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Tema 7. Indstria da biotecnologia 1. Introduo 2. Processos de converso 2.1. Introduo 2.2. Modos de operao 2.3. Tipos de reatores 2.4. Esterilizao 3. Tecnologia de fermentao biomassa celular (fundamentos da produo de leveduras) 3.1. Processo 3.2. Equipamentos de cultivo 3.3. Processamento 4. Tecnologia de fermentao produtos metablicos (biomassa como fonte de energia renovvel) 4.1. Etanol 4.2. Biogs 5. Aplicao ambiental tratamento de guas residuais 5.1. Introduo 5.2. Processos 5.3. Processos de tratamento biolgicos 6. Tecnologia de enzimas transformao por bio-catlise 6.1. Aspectos gerais 6.2. Produo de L-aminocidos 6.3. Produo de edulcorantes artificiais 1. Introduo A biotecnologia uma disciplina nova e velha. Existem relatos da produo de cervejas e vinhos desde o ano 6000 a.C., mas o estado da arte tem mudado muito nas ltimas dcadas. Dentro da biotecnologia esto disciplinas como: microbiologia, bioqumica, biologia celular e gentica. Na engenharia qumica a bioengenharia inclui cintica, fenmenos de transporte, projeto de reatores e operaes unitrias. A biotecnologia fez possvel a produo de novas drogas e o desenvolvimento da terapia gentica para doenas que se presumiam incurveis. Na produo de qumicos a biotecnologia ainda no joga um papel importante, exceto na soluo de problemas ambientais, sendo o tratamento de gua o exemplo mais importante. interessante observar que o setor da biotecnologia industrial est mais voltado para a gentica, principalmente na modificao gentica por DNA recombinante e nas tcnicas de fuso celular. Na biotecnologia as reas desenvolvidas foram produo de cervejas e a purificao de gua. A indstria biotecnolgica poderia estar baseada em materiais renovveis e reciclveis e poderia se adaptar s necessidades da sociedade onde a energia est se tornando cara e escassa. A biotecnologia pode jogar um rol importante na reduo do efeito estufa e em termos gerais, na realidade de uma sociedade sustentvel. Mas, apesar da biotecnologia ser considerada uma tecnologia limpa, uma crtica est em vigor, os resduos produzidos durante a produo e a destruio dos biocatalisadores causam problemas ambientais considerveis. Os produtos dos processos biotecnolgicos so: - biomassa celular, como clulas nicas de protena - produtos metablicos das clulas - anaerbicos: lcool, cidos orgnicos, hidrognio, dixido de carbono - aerbicos: citrato, glutamato, lactato, antibiticos, hidrocarbonetos, polissacardeos

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- produtos de reaes catalisadas por enzimas, todos os tipos de reaes qumicas podem ser catalisadas por enzimas. Em geral, e a biotecnologia no uma exceo, o custo da produo decresce com o incremento da taxa de produo. Na Figura 1 se apresenta o desenvolvimento do custo de produo da penicilina com o tempo. Na Tabela 1 se apresenta uma viso geral de alguns produtos e seus preos.
100000

Custo de produo ($/kg)

10000

1000

100

10 1950 1960 1970 1980 1990

Ano

Figura 1. Desenvolvimento histrico do custo de produo da penicilina. Tabela 1. Viso geral dos produtos biotecnolgicos, seus custos e capacidades de produo. Preo aproximado Produo mundial ($/kg) aproximada (kg/a) Neupogena 1 8 x 108 10 Eritropoitina 1 8 x 108 10 1 8 HGH 7 x 10 10 TPA 1 4 x 107 10 7 2 3 x 10 10 -interferon Estreptoquinasa 2 2 x 106 10 5 Insulina 2 x 10 9 x 103 Lovastaina 8 x 102 3 x 105 2 Eritromicinas 1 x 10 3 x 106 Cefalosporinas (ferm) 9 x 101 3 x 106 1 L-valina 4 x 10 3 x 106 L-fenilanilina 1 x 101 9 x 106 1 Penicilina G (Nat.) 2 x 10 4 x 107 L-lisina 4 x 100 5 x 108 0 cido ctrico 1 x 10 6 x 108 cido L-glutmico 1 x 100 9,5 x 108 -1 Benzeno 2 x 10 1 x 109 Etanol (ferm) 1 x 100 1,5 x 1010 3 -1 Propeno 3 x 10 1 x 1010 Eteno 3 4 x 10-1 3 x 1010 -1 Petrleo 2 x 10 4 x 1012 1 Dados em 1992, 2 custo de produo estimado para 1995, o preo do mercado pode ser at 100 vezes maior, 3 produtos petroqumicos. Profa. Caridad Noda Prez Pgina 155 Produto

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2. Processos de converso 2.1. Introduo Para crescer ou produzir produtos metablicos os microorganismos necessitam de uma fonte de carbono (substrato), energia, nitrognio, minerais, traos de elementos e vitaminas. O substrato pode ser polissacardeo, hidrocarboneto, lcool ou materiais complexos como o melao, a celulose e intermedirios farmacuticos. As fontes de nitrognio so amnia, uria e aminocidos. Os minerais so sais orgnicos como fosfatos, sulfatos e cloretos. Os elementos em traos mais importantes so K, Na, Mg, Ca, Fe, Co e Zn. Adicionalmente, os organismos aerbicos necessitam de oxignio para crescer. As bio-transformaes podem acontecer por uma clula completa (clulas de plantas ou animais) ou por partes das clulas, em particular enzimas isoladas, as enzimas so biocatalisadores. Apesar das caractersticas serem ditadas pelo microorganismo em si, elas podem ser modificadas como o caso da tcnica de DNA recombinante.

2.2. Modos de operao Os bioreatores so operados em sistemas em batelada ou em semi-batelada com respeito ao substrato, mas sistemas contnuos tambm so usados. Em uma operao em batelada o reator carregado com o meio de cultivo e inoculado com o microorganismo. Durante a fermentao os componentes do meio (fontes de C, nutrientes e vitaminas) so consumidos, entanto que a biomassa cresce e/ou o produto formado. A principal desvantagem dos sistemas em batelada so os tempos no produtivos usados nas operaes de carga, esterilizao, descarga e limpeza do reator. Neste caso um reator contnuo poderia ser desejado. Durante a operao contnua, o meio de cultivo alimentado continuamente ao reator, onde convertido, e a biomassa e os produtos so continuamente removidos. Apesar de a operao contnua oferecer vrias vantagens sobre a operao em batelada, esta no usada freqentemente na fermentao. Muitas vezes os volumes de produo so muito pequenos para justificar a construo de uma planta continua ou somente cadeias estveis de organismos podem ser usadas devido ao alto risco de mutao e contaminao. Alguns produtos biotecnolgicos so produzidos em instalaes continuas como os xaropes de frutose de milho, protenas de clula nica, cervejas e iogurte, todos com volume de produo relativamente alto. Alguns processos contnuos foram parados por razes econmicas ou por uma combinao de razoes (cerveja). No caso da cerveja no possvel efetuar continuamente o processo de descarga por varias razes. A operao semi-contnua uma combinao da operao em batelada com a contnua. Nesta operao, aps comear a fermentao, o substrato e outros componentes so alimentados continuamente ou em varias etapas. Esta operao possibilita um melhor controle do processo. Por exemplo, na produo de levedura de po, o acar deve ser adicionado gradualmente para prevenir a formao de lcool, o que poderia acontecer com uma concentrao elevada de acar. O sistema descontnuo alimentado mais recente. Em sistemas descontnuos alimentados se aplica a retirada peridica de 10-60% do volume. Outra estratgia mais sofisticada do sistema descontnuo alimentado o sistema de reteno de clulas; as clulas so retidas no reator entanto que o lquido que contm o produto ou os componentes que so txicos s clulas removido continuamente. Isto se realiza reciclando parte do contedo do reator atravs de uma membrana que separa as clulas do lquido.

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2.3. Tipos de reatores Na indstria qumica so usados vrios tipos de reatores e suas variaes. Os sistemas para as reaes de fermentao quase sempre so em mltiplas fases, compreendendo uma fase gasosa que contm O2 e/ou N2, uma ou mais fases lquidas e uma fase slida que inclui os microorganismos. Uma distino pode ser feita baseada na forma de contato dos microorganismos com o substrato e o ar (reatores aerbicos), entre os reatores quando os microorganismos so mveis ou esto fixos. Nos processos aerbicos, os fatores mais importantes do projeto de reatores so a rea de contato entre os microorganismos e o lquido ao seu redor e a taxa de difuso do oxignio. Em tecnologia de processos qumicos a primeira classe se conhece como reatores agitados ou em certos casos como reatores de leito fluidizado ou de leito borbulhante. Em biotecnologia se usa o termo de reatores agitados. A segunda classe que inclui os reatores de leito fixos que em biotecnologia so chamados de reatores superficiais. Nos reatores superficiais ou a cultura se adere superfcie do slido que est sendo continuamente fornecido com ar e substrato, ou a cultura flutua como miclio (um tipo de rede de fios) no substrato. Os reatores superficiais foram usados primeiro do que os submergidos. A pesar de eles serem muito convenientes na pratica, atualmente os reatores superficiais no so muito usados. Contudo, o incremento do uso de clulas e enzimas imobilizadas tem revivido o interesse pelos reatores superficiais, principalmente no tratamento de guas residuais. Desde o ponto de vista de engenharia, os reatores para os processos biotecnolgicos e qumicos so similares. Contudo, as propriedades especficas do meio e a tradio industrial muito diferente justificam a separao da discusso dos bioreatores. 2.3.1. Reatores agitados Na Figura 2 se apresentam as trs classes mais representativas dos reatores agitados (em batelada). A maior diferena entre eles est na forma como so misturados. Para os processos aerbicos importante uma boa mistura para garantir uma boa transferncia de oxignio da fase gasosa para a lquida e evitar a ocorrncia de regies anaerbicas. A energia nestes reatores fornecida por: - agitao mecnica: um reator tipo tanque agitado mecanicamente; - conveco forada do lquido: reator de jacto de ar, - operao usando ar pressurizado: reatores de coluna de bolhas e de ar ascendente

Figura 2. Reatores agitados

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Reator tipo tanque agitado. A agitao mecnica a mais usada na fermentao industrial, a pesar de no ser a melhor soluo. O reator um tanque cilndrico agitado com relao altura/dimetro de 1 a 3 para evitar espaos vazios para a formao de vrtices. O reator preenchido at 2/3 do volume para evitar a formao de espuma, que um dos problemas mais importantes na maioria dos processos de fermentao. Um quebrador de espuma pode ser incorporado na sada dos gases residuais, adio de ar e de agentes anti-espumantes tambm pode ser usada. A mistura se consegue por um impulsor mecnico equipado com um ou mais agitadores. Uma camisa interna ou externa proporciona a rea necessria para o esfriamento ou aquecimento do contedo do reator. Em alguns casos este tipo de reatores no favorvel. No escalado os principais problemas so com a transferncia de calor e massa e particularmente a transferncia de oxignio. Existem casos no quais a potncia requerida do impulsor to grande que um simples agitador mecnico no seria prtico ou ainda impossvel. Estes problemas se tornam mais severos com fluidos muito viscosos ou no newtonianos. Alm disso, a biomassa poderia sofrer um corte muito alto. Reator de jacto de ar Neste reator o gs disperso por uma corrente lquida descendente, o jacto se cria em uma agulha ou ranhura localizada perto da superfcie do lquido. Na parte mais estreita da agulha a velocidade do lquido aumenta entre 8 e 12 m/s. O jacto entra no seio do gs, afetando a superfcie, quebrando-a e penetrando no volume do lquido. O jacto existe enquanto est rodeado de gs. A desagregao do manto conduz formao de pequenas bolhas, as quais se movem em vrias direes no lquido. Estes reatores so usados principalmente para melhorar a transferncia de massa e calor. Um trocador de calor pode ser facilmente incorporado num lao externo, o que permite o controle independente da transferncia de massa e de calor. Outras vantagens quando comparado com o reator agitado so que requerem uma potncia menor para transferir a mesma quantidade de oxignio, so mais fceis de escalar e podem ser usados em reatores maiores. Apesar disto, o uso mais importante de estes reatores ainda no tratamento de guas residuais, mas tambm so usados em grande escala na produo de leveduras e de protenas de clula nica. Reatores de coluna de bolhas e de ar ascendente O princpio de ambos os reatores que a mistura acontece somente pela disperso do ar pressurizado dentro do reator. O reator de coluna de bolhas o tipo mais simples e se caracteriza por uma alta relao altura/dimetro. A disperso do ar no fundo do reator resulta na maioria dos casos em uma boa mistura. O reator de ar ascendente similar ao de coluna de bolhas, mas tem um dispositivo adicional para controlar o fluxo de lquido total. A circulao do lquido devida diferena de densidade da mistura gs-lquido na seco areada e na regio do fundo do reator. O ar distribudo no fundo do reator e no seu movimento ascendente arrasta o lquido. No topo da coluna a maioria das bolhas separada, resultando em uma densidade aparente maior da mistura que desce. As vantagens deste tipo de reator sobre os agitados so sua simplicidade mecnica, facilidade de escalado e melhor mistura, possibilitando seu uso em reatores maiores. Por outro lado, os custos de energia e investimento so maiores. Os reatores de coluna de bolhas so usados na produo de cervejas e vinagre. Os reatores de ar ascendentes so usados na produo de protenas de clula nica pela Hoechst e a ICI. Profa. Caridad Noda Prez Pgina 158

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Reatores de ar ascendente com separao interna e recirculao de biomassa (reatores de biofilmes suspensos de ar ascendente) tambm so aplicados no tratamento aerbico de guas residuais. 2.3.2. Reatores superficiais A Figura 3 mostra os trs tipos de reatores superficiais, conhecidos tambm como reatores de biofilme. - reator de bandejas - reator de leito gotejador - reator de leito fluidizado (trifsico)

Figura 3. Reatores superficiais Reator de bandejas Este um reator superficial clssico. O substrato flui desde o topo at o fundo passado de uma a outra bandeja. A aplicao de este tipo de reator est limitada ao cultivo de clulas e na produo de cido ctrico. Reator de leito gotejante Este reator usado na biotecnologia no tratamento de guas residuais e na produo de vinagre. Nestes reatores os microorganismos esto imobilizados em um filme biolgico. A soluo de nutrientes distribuda uniformemente por meio de um alimentador e desce pelo leito. O ar requerido alimentado freqentemente pelo fundo do reator permitindo a operao em contracorrente. O fluxo de ar provocado pelo aquecimento devido ao calor de fermentao e aumenta devido conveco natural. A desvantagem da operao em contracorrente dos reatores de leito fixo que a velocidade do gs deve ser baixa para que no ocorram inundaes. Reator de leito fluidizado O uso de este tipo de reatores na biotecnologia tem se incrementado recentemente. Estes reatores so usados principalmente com clulas imobilizadas em partculas solidas no Profa. Caridad Noda Prez Pgina 159

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tratamento de guas residuais. Os reatores de leito fluidizado so operados como reatores de uma fase fluida (lquido, anaerbicos) e de duas fases fluidas (lquido e ar, aerbicos). Para aumentar a velocidade de fluxo (no caso de partculas relativamente pesadas) pode ser adicionado um lao de recirculao de lquido. Alm das vantagens do leito fluidizado, tais como melhor transferncia de calor e massa e boa mistura, nas aplicaes biotecnolgicas, o baixo corte por cisalhamento no reator torna este tipo de reator favorvel para clulas sensveis ao corte (clulas animais e de plantas). Outra vantagem que o entupimento do reator no ocorre to facilmente como no reator de leito fixo.

2.3.3. Fornecimento de oxignio nos fermentadores A maioria das fermentaes efetuada em reatores de mistura. O principal problema do fornecimento de oxignio para os processos de fermentao sua baixa solubilidade (7 8 g/m3, mas o curso da reao tambm depende do substrato, da temperatura, da presso parcial de oxignio, etc.). O rpido crescimento dos microorganismos pode consumir oxignio a uma taxa entre 2 e 6 g/m3s. Isto explica porque ainda nos processos em batelada o oxignio tem de ser alimentado continuamente. Na maioria dos processos de fermentao aerbicos, a transferncia de oxignio da fase gasosa para a fase lquida a etapa limitante. A transferncia de oxignio reforada pelo incremento da rea interfacial gs-lquido, a1, e/ou o coeficiente de transferncia de massa, k1, os quais esto combinados no parmetro k1a1, como mostrado na Tabela 2. As principais variveis de operao que controlam este processo so a intensidade da mistura (fora do impulsor) e a velocidade do gs. Os reatores de biofilme so usados para aplicaes que usam microorganismos de crescimento lento ou para correntes de alimentao (substrato) diludas. O exemplo tpico no tratamento de grandes volumes de guas residuais com concentrao de substrato muito baixa. Nestes reatores importante manter o microorganismo no reator para o crescimento suficiente da biomassa e conseqentemente, converso suficiente, enquanto a taxa de transferncia de oxignio menos importante do que nos processos tpicos de fermentao com microorganismos de crescimento rpido (taxa de crescimento especifica > 0,1 h-1) ou com alimentaes concentradas de substrato. Isto tambm ilustrado pelos valores dos parmetros de transferncia de massa e de slido sustentado apresentados na Tabela 2. O parmetro de projeto mais importante para reatores aerbicos de biofilme a rea do biofilme por unidade de volume do reator. Para reatores de capacidade elevada, a transferncia de oxignio pode ser limitante como resultado de uma rea de biofilme insuficiente. Os valores tpicos para o fluxo de oxignio em reatores de biofilme esto entre 0,4 e 0,5 g O2/m2bf.h. Tabela 2. Parmetros importantes em reatores superficiais e de mistura Tipo de reator Tanque agitado Coluna de bolhas Jacto de ar Leito fluidizado (trifsico) Reator de leito gotejante k1a1 (s-1) 0,15-0,2 0,05-0,15 0,2-1,2 0,05-0,3 0,01-0,8 k1a1 (s-1) 0,1-0,5 0,25 0,1-1 0,1-0,5 0,06 Slido sustentado rea especifica do biofilme (m3s/m3r) (m2bf/m3r) 0,01-0,01 0,01-0,01 0,01-0,01 0,1-0,5 2000 0,55-0,6 200

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2.4. Esterilizao A presena de microorganismos contaminantes em bioprocessos pode trazer conseqncias desfavorveis, tais como a perda de produtividade (o mdio tem de suportar o crescimento de ambos, os organismos da produo e os contaminantes), contaminao do produto (protenas de clula nica e levedura de po), degradao do produto (na fermentao de antibiticos), etc. A esterilizao do meio para biotecnologia deve atingir o mximo de morte dos microorganismos contaminantes com o mnimo de temperatura. O mtodo de esterilizao mais conveniente por aquecimento at a temperatura mxima para matar os organismos vivos, mantendo a temperatura alta o tempo suficiente para atingir a esterilidade e depois esfriar at a temperatura da cultura. Para materiais sensveis temperatura, por exemplo, alguns mdios nutrientes, so usados mtodos alternativos como: filtrao, radiao ou tratamento com agentes qumicos esterilizantes (xido de eteno). Duas alternativas do processo de esterilizao com aquecimento esto sendo usadas: a esterilizao combinada e a esterilizao separada. A esterilizao combinada envolve a carga do reator com uma parte ou todo o meio de crescimento e sua subseqente esterilizao. Na esterilizao separada, o meio esterilizado carregado assepticamente no reator j esterilizado. Para os processos em batelada ambos os processos de esterilizao podem ser usados, entanto que os processos contnuos requerem a esterilizao separada. A vantagem da esterilizao separada que o meio pode ser esterilizado em uma unidade especificamente projetada que fornece o meio estril para vrias fermentaes. A desvantagem o risco de contaminao durante a transferncia para a unidade de fermentao j esterilizada. No caso da esterilizao combinada em um reator em batelada, o aquecimento pode ser efetuado pela passagem de vapor atravs de uma camisa de aquecimento ou por distribuio direta do vapor dentro do meio lquido. Este ltimo o mtodo mais rpido, mas em muitos meios de cultivo produz espuma em excesso. A esterilizao continua do meio efetuada atravs da passagem do vapor por trocadores de calor ou por um Venturi. A esterilizao dos recipientes vazios se efetua com vapor mido diretamente, que muito mais rpida que com vapor seco saturado ou supersaturado na temperatura dada. A taxa na qual os organismos so mortos aumenta rapidamente com a temperatura. Para um sistema de esterilizao continua com injeo de vapor, o tempo de esterilizao varia de 2,44 minutos a 407 K para 2,7 segundos a 423 K. Por suposto, o tempo de esterilizao tambm depende do tipo de microorganismos. Para a esterilizao do ar para os processos aerbicos principalmente se usa a filtrao, atravs de dois tipos de filtros, os filtros absolutos, com poros menores aos tamanhos das partculas que precisam ser removidas, e os filtros fibrosos, com poros maiores que o tamanho das partculas a serem removidas. O primeiro tipo de filtros, os filtros de cermica ou de membranas plsticas apresentam uma eficincia de 100%, por isso so chamados de filtros absolutos. Os outros filtros so feitos de materiais fibrosos como o algodo, ao, madeira, etc., mas a remoo dos microorganismos no completa. A vantagem dos materiais fibrosos sua robustez, baixo custo e menor queda de presso quando comparados aos filtros absolutos. 3. Tecnologia de fermentao biomassa celular (fundamentos da produo de leveduras) O exemplo tpico industrial da tecnologia de fermentao para a produo de biomassa a produo de levedura de po, que usada na produo de po. Esta levedura proporciona o crescimento da massa de po e a areao do mesmo durante sua produo. A levedura de po produzida pelo crescimento de microorganismos em um substrato constitudo principalmente por aucares (glicose, melaos) sob condies aerbicas com excesso de Profa. Caridad Noda Prez Pgina 161

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oxignio. Sob condies anaerbicas e com escassez de oxignio poderia ser produzido etanol que no a reao desejada. 3.1. Esboo do processo A levedura de po produzida no modo de batelada alimentada, que tem como vantagens a de ser mais eficiente, melhor controle dinmico do processo global e melhor qualidade da levedura de po quando comparado com o modo em batelada. Como a reao de fermentao exotrmica e o processo opera entre 298 e 303 K, embora a temperatura da gua de esfriamento esteja entre 283 e 288 K, o esfriamento limitado, sendo este o problema mais comum nos bioprocessos. As plantas de levedura operam entre 5 e 7 dias por semana. Em todos os ciclos de produo so usados uma srie de reatores com tamanho crescente (pequeno, mdio e grande volume) como mostrado na Figura 4. Antes da produo os reatores so lavados e esterilizados com vapor para manter-lhos livre de germens. Melaos de beterraba e de cana so usados como fornecedores de acar. Os melaos so resduos da produo das indstrias de acar e a fonte mais barata de acar fermentescvel. Mesmo assim, os melaos diferem na composio de acar, protenas, sais e vitaminas. Por esta razo se faz necessrio o fornecimento de nutrientes adicionais (sais e vitaminas). Os melaos so diludos para facilitar o bombeamento e a fermentao. No tratamento com cido (at pH 4) ocorre a precipitao de algum material orgnico. A seguir os melaos so centrifugados e esterilizados (choque trmico) a 410 K com injeo de vapor por 2 segundos. A soluo esterilizada armazenada em tanques estreis. A amnia adicionada para fornecer o nitrognio necessrio para o crescimento da levedura e para ajustar o pH do fermentador. A taxa de crescimento especifica da biomassa pode variar entre 0,5 e 0,6 h-1. No inicio o pH da soluo do substrato est perto de 4 para assegurar o crescimento timo da biomassa e evitar a contaminao como resultado da remoo incompleta das protenas do substrato. No final do ciclo de produo o pH aumentado para 5 para prevenir a colorao forte da levedura.

Figura 4. Etapas do processo de produo de levedura de po.

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3.2. Equipamentos de cultivo Para comear impossvel usar um reator grande, devido ao grande tempo de residncia para este tipo de operao, as chances de contaminao da soluo do substrato so grandes. O processo consiste em um numero de etapas de crescimento, a primeira a escala de laboratrio (a inoculao). As etapas seguintes (duas so mostradas na Figura 4) so ainda em batelada com progressivo aumento do volume do reator, entanto que a etapa final em vrios reatores (mostrado como um nico reator na Figura 4) opera no modo de batelada alimentada ou semi-batelada com respeito ao substrato acar (tempo do ciclo 16 h). O fluxo de ar continuo quando os reatores esto em operao. Nas plantas mais velhas, todos os reatores so agitados mecanicamente. Atualmente reatores maiores como colunas de bolhas so mais usados. O volume de lquido inicial no reator semibatelada 20% e o volume final 70% do volume do reator. 3.3. Processamento No final do ciclo de produo, o produto da fermentao contm aproximadamente 5% em peso de levedura. A biomassa separada do lquido remanescente em vrias etapas de centrifugao. Na transferncia da biomassa de uma a outra centrifuga, a biomassa lavada com gua. Aps o ltimo separador, a chamada creme de levedura esfriada at 277 K e armazenada em tanques. Uma pequena parte de esse creme de levedura aps tratamento cido usada como material de partida para o prximo ciclo de fermentao. O resto da levedura processado por compresso ou por secagem. Levedura comprimida O creme de levedura armazenada submetido filtrao. A levedura desaguada continuamente cortada na superfcie do filtro e misturada com emulsificantes e o teor de umidade ajustado para 70% em peso. A levedura ento extrudida em forma de fios finos, cortada, empacotada e armazenada a baixas temperaturas. Levedura seca ativa A qualidade da levedura de po seca menor do que a da levedura de po comprimida. Mas apresenta uma maior estabilidade e ainda pode ser usada nos pases (sub) tropicais. A produo e o processamento da levedura seca ativa similar ao da levedura comprimida. A levedura extrudida em fios finos (2-3 mm de espessura) diretamente aps a filtrao. Estes fios so cortados com um comprimento de aproximadamente 7 cm e submetidos secagem. Os secadores usados comumente so de leito fluidizado. Este tipo de levedura contm aproximadamente 8% de umidade e pode ser armazenada a temperaturas superiores s da levedura comprimida. 4. Tecnologia de fermentao produtos metablicos (biomassa como fonte de energia renovvel) O esgotamento progressivo das fontes de combustvel fsseis tem levado a considerar outros materiais como fontes de energia. Uma fonte possvel a biomassa, que geralmente convertida em etanol ou metano. O craqueamento trmico da biomassa para obter produtos similares gasolina, a gaseificao da biomassa para produzir gs de sntese e a combusto da biomassa seca para a gerao de energia, tambm so possveis.

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4.1. Etanol Como visto no item anterior, o crescimento celular em acar em condies anaerbicas pode produzir etanol.

C6H12O6 glicose

levedura

2 C2H5OH etanol

2 CO2

Na Figura 5 se apresenta um esquema da produo de etanol usando levedura. A levedura foi cultivada anteriormente em fermentadores areados como visto anteriormente.

Figura 5. Produo de etanol combustvel a partir da biomassa A levedura do ltimo fermentador adicionada mistura de melao de cana e gua (17% em peso de acar) em um fermentador grande e no areado. HCL ou H2SO4 so adicionados para obter um pH de 4,5. O calor removido por um trocador de calor externo para manter a temperatura em 303 K. O tempo de residncia no fermentador de aproximadamente 40 horas e aps este tempo a cerveja contm entre 8 e 12% em volume de etanol. As clulas de levedura so removidas por filtrao em um filtro de tambor rotatrio a vcuo e podem ser recicladas ou usadas na alimentao animal aps tratamento. Para obter alto rendimento industrial e uma via econmica, as cepas de levedura selecionadas devem ter resistncia ao etanol. Na medida em que a quantidade de lcool aumenta se volta nocivo para a levedura. Normalmente os microorganismos morrem quando a concentrao de lcool excede 12-15% em volume. Novos tipos de leveduras tm sido desenvolvidos com maior resistncia ao lcool. A separao de etanol e gua muito dispendiosa de energia. Alm disso, a separao completa de etanol no se obtm por destilao normal. O etanol e a gua formam um azetropo de mnima a 351 K com 95% em peso de etanol. Sendo assim, para obter etanol puro para combustvel se faz necessrio usar a destilao azeotrpica ou mtodos mais avanados de separao como a separao por membranas. A cerveja alimentada primeiramente em um tanque flash para remover o CO2 dissolvido e a seguir destilada em uma serie de quatro colunas. O produto de fundo da primeira coluna de destilao (melao slido no fermentescvel) usado como aditivo na alimentao animal. Os Profa. Caridad Noda Prez Pgina 164

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vapores que saem pelo topo contm uma mistura (50% em volume de etanol) de etanol, gua e outros componentes volteis (acetaldedo) e so alimentados na base da coluna de retificao. Na coluna de retificao produtos leves e o leo de fusel (mistura de alcois maiores) so removidos na forma de lquido em correntes laterais um pouco abaixo do topo da coluna e alimentados unidade de destilao azeotrpica. O vapor superaquecido da coluna de desidratao uma mistura ternria do azetropo etanol, gua e benzeno (agente azeotrpico) entanto que o etanol puro para combustvel produzido pelo fundo da coluna. O azetropo separado por destilao e o benzeno volta coluna de desidratao. Nesta seqncia de separao a integrao de calor e a recuperao da energia jogam um papel importante na reduo dos requerimentos energticos. Atualmente, a destilao azeotrpica no se faz mais com o benzeno e sem com o ciclohexano. O ciclohexano chamado de arrastador. O solvente mais utilizado o benzeno, mas por ser txico e cancergeno est sendo substitudo pelo ciclohexano e outros solventes. Os equipamentos industriais principais neste tipo de soluo so: coluna de desidratao (Coluna A), decantador e coluna de recuperao de arrastador (Coluna P). Como apresentado na Figura 6.

Figura 6 Fluxograma do processo de desidratao de lcool hidratado por destilao azeotrpica Na Coluna A, o arrastador, o ciclohexano, adicionado no topo. Este produto tem a capacidade de formar uma mistura azeotrpica ternria, ciclohexano-gua-lcool, com ponto de ebulio inferior ao do lcool anidro. Por causa desse ponto de ebulio inferior, a mistura azeotrpica vai para o topo da coluna. O lcool anidro retirado do fundo da coluna com aproximadamente 99,7GL. A mistura azeotrpica ciclohexano-gua-lcool retirada do topo condensada e encaminhada a um decantador instalado na parte superior do corpo da Coluna A, onde se formam duas fases: uma superior, rica em ciclohexano, que retorna coluna, e outra inferior, rica em gua, que enviada Coluna P. A Coluna P faz a recuperao do ciclohexano presente na gua. 4.2. Biogs A biomassa pode ser convertida em um gs contendo metano, chamado de biogs. Este obtido da purificao anaerbica das guas residuais, mas tambm pode ser obtido em pequena escala na agricultura baseado na converso dos resduos dos animais. A fermentao dos resduos e ausncia de ar produz biogs contendo aproximadamente 60% de metano. O resduo slido remanescente aps a fermentao um bom fertilizante. O biogs pode ser usado como combustvel e na produo de eletricidade localmente. Profa. Caridad Noda Prez Pgina 165

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Vrios processos baseados na energia renovvel tm sido sugeridos como soluo para o problema do CO2. Para o crescimento da biomassa (plantas, rvores) o CO2 consumido, o uso da biomassa como fonte de combustveis resulta em emisso neta de CO2 zero. Um exemplo o processo HYDROCARB baseado na hidrogenlise simultnea da biomassa e do combustvel fssil de acordo com a equao geral:

CHxOy

(2 + y - x/2)H2

CH4

yH2O

H0298 < 0

O hidrognio produzido pela decomposio cataltica do metano a 1273-1373 K.

CH4

2H2

H0298 = 75 kJ/mol

A outra parte do metano reage com o vapor formado na reao anterior para produzir gs de sntese. O gs de sntese usado na sntese de metanol e aps a separao, o hidrognio remanescente pode ser usado no processo de hidrogenlise, entanto que o carbono pode ser usado como combustvel ou armazenado para outro uso. A Figura 7 apresenta o esquema de blocos do processo HYDROCARB.

Figura 7. Esquema de blocos do processo HYDROCARB. 5. Aplicaes ambientais tratamento de guas residuais 5.1. Introduo O tratamento de guas residuais a maior aplicao da biotecnologia. A gua residual uma combinao de guas carregadas com resduos domsticos e industriais, junto com as guas subterrneas, as superficiais e as de chuva. A decomposio do material orgnico na gua residual pode produzir gases com mau cheiro e levar a reduo do oxignio dissolvido levado morte da vida aqutica. Alm disso, as guas residuais podem conter microorganismos, metais pesados e outras toxinas que podem ser prejudiciais a vida de animais e plantas. A remoo de esses compostos perigosos das guas residuais essencial. Na Tabela 3 esto resumidos os principais contaminantes que preocupam. Est claro que as guas residuais so uma mistura muito complexa. O maior problema do tratamento das guas residuais e a variao de sua composio e de sua taxa de fluxo no tempo. Particularmente a composio das guas residuais industriais pode variar consideravelmente dependendo da natureza do processo qumico. A taxa de fluxo tambm um fator importante.

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Tabela 3. Principais contaminantes das guas residuais Contaminante Comentrio Slidos suspensos Conduzem a depsitos de lama Orgnicos biodegradveis Principalmente protenas, carboidratos e graxas que conduzem reduo da concentrao de oxignio dissolvido Patognicos Podem causar doenas em humanos e animais Nutrientes (N e P) Podem causar eutroficao de lagos e reservatrios levado ao florescimento de algas Poluentes prioritrios Muitos so cancergenos, mutagnicos, teratognicos ou altamente txicos (benzeno e hidrocarbonetos clorados) Orgnicos refratrios Inclui surfactantes, compostos fenlicos e pesticidas que no so removidos pelos tratamentos convencionais de gua residual Metais pesados Podem surgir a partir de processos industriais Inorgnicos dissolvidos Principalmente clcio, sdio e potssio provenientes do uso domstico

5.2. Processo O tratamento de guas residuais acontece em trs etapas gerais; processos de tratamento primrio, secundrio e tercirio, chamados como pr-tratamento, tratamento biolgico e tratamento avanado. Na Figura 8 se apresenta o esquema de tratamento de guas residuais. O objetivo do pr-tratamento remover os slidos suspendidos (areia e algumas gorduras). Este pr-tratamento se faz mediante processos fsicos como sedimentao e flutuao. As guas industriais muitas vezes tm valores de pH longe dos valores requeridos para um timo desempenho do processo biolgico, prxima etapa de tratamento. Sendo assim, se requer a neutralizao como uma etapa do pr-tratamento. Alm de reduzir a carga no tratamento seguinte, o processo de tratamento primrio tambm minimiza as variaes da taxa de fluxo de guas residuais.

Figura 8. Esquema de tratamento de guas residuais. No processo de tratamento secundrio reduzida a concentrao de compostos orgnicos (suspensos e solveis). Os processos de tratamento secundrios so processos biolgicos e podem ser divididos em processos aerbicos e anaerbicos. Os microorganismos responsveis pela degradao dos compostos orgnicos j esto presentes nas guas residuais. O processo de tratamento ternrio tem como objetivo melhorar a qualidade da gua residual. Os processos convencionais de tratamento biolgico produzem um efluente que contem aproximadamente 30 g/m3 de slidos suspensos e 20 g/m3 de DBO (demanda bioqumica de oxignio, quantidade de oxignio requerida para a oxidao bioqumica por unidade de Profa. Caridad Noda Prez Pgina 167

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volume de gua a uma temperatura dada e por um determinado tempo, mede o grau de contaminao da gua por compostos orgnicos, quanto mais matria orgnica tenha a gua mais oxignio consumido pelos microorganismos. DQO a demanda qumica de oxignio que representa a quantidade de oxignio requerida para a oxidao qumica). No processo de tratamento ternrio estes valores so reduzidos a 2 g/m3. Adicionalmente, so reduzidas as concentraes de N e P total, assim como as quantidades de metais pesados e de microorganismos patognicos. Vrios processos so usados, incluindo parcelas de capim (campos de capim levemente inclinados, onde a purificao da gua realizada atravs da ao dos microrganismos do solo, da absoro de nutrientes pelo capim, e pela ao de filtragem do solo), filtrao, adsoro e membranas. Alm do tratamento das guas residuais se requer o processamento e a deposio do lodo resultante. Este lodo se forma em grande quantidade nos tratamentos primrio e secundrio, no muito concentrado (98% de gua) e tem mau cheiro. A estabilizao do lodo acontece por digesto aerbica ou anaerbica (processo de lodo ativado). A reduo do teor de gua alcanada por vrios mtodos, tais como sedimentao, secagem com ar, filtrao e centrifugao. O mais usado a centrifugao. 5.3. Processos de tratamento biolgico O tratamento biolgico das correntes de guas residuais pode ser feito de forma aerbica ou anaerbica. A escolha do processo depende da concentrao dos compostos orgnicos biodegradveis e do volume de guas residuais a ser tratado. O tratamento aerbico aplicado para poluio ligeira (baixa concentrao de orgnicos biodegradveis) e guas residuais frias, entanto que o tratamento anaerbico usado como etapa de pr-tratamento para guas altamente poludas e guas residuais quentes. 5.3.1. Processo de tratamento aerbico No tratamento aerbico das guas residuais acontece a seguinte reao:
Organicos + O2 + N + P Clulas Produto microbiano Novas clulas + CO2 + H2O + solvel

Rigorosamente a metade dos organismos removidos oxidada a CO2 e H2O e a outra metade convertida em biomassa. Alm das fontes de oxignio e carbono, os microorganismos tambm necessitam de nitrognio (como amnia ou nitrato), fsforo (como fosfato), enxofre e traos de outras substncias para seu crescimento. Os esgotos domsticos contm uma oferta equilibrada de nutrientes, mas este no o caso dos efluentes industriais. Freqentemente se usa a adio de guas residuais domesticas ricas em nutrientes. Processo de lodo ativado Este processo foi desenvolvido por Arden e Lockett (1914) e ainda usado. Na Figura 9 se apresenta um esquema do processo. A gua residual introduzida no reator onde as bactrias convertem os compostos orgnicos segundo a reao apresentada anteriormente. A mistura de clulas e gua tratada passa ento para o tanque de sedimentao. Parte do lodo estabilizado e reciclado ao reator entanto que o resto tratado e eliminado. No processo convencional a areao acontece uniformemente no tanque do reator, isto no timo, pois o oxignio requerido na entrada do tanque de areao (onde a concentrao do substrato maior) maior do que na sada, e como conseqncia pode ocorrer uma Profa. Caridad Noda Prez Pgina 168

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deficincia de oxignio na entrada e na sada o oxignio poderia estar em excesso, o que desnecessariamente caro. Alm disso, picos de concentrao na entrada das guas residuais podem introduzir distrbios no processo.

Figura 9. Representao esquemtica do processo de lodo ativado. A soluo para estes problemas a introduo por etapas de ar ou de gua residual, no primeiro caso, a areao cnica, a areao decrescente ao longo do tanque reator por reduo do nmero de aeradores por seo. No segundo caso, a gua residual se introduz ao longo do tanque reator no lugar de em um nico ponto. No processo do lodo ativado os microorganismos esto suspensos na gua residual (reator agitado). Uma alternativa o uso do processo de biofilme fixo (reator superficial). No ltimo caso, a habilidade natural dos organismos para crescerem na superfcie pode ser usada para manter a biomassa no reator e evitar sua separao da gua tratada. Dois exemplos de reatores superficiais foram apresentados anteriormente, o reator de leito gotejante em contracorrente e o reator de leito fluidizado trifsico. O parmetro mais importante a rea do biofilme por unidade de volume do reator. No caso do tratamento de guas residuais, o reator de leito gotejante est cheio com pedras ou com materiais plsticos onde os microorganismos iro crescer como um filme (200 m2bf/m3r). Os microorganismos utilizam o material orgnico solvel nas guas residuais, mas se atinge pouca ou nenhuma degradao do material orgnico suspendido. Assim, o efluente do reator separado em um tanque de sedimentao onde so separados os compostos orgnicos suspensos. No reator de leito fluidizado para o tratamento de guas residuais se usa areia como suporte para o crescimento dos microorganismos, porque a areia e um material barato e pratico (2000 m2bf/m3r). Reatores mais avanados de biofilme com grande rea superficial especfica (at 3000 m2bf/m3r) asseguram que a converso no esteja fortemente limitada pela transferncia de massa do lquido no biofilme. Estes reatores podem processar guas residuais com alta carga e so mais eficientes que os reatores de leito gotejante e que os reatores de leito fluidizado. Remoo de N e P Atualmente os tratamentos biolgicos das guas residuais tm o objetivo no s de remover as substncias orgnicas, mas tambm os compostos de N e P, porque estes causam eutroficao das guas superficiais. A remoo do N est baseada em dois processos diferentes. O processo de nitrificao:

NH4+ +

2 O2

NO3-

H2O

2H+

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E o processo de denitrificao em presena de compostos orgnicos facilmente biodegradveis tais como o metanol ou o cido actico:

6 NO3-

+ 5 CH3OH

3 N2 + 6 OH-

+ 5 CO2

+ 7 H2O

Como a remoo de nitrognio requer da presena de compostos orgnicos, para logo efetuar a remoo dos compostos de carbono e nitrognio das guas residuais mais ou menos simultaneamente. Contudo, para o processo de denitrificao se requer um ambiente livre de oxignio, entanto que a degradao dos compostos orgnicos e a nitrificao requerem da presena de oxignio. Sendo assim, pelo menos se necessita um reator separado para o processo de denitrificao. Vrias configuraes de reatores tm sido usadas para a remoo dos compostos de nitrognio. Para a remoo biolgica dos compostos de fsforo se requer um reator adicional. Contactor rotacional biolgico O equipamento apresentado na Figura 10 um tipo especial de reator superficial composto por uma srie de discos (2-3 m de dimetro) os que esto montados em um rotador horizontal.

Figura 10. Contactor biolgico de discos rotatrios. O biofilme cresce nos discos e est exposto alternativamente atmosfera onde o oxignio absorvido e fase lquida onde utilizada a matria orgnica solvel. Tratamento aerbico de gases e materiais slidos Os poluentes gasosos e os materiais slidos podem ser tratados sucessivamente por mtodos biotecnolgicos. Um exemplo de tratamento de gases a oxidao biolgica de sulfeto de Profa. Caridad Noda Prez Pgina 170

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hidrognio (H2S) nas correntes de sada do gs natural e do processo Claus. As seguintes reaes acontecem em dois reatores separados: Absoro e hidrogenlise do H2S:

H2S + OH-

HS- +

H2O

Formao biolgica de enxofre:

HS- +

1/2 O2

OH-

Estes processos so uma alternativa vivel para usar no processo redox para lquidos em operao em pequena escala. A principal vantagem que ao contrrio do processo redox para lquidos, o enxofre elementar se forma no reator e no no absorvedor. Este processo resolve o problema principal de estes processos, o entupimento severo do absorvedor pelo enxofre absorvido. 5.3.2. Processo de tratamento anaerbico O tratamento anaerbico das guas residuais apresenta vantagens importantes sobre o aerbico, tais como menor formao de lodo, formao de gs com alto contedo energtico (biogs) e menor custo de processamento (no requere areao). Entretanto, o processo anaerbico requer um controle muito mais cuidadoso dos parmetros especficos do processo e o crescimento dos microorganismos bem mais lento. Alm disso, o grau de remoo das substncias biodegradveis menor que o processo aerbico. Por esta razo, o tratamento anaerbico usado como um pr-tratamento em guas residuais com alta concentrao de componentes biodegradveis. A decomposio anaerbica das substncias orgnicas das guas residuais est acompanhada de uma mistura complexa de microorganismos os que convertem o material orgnico em metano e CO2. O Esquema 1 apresenta as etapas envolvidas nesta converso.

Esquema 1. Decomposio anaerbica das substncias orgnicas. 1. Na primeira etapa os compostos de alto peso molecular como os carboidratos, as protenas e os lipdeos so hidrolisados a compostos monomricos como aucares, aminocidos, cidos graxos e alcois. Estes compostos ento fermentam a cidos orgnicos, dixido de carbono e hidrognio. 2. Os cidos orgnicos com trs ou mais tomos de carbono (cido propinico e butlico) so convertidos em cido actico, dixido de carbono e hidrognio pelas bactrias acetognicas. 3. Por ltimo, a etapa metanognica produz metano de cido actico, CO2 e H2 segundo: Profa. Caridad Noda Prez Pgina 171

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CH3COOH
CO2 + 4 H2

CH4
CH4

+
+

CO2

H0298 = - 34 kJ/mol
2 H2O H0298 = - 164 kJ/mol

A escolha do reator, mostrado na Figura 11, para o processo de fermentao anaerbica das guas residuais depende das propriedades fsicas e qumicas das substncias presentes, por exemplo, da quantidade de partculas presentes, da reatividade dos compostos orgnicos, etc. Na Tabela 4 se apresenta um resumo das caractersticas e aplicaes dos principais tipos de reatores usados para as diferentes correntes de guas residuais.

Figura 11. Reatores para o tratamento anaerbico das guas residuais. Tabela 4. Reatores anaerbicos para os diferentes tipos de guas residuais. Tipo de gua gua com 0,5-25 kg/m3 de digesto fcil, alto teor de carboidratos e partculas grandes gua com 0,5-25 kg/m3 de digesto fcil, baixo teor de carboidratos e contendo partculas pequenas e protenas gua com 0,5-25 kg/m3 de digesto lenta, contendo carboidratos e partculas pequenas Reator Tanque agitado, WHSV = 5-10 kg (COD)/m3r x dia, converso entre 80 e 95% Reator UASB, WHSV = 510 kg (COD)/m3r x dia, converso 95% Exemplos Estrume, destilarias, indstria qumica, indstria de papel e polpa, plantas alimentcias Indstria alimentcia, indstria do amido e de cervejas

Leito fixo, WHSV = 5-10 Indstria de fermentao, kg (COD)/m3r x dia, indstria de laticnios converso entre 90 e 98%

No reator de tanque agitado a mistura acontece por agitao mecnica, por uma bomba de recirculao de gua ou por injeo de oxignio. O tempo de residncia do lodo aumenta pela presena de um tanque onde as partculas so recicladas (lodo o substrato em suspenso no convertido). Isto necessrio porque o crescimento dos microorganismos que produzem metano lento (tempo de residncia mnimo do lodo de aproximadamente 20 dias).

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O reator de subida do cobertor de lama (UASB, upflow anaerobic sludge blanket reactor) consiste em trs regies, um leito de lama densa, um leito coberto de lama (menos concentrado em lama) e a regio de separao onde as partculas de lodo arrastadas so separadas do lquido e do gs. Para este tipo de reator, o lodo deve ter uma densidade relativamente alta para prevenir a lavagem do reator com o fluxo de gua residual ascendente (apesar da baixa velocidade). As vantagens de este reator so sua construo simples, o alto caudal obtido e a falta de custo de mistura (a mistura ocorre atravs do gs produzido). As desvantagens so a necessidade de um separador gs/lodo eficiente e um bom distribuidor de gua. Alm disso, algumas vezes se requer a recirculao de gs ou de gua tratada. A razo que com uma pequena quantidade de lodo o gs produzido no suficiente para a mistura. O reator de leito fixo est cheio com partculas de material inerte, como cascalho, rochas ou plstico. Os microorganismos se afixam ao material inerte e produzem um biofilme que permanece no reator. O fluxo de gua residual pode ser ascendente ou descendente atravs do reator. Este tipo de reator similar ao reator de leito gotejante aerbico e favorvel para altos caudais de fluxo, especialmente para a decomposio substratos solveis facilmente convertveis. Evidentemente este reator bom para o tratamento da matria orgnica dissolvida, j que as partculas poderiam entupir os canais do leito e diminuir sua eficincia. 6. Tecnologia de enzimas transformao por bio-catlise As enzimas em principio so catalisadores homogneos, apesar de sua melhor descrio ser uma soluo coloidal. As enzimas so cadeias complexas de aminocidos com peso molecular na faixa de 20 000 at 200 000. As enzimas esto presentes em clulas vivas onde atuam como catalisadores. Apesar das enzimas serem formadas somente em clulas vivas, elas tambm podem atuar fora das clulas. O uso das enzimas pode ser de duas maneiras: como biocatalisadores em sistemas de reao e como produtos finais como em aditivos alimentares. Dois exemplos de enzimas imobilizadas sero apresentados neste tema. 6.1. Aspectos gerais As enzimas podem operar como parte das clulas vivas, mas tambm podem ser extradas das clulas vivas mantendo sua atividade cataltica. A imobilizao de enzimas em suportes fixos um desenvolvimento mais recente que se mostra promissor no futuro. A imobilizao foi desenvolvida nos anos 1960s porque a quantidade de enzimas presente na biomassa era muito pequena, resultando em problemas de difuso e estabilidade. Entretanto, a tcnica de DNA recombinante permitiu baratear o processo de produo de enzimas, favorveis para serem usadas de uma nica vez. Isto traz a vantagem das enzimas serem usadas diretamente sem requerer a imobilizao. As enzimas competem com os catalisadores convencionais, principalmente na qumica fina. Na Tabela 5 se apresenta uma comparao de estas tecnologias. Uma vantagem das enzimas sobre os catalisadores convencionais que so estreoespecficas. Em geral, os processos qumicos no possuem a habilidade de discriminar entre os enantimeros L e D de molculas assimtricas e como conseqncia de obtm uma mistura racmica. Os catalisadores qumicos tambm possuem estreo seletividade, como o caso do catalisador homogneo estreo seletivo usado na sntese de L-dopa. A estreo seletividade permite a produo exclusiva de um estreo ismero. Isto importante principalmente na indstria farmacutica, porque geralmente um dos ismeros ticos inativo ou pior, sendo prejudicial. Inexplicavelmente, a separao de dois ismeros ticos muito difcil usando os mtodos de separao comuns, como a destilao e a cristalizao, porque todas as propriedades fsicas so idnticas para ambos os enantimeros. Ademais, mesmo que um estreo ismero no desejado no apresente um efeito adverso, a produtividade do processo Profa. Caridad Noda Prez Pgina 173

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decresce devido a sua formao. Ento, obvio que se prefere produzir exclusivamente o enantimero desejado. Tabela 5. Comparao de tecnologia na produo de qumicos. Parmetro Catalisador Concentrao de catalisador (kg/m3) Reao especfica Condies de reao Esterilidade Rendimento (%) Item de custo mais importante Problemas principais Fermentao clssica Clulas vivas 10-200 Enzimas Enzimas 50-500 Catalisadores qumicos Metais, cidos, bases, etc. 50-1000 Freqentemente Moderadas a extremas No 70-99 Vrios Seletividade, estabilidade

Algumas vezes Freqentemente Moderadas Moderadas Sim Sim 10-95 70-99 Resfriamento de Enzima gua Regulao de Estabilidade microorganismos

De forma anloga a catalise homognea muitas pesquisas tm sido desenvolvidas no tema de imobilizao de enzimas. Suportes polimricos e reatores de membrana so usados. A vantagem da imobilizao das enzimas sobre seus anlogos homogneos est na possibilidade de recuperar as enzimas da mistura de reao e sua re-utilizao, alm de que as enzimas imobilizadas so mais estveis termicamente e podem ser usadas em meios no aquosos tambm. Pode ainda ser reduzida a quantidade de resduo produzido o que conduz a um menor custo do tratamento de efluentes. Finalmente, o produto no fica contaminado com as enzimas, o que muito importante na indstria farmacutica. Claro, existe um custo adicional para o processo de imobilizao das enzimas o que deve ser balanado com as vantagens no custo total da produo. A escolha entre o uso da clula como um todo e a enzima, e entre solvel ou imobilizada dependem de muitos fatores, tais como a natureza da converso, estabilidade e re-uso, melhoras tecnolgicas e o custo. Em principio as enzimas contm muito mais stios ativos por unidade de massa do que a clula completa. Em contrapartida, a atividade por sitio consideravelmente menor. Melhoramentos tcnicos podem resultar diretamente ou indiretamente da imobilizao (incremento da pureza e/ou do rendimento, reduo da produo de resduos). A imobilizao de clulas ou enzimas permite o uso da operao continua em vez de em batelada, simplificando o controle e reduzindo o custo devido possibilidade de incrementar a automatizao do processo. Claro que isto vantajoso para grandes escalas de produo, mas a maioria dos produtos produzida em pequena escala. As enzimas imobilizadas so usadas principalmente na produo de qumicos finos e de frmacos, porque estes processos no so econmicos com os catalisadores convencionais. Uma das aplicaes comerciais das enzimas imobilizadas est na produo de L-aminocidos, cidos orgnicos e xarope de glicose. 6.2. Produo de L-aminocidos A demanda de L-aminocidos para a alimentao e aplicaes mdicas cresce rapidamente. Ambos os processos, qumico e microbiolgico, podem ser usados para sua produo. Contudo, a rota qumica no estreo seletiva e conduz diminuio da produo. Em Japo, desde 1969 a enzima imobilizada aminociclase tem sido usada para a produo de L-

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aminocidos, do qual a metionina o mais importante. A aminociclase catalisa de-acilao estreo especfica de acil-aminocidos.
L
R H C COOH L R H C NH2 COOH

NHCOR

+ H2O
D R H C COOH

aminociclase
D R

+
H C NH2 COOH

2 RCOOH

NHCOR

A Figura 12 apresenta o esquema de fluxo do processo Tanabe Seiyaku que utiliza aminociclase imobilizada para a produo continua de L-aminocidos.

Figura 12. Esquema de produo de L-aminocidos usando aminociclase. A reao de de-acilao efetuada em um reator empacotado com aminociclase adsorvida em um material de troca inica. O L-aminocido desejado pode ser separado do acetil-Daminocido no convertido por cristalizao, devido diferena em solubilidade. O acetil-Daminocido racemizado e a mistura racmica volta ao reator com a enzima junto com a alimentao de acetil-D-aminocido. A racemizao do acetil aminocido pode ser realizada por aquecimento a 373 K com anidrido actico em soluo de cido actico. A aminociclase tambm pode ser usada em soluo, como os catalisadores homogneos. Na Figura 13 se apresenta uma comparao do custo relativo envolvido na produo de aminocidos com aminociclase em fase homognea em um reator em batelada e o processo contnuo com a enzima imobilizada.

Figura 13. Custo de produo relativo de L-aminocidos usando aminociclase em fase homognea (processo em batelada) e imobilizada (processo contnuo). Profa. Caridad Noda Prez Pgina 175

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A principal diferena pode ser atribuda ao custo do catalisador (enzima ou enzima + suporte) e de operao. Este ltimo inclui a mo de obra, o combustvel, etc. O custo da mo de obra reduzido gradualmente no processo contnuo. A reduo no custo do catalisador no processo continuo se deve maior estabilidade e a reutilizao da enzima aminociclase imobilizada. 6.3. Produo de edulcorantes artificiais A aplicao de mais sucesso das enzimas imobilizadas na produo de xarope de frutose usando a enzima imobilizada glicose isomerasa para a converso da glicose. Outro edulcorante artificial, o D-manitol tambm pode ser produzido usando esta enzima. Nos anos 1970s houve uma escassez de sacarose, resultando em um aumento do preo e tentou-se substituir por edulcorantes. A Tabela 6 apresenta a doura comparada com a sacarose e suas possveis alternativas. Tabela 6. Doura comparada com a sacarose e possveis alternativas. Acar Sacarose Xarope de glicose Frutose Doura comparada com a sacarose 100 40-60 114

A glicose muito menos doce quando comparada com a sacarose. Entanto que a frutose mais doce e ainda aucares com alto teor de frutose so desejados. A glicose pode ser obtida pela despolimerizao do amido por hidrlise cida e pode ser isomerizada usando catalisadores alcalinos em uma mistura 1:1 de glicose e frutose. Apesar de estes produtos forem muito desejados, nem a despolimerizao induzida por HCL e nem a isomerizao alcalina so etapas atrativas devido quantidade de subprodutos formados. A despolimerizao do amido catalisada por enzimas um processo mais fatvel e novo. Em combinao com a enzima glicose isomerasa que catalisa a interconverso da glicose em uma mistura 1:1 de glicose e frutose tornou atrativo o desenvolvimento do processo. O xarope derivado do milho com alto teor de frutose se denomina com a sigla HFCS. Inicialmente (1960s) a isomerizao de glicose em frutose era efetuada em reatores em batelada com a enzima glicose isomerasa dissolvida. No final da dcada dos 1960s foi demonstrado que o custo de produo era reduzido com a imobilizao da enzima glicose isomerasa e isto levou a um desenvolvimento rpido e comercializao da tecnologia de glicose isomerasa imobilizada. A produo de HFCS a maior aplicao comercial das enzimas imobilizadas. Uma alternativa imobilizao da enzima a imobilizao das clulas completas. Esta tcnica tambm aplicada para a glicose isomerasa. A interconverso da glicose em frutose uma reao em equilbrio:
CH2OH O CH2OH OH O OH CH2OH OH OH

Glicose isomerasa
OH OH OH

D-glicose

D-frutose

A concentrao de equilbrio termodinmico varia em dependncia das condies de reao, mas geralmente se obtm aproximadamente uma mistura 1:1 de glicose e frutose a temperaturas entre 300 e 350 K, como mostrado na Figura 14. Profa. Caridad Noda Prez Pgina 176

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Figura 14. Concentrao de equilbrio da frutose na mistura glicose/frutose em funo da temperatura. A Figura 15 mostra um esquema de fluxo simplificado do processo contnuo de produo de HFCS a partir de glicose. A glicose isomerasa necessita da presena de ons metlicos como Co2+, Mn2+, Mg2+ ou Cr2+ para sua atividade cataltica. Usualmente adicionado ao substrato de glicose um sal de magnsio e outros sais para ajustar o pH. O produto tem de ser tratado com carbono e com resinas inicas para a remoo dos sais e das impurezas que produzem uma colorao indesejada. Os compostos orgnicos responsveis pela cor no xarope de acar so removidos por adsoro em carbono na maioria das usinas de acar. Duas resinas trocadoras de ons so usadas para remover os sais remanescentes e as impurezas, a primeira uma resina trocadora de ctions e a segunda uma resina trocadora de nions. O pH do produto aps a troca inica ajustado para maximizar a estabilidade do xarope e finalmente o xarope concentrado a vcuo.

Figura 15. Produo contnua de HFCS (high frutose corn syrup) A queda de presso no reator um problema pelo uso de partculas de tamanho entre 150 e 3000 m. O uso de leitos baixos de enzimas como mostrado na Figura 15 resolveu o problema da queda de presso no reator. Adicionalmente, alguns sistemas de enzimas poderiam ser comprimidos em uma operao em leito profundo. Sistemas de enzimas suportadas em cermicas porosas tm sido desenvolvidos e a queda de presso nestes sistemas reduzida. Produo de manitol O D-manitol o um edulcorante valioso porque no higroscpico e no apresenta problemas de decomposio nos dentes. Este produto pode ser produzido pelo processo da Combi como Profa. Caridad Noda Prez Pgina 177

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apresentado no Esquema 2, pela combinao da interconverso enzimtica da glicose a frutose simultaneamente com a hidrogenao seletiva da frutose em manitol.
CH2OH O CH2OH OH O OH

Glicose isomerasa
OH OH OH OH OH

CH2OH

D-glicose

D-frutose

H2 , catalisador

OH HO

OH HO OH OH OH

OH

OH OH OH OH

D-glicitol (sorbitol)

D-manitol

Esquema 2. Processo Combi. Isomerizao enzimtica da mistura D-glicose/D-frutose simultaneamente com a hidrogenao com catalisador metlico. Neste caso o equilbrio da reao de isomerizao est deslocado para a formao de frutose, pela hidrogenao seletiva da D-frutose a D-manitol. Para a converso da glicose em frutose se usa uma enzima imobilizada comercial, entanto que para a hidrogenao seletiva se emprega um catalisador metlico a base de cobre. O rendimento timo em manitol requer de: 1. Hidrogenao seletiva da frutose com respeito glicose 2. Alta seletividade na direo do manitol na hidrogenao seletiva da frutose 3. Interconverso rpida da glicose em frutose para manter a concentrao de frutose elevada. O rendimento em manitol aproximadamente de 60% partindo da glicose, como apresentado na Figura 16. Quando se usa uma mistura de glicose e frutose essencialmente se obtm o mesmo rendimento. Isto mostra que a reao de isomerizao rpida enquanto que a reao de hidrogenao lenta.

Figura 16. Rendimento do produto no processo Combi, alimentao glicose. Profa. Caridad Noda Prez Pgina 178