 0,22µm. Para 1g de ampicilina dissolver em 40ml de água.
Estocar a –20oC ao abrigo da luz descongelando somente no momento
do uso.

LB (meio Luria-Bertani)

5g de tryptone
2,5g de yeast extract (extrato de levedura)
5g de NaCl
Dissolver completamente em 450mL de H2O mili-Q. Ajustar o pH para 7,0
com NaOH 5N (~0,1mL). Acertar o volume para 500mL. Esterelizar por
autoclavação durante 20 minutos.

LB – Agar

Adicionar 7,5g de ágar em 500mL de meio LB.


Autoclavar durante 20 minutos.
Após esfriar, adicionar 2mL de Ampicilina (stock a 25mg/mL) (ou o
antibiótico a ser utilizado), agitar sem fazer espuma ou bolhas e distribuir em
placas de Petri estéreris (±10mL/placa).
Estocar em geladeira ao abrigo da luz e na posição invertida.

2xYT
8g de Peptone (Peptona).
5g de yeast extract (extrato de levedura).
2,5g de NaCl.

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Dissolver completamente em 450mL de H2O mili-Q. Ajustar o pH para 7,0


com NaOH 5N (~0,1mL). Acertar o volume para 500 mL. Esterelizar por
autoclavação durante 20 minutos.

XGal
Adicionar 50 µL de Xgal (estoque a 20mg/mL em dimetilformamida – não
precisa filtrar) por placa, espalhando/plaqueando com alça (como um inóculo!).
Se esta solução secar muito rápido durante o “plaqueamento” volume poderá ser
diluído em 50 µL do meio LB líquido, ou do meio que você estiver utilizando.

IPTG
Adicionar 5 a 15 µL de IPTG (200mg/ml– 2g em 10mL de água milliQ e
filtrar em 0,22uM) por placa, espalhando/plaqueando com alça (como um
inóculo!). Se esta solução secar muito rápido durante o “plaqueamento” volume
poderá ser diluído em 50 µL de meio LB líquido, ou do meio que você estiver
utilizando.
* Alternativamente, adicionar 500ul de X-GAL (20mg/ml) e 50ul de IPTG
(200mg/ml) em 500ml de meio no momento de adição do antibiótico.

MIF
Glicerina 5mL
Formol concentrado 25mL
Mertiolato (ou mercurocromo)a 0,1% 200mL
Água destilada 200mL
Solução de lugol 43mL
Total 473mL

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SAF
Acetato de sódio 1,5g 15g
Ácido Acético 2,0mL 20mL
Formaldeído 4,0mL 40mL
Água destilada 92,5mL 925mL
Total 100mL 1000mL

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