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UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPIRITO SANTO UFES PROGRAMA DE POS GRADUAO ENGENHARIA AMBIENTAL PPGEA BIOTECNOLOGIA AMBIENTAL Prof.

f. Servio Tulio Cassini

CICLO DO NITROGNIO

disponibilidade biolgica do nitrognio (N) no solo, juntamente com o fsforo (P), enxofre (S) e potssio (K) tem relao direta com a produtividade agrcola. Embora, este elemento seja encontrado em abundncia na atmosfera na forma do gs N2, constituindo cerca de 80% do seu volume total, nesta forma quimicamente inerte e no disponvel para os seres vivos. Geralmente as formas disponveis ou combinadas de nitrognio para a nutrio dos seres vivos incluem as combinaes amoniacais (NH4+), ntricas (NO3-) ou orgnicas (R-NH2) que so metabolizadas visando a construo de biomassa. Nos solos, o nitrognio combinado , geralmente, o fator limitante para a produo agrcola. Nesse sentido, torna-se necessrio a adio do nitrognio combinado no solo para compensar esta limitao. Geralmente isto realizado por meio de adubaes qumicas ou orgnicas com o objetivo restaurar os nveis de N disponvel e atender a demanda de N pelas culturas. Na natureza, o nitrognio apresenta um grande nmero de transformaes mediadas por microrganismos especficos, visando a adio ou manuteno N disponvel no solo. Entretanto, algumas transformaes podem promover uma retirada do N do solo, tais como a volatilizao e lixiviao. Assim, o N-disponvel no solo depende de um manejo correto e conhecimento das transformaes desse elemento nos ambientes agrcolas. As principais transformaes do N podem ser resumidas no seguinte ciclo:

Legenda: Legenda 1. Mineralizao (Amonificao) 2. Imobilizao (Assimilao) 3. Equilbrio qumico (dependente do pH) 4,5 Nitrificao 6,7 Desnitrificao 8. Fixao 9. Imobilizao (Reduo Assimilativa - Plantas) 10. Decomposio e complexao 11. Lixiviao

Mineralizao e Imobilizao de Nitrognio O nitrognio o nutriente do solo requerido em maior quantidade pelas plantas, as quais o assimilam na forma inorgnica, como amnio (NH4+) ou preferencialmente na forma de nitrato (NO3-). A fonte primria de N do solo a matria orgnica do solo ou hmus, que apresentam o N na forma de R-NH2 formando complexos orgnicos. Nesse caso, a mobilizao ou mineralizao do nitrognio orgnico (N-org) constitui o primeiro e importante passo para a sua disponiblidade para as plantas e microrganismos do solo. Geralmente, a mineralizao do nitrognio entendida como a converso do Nitrognio orgnico (N-org) na sua forma inorgnica (Ni). Como o primeiro produto dessa transformao no solo o amnio (NH4+), a amonificao entendida como sinnimo de mineralizao do Norg do solo. Entretanto, o NH4+ sofre uma rpida oxidao at NO3- realizada pelos microrganismos nitrificantes. Na prtica a avaliao da mineralizao do Norg de um solo se realiza por meio de medidas tanto de NH4+ como NO3-. Embora exista esta dualidade de interpretao , a mineralizao do N considerada como a transformao do N orgnico em NH4+, ou seja, a amonificao. Amonificao Cerca de 75 a 95% do nitrognio encontrado nos horizontes superficiais do solo est na sua forma orgnica (Norg) distribudos entre 3 compartimentos a) biomassa; b)resduos e c) substncias hmicas. No caso de biomassa e resduos, o nitrognio encontrado fazendo parte de paredes celulares (quitina, peptidioglicano), proteinas, aminocios e cidos nucleicos. Nas susbstncias hmicas o nitrognio forma complexos que somente podem ser fracionados articificialmente por meio de hidrlise cida, sendo, portanto, de difcil caracterizao. Estes compostos hmicos so recalcitantes, isto , persistem por longos perodos de tempo na solo. Nesse caso, a sua resistncia mineralizao tem sido atribuda a duas razes: 1. Compostos nitrogenados formam complexos ou polmeros com os fenis ou polifenis, resultando em substncias menos susceptveis degradao. 2. Adsoro de substratos e enzimas no lattice de argilas. Sendo as enzimas que atuam no processo de mineralizao do N, tipicamente com ao extra-celular, este aprisionamento pode aocasionar uma diminuio das taxas de mineralizao do N do solo em determinados tipos de solos argilosos. importante frisar que todo o nitrognio orgnico (Norg) est na forma de N-NHx (amina, amida, imidas) e por esta razo o primeiro produto de sua mineralizao sempre o N-amoniacal (NH3 ou NH4+) Decomposio das Protenas Uma das principais fontes de nitrognio orgnico no solo so as protenas, liberadas aps a morte e liberao do contedo celular da biomassa microbiana, vegetal ou animal. O processo de decomposio realizado em vrias etapas. A primeira etapa denominada protelise que a degradao enzimtica de protenas por meio de proteases ou proteinases, que separam a cadeia proteica em peptdios curtos e logo a seguir atacada por peptidases que liberam os diversos aminocidos: Proteases Peptidases 2

Proteinas ------------------- Peptdios -------------------- aminocidos As Proteinases so produzidas por muitos fungos e bactrias principalmente aquelas pertencentes aos gneros Clostridium, Pseudomonas e Bacillus. As peptidases so muito mais comuns entre os microrganismos. Assim, muitos meios de cultivo de microrganismos heterotrficos do solo utilizam peptona, que so peptdios produzidos a partir hidrlise parcial de uma fonte proteica tais como: carne, leite (casena), ou soja. Em uma segunda etapa os aminocidos liberados durante a protelise sofrem um processo de desaminao para liberao do grupo N-NH2 e liberao de NH3 por meio de rotas metablicas envolvendo a desaminao direta, desaminao oxidativa ou descarboxilao com produo de CO2 + NH3. Decomposio dos cidos Nuclicos Devido a sua estrutura polimrica de Bases(ATUGC)-aucar(Pentoses)- PO4-, os cidos nucleicos, RNA e DNA, so importantes fontes de N e tambm de P para os microrganismos. No aspecto quantitativo considerada a segunda frao em importncia no solo, logo aps as protenas. So incorporados no solo aps a autlise celular e seguem uma rpida degradao no solo por meio de enzimas denominadas genericamente de nucleases (ribonuclease ou deoxi-ribonuclease). Deve-se ressaltar que, similarmente a todas as enzimas envolvidas no processo de mineralizao do Norg do solo, estas enzimas tem atuao extracelular gerando bases nitrogenadas (mononucleotdeos e mononucleosdeos ). Os nucleosdeos gerados podem ser assimilados pelos microrganismos e metabolizadas at a formao seus produtos finais na forma de uria e CO2, conforme a seguinte seqncia de eventos
Polinucleotdeos (DNA, RNA) (1) mononucleotdeos + nucleosdeos + P(2) uria + CO2 + PO4-

(1) enzimas nucleases (extracelular) (2) metabolismo oxidativo (intracelular) Decomposio da Uria A uria um produto da destruio de bases nitrogenadas liberadas na decomposio de cidos nucleicos, sendo naturalmente um produto de excreo de animais superiores. A sua molcula pode ser sintetizada e utilizada na agricultura como um fertilizante nitrogenado orgnico. A caracterizao da uria como um intermedirio no metabolismo microbiano, como um produto de excreo de animais e como fertilizante faz dela um composto chave no ciclo do nitrognio em solos agrcolas. Aplicada no solo, rapidamente hidrolizada e todo o nitrognio liberado na forma amoniacal (NH3) em poucos dias conforme a seguinte equao:
urease

CO (NH2)2 + H2O (NH4)2CO3 2 NH3 + CO2 + H20

Os microstios do solo incorporados com uria tendem a apresentar uma elevao dos valores de pH, devido ao consumo de protons (H+) na produo de amnio (NH4+). Prximo partcula de uria sendo mineralizada, estes valores de pH podem se momentneamente maiores que 8,0 e algumas vezes 9,0, embora o pH a uma pequena distncia possa estar prximo neutralidade ou abaixo. Nestas condies alcalinas, o produto de fato amnia gasosa (NH3), e pode ser assim 3

volatilizada. Este fato acontece devido ao equilbrio qumico entre amnia (NH3) e amnio (NH4+) ser dependente do pH do meio, conforme a seguinte equao: 1

NH3 + H20
2

NH4+ + OH1. pH < 6 2. pH > 8

ou seja, em meio alcalino a reao tende a equilibrar-se para a esquerda, originando a forma gasosa de amnia (NH3) que perdida para a atmosfera por volatilizao. Estima-se que estas perdas podem atingir valores de at 70% do N aplicado na forma amoniacal. Desse modo, o nitrognio amoniacal, quando aplicado em solos prximos a neutralidade ou alcalino, deve ser acompanhada de algumas opes de manejo de modo a controlar essa excessiva tendencia alcalinidade. Duas opes: (1) utilizao de uria de grnulos de liberao lenta Forma comercial que pode Ter a sua solubilidade controlada (2) utilizao de uma fonte de S juntamente com a uria (SSO4 :: pH) Aps a liberao de NH3, os valores de pH inicialmente alcalino tende a se reverter, pois, a oxidao do NH3 pela nitrificao promove a gerao de acidos que atenuam os nveis de alcalinidade inicial durante a decomposio da uria. Muitos microrganismos possuem a enzima urease, responsvel pela hidrlise da uria, sendo por isto uma das enzimas de mais ampla distribuio nos solos. Um pequeno grupo de bactrias tem sido nomeado como bactrias da uria devido a sua tolerncia a altos nveis de uria e suas afinidades com este composto, tais como Bacillus esporulados do solo. Bactrias ureolticas so facilmente isoladas do esterco ou solo enriquecido com soluo contendo altas concentraes de uria. Em cultura pura os organismos mostram-se sensveis acidez, sendo que o seu crescimento ocorre apenas em meio neutro ou alcalino. Elas so esparsas ou ausentes em reas com pH 4,0 a 5,5. Assim, a decomposio da uria em ambiente cido, provavelmente pode ser atribuda uma microbiota no especfica ou a produo de agentes tamponantes do meio. Mineralizao x Imobilizao do N do solo A velocidade com que o nitrognio orgnico convertido a amnio e/ou nitrato denominada taxa de mineralizao a qual, em ambientes que recebem resduos de culturas ricos em nitrognio, podem variar de de <1,0 a 20,0 mg N/dm3 solo por dia. Essa taxa representa a liberao bruta de nitrognio inorgnico (Ni) e no a quantidade tipicamente encontrada nas avaliaes de N do solo. Na realidade, o que interessa para o crescimento e desenvolvimento de plantas e microrganismos do solo o balano do nitrognio inorgnico disponvel ( Ni) que pode ser avaliado pela seguinte expresso: Ni = N mineralizado ( N imobilizado + N volatilizado + N lixiviado) ou seja, a quantidade total lquida de Ni produzido por uma quantidade constante de substrato de Norg resultante de um delicado balano entre as foras de mineralizao (M) e aquelas responsveis pela remoo do N do solo. Estas foras 4

so representadas pela lixiviao, desnitrificao e particularmente a assimilao oum imobilizao microbiana. Desse modo, embora a produo total de Ni possa ser grande, nenhum aumento ou algumas vezes at mesmo um decrscimo pode ser observado em medies do contedo de amnio e nitrato no solo. Em condies naturais os dois termos da equao se equilibram de modo a manter um fluxo adequado e constante de Ni no solo. Em solos agrcolas e reas devastadas a tendncia para um balano ( Ni) negativo, ou seja, com favorecimento dos processos de remoo do nitrognio disponvel e reduo da sua fertilidade, exigindo, assim, adubaes nitrogenadas para compensar esse deficit. Considerando a possibilidade de manejo das condies de perdas por volatilizao e lixiviao, os valores de Ni aps a adio de uma fonte de N no solo ficam particularmente dependentes da assimilao ou imobilizao do N. Este fato est relacionado com a qualidade ou relao C:N do resduo adicionado ao solo como fonte de N. A assimilao ou imobilizao, geralmente, realizada por microbiota mista, (fungos, bactrias e actinomicetos), que tem uma demanda fixa de carbono:nitrognio de 10:1, 5:1 e 5:1, respectivamente, e um valor mdio para de C:N= 8:1 e, tambm, um valor mdio de assimilao do carbono disponvel em torno de 35%. Admitindo-se um teor mdio de carbono disponvel em resduos orgnicos, de aproximadamente 40%, a quantidade de N minimamente necessria para a biodegradao do resduo pode ser calculada pela expresso: Demanda N= ((Cdisponvel * Cassimilado) / C:N microbiota mista)*100) Demanda de N = ((.40 x 0,35 )/8)*100) = 1,75 % N ou seja, para a decomposio de 100 unidades de matria orgnica so necessrios 1,75 unidades de nitrognio no resduo, para provimento da demanda de N para a construo de biomassa microbiana. Este o valor que comanda as relaes de Mineralizao (M) ou Imobilizao (I) do N do solo durante a decomposio de um resduo. Um exemplo prtico dessas relaes pode ser deduzida quando se adiciona materais pobres de N e consequente elevada relao C:N (ex. palhas) em comparao com materiais mais ricos de N (ex. leguminosas), em relao ao balano de nitrognio do solo. Neste sentido, foi realizado um exprimento com o objetivo de se estimar estes ganhos e perdas ( Ni) alm de medir o teor mnimo nitrognio do resduo que equilibra as relaes de mineralizao e imobilizao de nitrognio do solo. Assim, varios materiais com diferentes contedos de N foram incorporados em um solo, em taxas equivalentes a 600 mgN/kg, avaliando-se os teores de N-NO3-aps 3 meses e calculando o Ni em relao ao mesmo solo como referncia. Resduo adicionado Solo Normal Sangue seco Trevo Milho Graminea Aveia %N -10,71 1,71 0,79 0,62 0,45 947 1751 924 511 398 207 Aps 3 meses [NO3-] Ni -+804 -23 -436 -549 740

Considerando-se que os aspectos de desnitrificao e volatilizao do N foram minimizados, verifica-se que os resduos com alto conteudo de N favoreceram um 5

acrscimo de N no solo, enquanto que os resduos de baixo contedo de N, imobilizam o N do solo. A tendncia ao ponto de equilbrio se verifica com o resduo de Trevo, que apresenta um valor de 1,71% N, conferindo com os cculos depredio da demanda de N. Em resumo: % N no Resduo > 1,8 > 1,2 e < 1,8 <1,2 A experincia sugere que: 1. O nvel crtico de nitrognio expresso em termos de relao C/N (baixa adequada; elevada, inadequada). 2. Em material natural com aproximadamente 40% de C, o nvel crtico corresponde a 1,2 a 1,8% N e relao C/N de 20 a 30:1. 3. Relao C/N mais larga imobilizao 4. Relao C/N mais estreita mineralizao 5. Resduos em decomposio tendem naturalmente para o estreitamento da sua relao C:N de. Entretanto, a adio de uma fonte de N para colocar a relao C/N do resduo em aproximadamente 30 a 35:1 (1,2 a 1,8% N) pode ser economicamente vivel. 6. A fertilizao para a comunidade microbiana e no para a cultura. Efeito da sua adio ao solo Mineralizao do Norg, Ni (+), M>I Imobilizao temporria, Ni0; M = I, Imobilizao prolongada, Ni(-), M < I

NITRIFICAO A nitrificao definida como a formao biolgica de nitrato ou nitrito a partir de compostos que contenham nitrognio na forma amoniacal (NH4+). A importncia dos nitrificantes est no fato da produo de nitrato, que a principal fonte de nitrognio assimilado pelas plantas. Durante a era Napolenica, a demanda de sais de nitrato para produo de plvora estava aumentando, e com a guerra houve interrupo quanto ao acesso s fontes naturais e o nitrato passou a ser produzido em pilhas de solo + calcrio + esterco (ou urina ou esgotos). Estas pilhas quando misturadas e convenientemente aeradas, entravam em decomposio, sendo o NO 3- extrado com H2O quente do produto final. Em 1870, Pasteur postulou que a formao de NO3- era um processo microbiolgico e anlogo converso do lcool ao vinagre. Mas a primeira evidncia experimental de que este era um processo biolgico atribuda a Schloesing e Muntz (1797) que adicionaram resduos de esgotos a um tubo longo cheio com areia estril e CaCO3. Durante 20 dias a concentrao de amnio no lquido permaneceu inalterada, mas aps esse perodo o amnio desapareceu e houve o aparecimento do nitrato. O aquecimento da coluna ou a adio de antisptico eliminava a transformao, a qual era reiniciado pela adio de pequenas quantidades de solo de jardim. Em 1878, Warrington descobriu que a nitrificao era um processo que envolvia 2 grupos de microrganismos, mas o responsvel pelo isolamento do microrganismo nitrificantes foi S. Winogradsky (1890). 6

Bactrias nitrificantes e suas reaes bioqumicas O trabalho pioneiro de Winogradsky estabeleceu que a nitrificao est tipicamente associada com certas bactrias quimioautotrficas. Elas so aerbias obrigatrias que derivam seu carbono do CO2 ou carbonatos e a energia proveniente da oxidao de NH4+ ou NO2-. As bactrias so classificadas em dois grupos, baseados se eles oxidam NH4+ a NO2- ou NO2- a NO3-). Os principais grupos de bactrias nitrificantes so: BACTRIAS QUIMIOAUTOTRFICAS OXIDANTES DE NITROGNIO GNERO ESPCIE HABITAT + Oxidantes do amnio (NH4 ) a nitrito (NO2 ) Nitrosomonas* N. europeae Solo, gua, esgoto Nitrosospira N. biensis Solo Nitrosococcus N. nitrosus Mar N. oceanus Mar N. mobilis Solo Nitrosovibrio N. tenuis Solo Oxidantes do nitrito (NO2 ) a nitrato (NO3 ) Nitrobacter* N. winogradskyi Solo Nitrospira N. gracilis Mar Nitrococcus N. mobilis Mar * mais comumente encontrada Na maioria dos habitat as bactrias dos dois grupos so encontradas juntas, sendo que o NO2- raramente acumula na natureza, sendo clssicamente descritas como exemplo de interao sinrgica no solo. As bactrias nitrificantes exigem meios de cultivo com composio definida, utilizando como fonte de carbono o carbonato e uma fonte de N-amoniacal. Sendo estes microrganimos tpicamente autotrficos aerbios, podem crescer em meios minerais, adicionados de amonia ou nitrito apenas. A eficincia bioqumica nesses organismos convencionalmente expressa pela relao entre nitrognio inorgnico oxidado (deriva a energia) para carbono CO2 assimilado. Para a Nitrosomonas a relao NH4+-N:CO2-C 14 a 70:1 e para a Nitrobacter essa relao de 76 a 135:1. A reao tpica em sua primeira etapa : NH4+ + 1 O2 NO-2 + 2H+ + H2O

Esta reao se processa em vrias etapas e com a formao de vrios produtos intermdirios, principalmente a hidroxilamina (NH2OH) que oxidada at HNO2. Deve-se ressaltar que esta primeira etapa gera um elevado potencial de acidez do meio, devido a violenta liberao de H+. Assim, quando do cultivo desses microrganismos, deve-se promover um efeito tampo no meio com a utilizao de CaCO3 para evitar a morte desses microrganismos nitrificantes por excesso de acidez do meio. A segunda etapa na sequncia autotrfica assim visualizada como envolvendo uma hidratao do nitrito da qual o on hidrognio removido: NO2- + H2O H2O.NO2 NO3 + 2H

Embora o NO2- raramente se acumula no meio, a possibilidade de sua a acumulao pode ser devida a um excesso de alcalinidade associada com elevados teores de amnio. A fertilizao com amnia anidra pode elevar o pH a 9,0 ou 9,5 e a fonte de nitrognio junto com o alto pH local freqentemente causa acumlo de nitrito. Mesmo a decomposio de protenas ou uria pode resultar nesse efeito temporrio. Com o progresso de nitrificao h o desenvolvimento da acidez e alvio do problema. O acmulo de nitrito pode tambm ser atribuda a sensibilidade da Nitrobacter a sais de amnio em meio alcalino. Em pH 9,5 e 4 ppm NH4+-N suprime a reao produtora de energia do Nitrobacter. Assim o amnio um inibidor seletivo em condies alcalinas, da segunda etapa da nitrificao. Fatores ambientais Acidez H uma correlao significativa entre produo de NO3- e o pH. A acidez afeta no somente a transformao, mas tambm o nmero de nitrificantes. O pH timo para os isolamentos individuais pode variar de 6,6 a 8,0 ou mais. A taxa de nitrificao nos solos agrcolas diminui marcadamente em pH abaixo de 6,0 e torna-se negligvel abaixo de 5,0, embora o nitrato possa ocasionalmente estar presente em solos com pH 4,0 ou menor. Essa presena possivelmente atribuvel a estirpes adaptadas a acidez ou diferenas qumicas do habitat. Em pH elevado, NH4+ inibe a transformao de NO2- em NO3-. Esse acmulo de nitrito parece estar relacionado mais com a sensibilidade da bactria do grupo Nitrobacter aos sais de amonio em condies alcalinas. Como ocorre um abaixamento do pH com o processo de nitrificao, os oxidantes do nitrito passam a atuar sobre os substratos. Em solos cidos de floresta h produo de grandes quantidades de NO3-. Quando sofrem o desmate ou queimada, que resultam em em altas taxas de mineralizao do que imobilizao. Parece que os nitrificantes heterotrficos e/ou microstios que fazem a nitrificao nos solos florestais no so cidos sensveis como nos solos agrcolas. Devido a sensibilidade do microrganismo acidez, aos ons hidrognio, a nitrificao em solos cidos usualmente aumentada pela calagem. Freqentemente, a falha em nitrificar inteiramente uma consequncia da acidez, e a condio pode ser prontamente aliviada pela calagem. A produo de nitrato varia de acordo com o material em decomposio. Em ambiente prximo a neutralidade, nitrato aparece mais rapidamente de sais de amnio que de compostos nitrogenados orgnicos, enquanto em solos cidos ao contrrio. Explica-se este fato como um resultado do aumento da alcalinidade durante a amonificao, o que faz o ambiente prprio aos nitrificadores. A oxidao de NH3 anidra ou NH4OH similarmente mais rpida que a nitrificao de sais de amnio. Quando uria hidrolizada, o amnio resultante eleva os valores de pH. Assim a nitrificao maior, em solos cidos, a partir da uria que a partir do (NH4)2SO4. Este efeito no esperado em solos com pH prximo ao timo para os nitrificantes. Alguns solos cidos, que sofrem calagem, respondem a inoculao com bactrias nitrificantes bioquimicamente ativas. O uso de fungicidas em grandes propores pode eliminar completamente as nitrificadoras e resultar em acmulo de amnio que poder atingir nveis de fitotoxidade. Uma vez dissipada a contaminao, o solo responde inoculao ou normalmente contaminado.

A medida que o cido ntrico formado e os valores de pH diminuem, certos ons como o potssio, fosfato, magnsio, mangans e clcio podem se tornar mais disponveis. Aerao Oxignio um requerimento obrigatrio para todas as espcies aerbias. A aerao adequada do meio depende de uma serie de fatores. Assim, o teor de umidade e a estrutura do solo iro afetar a acumulao de nitrato atravs de sua influncia sobre a aerao. Em solos submergidos para o crescimento de arroz, a nitrificao ocorre nos centmetros superficiais do solo oxigenado (o oxignio difunde atravs da fase aquosa e mantm oxigenado o solo). Umidade A umidade afeta o regime de aerao do solo, e assim a produo de nitrato. Em um extremo limita a difuso de O2, no outro, em condies ridas retardada por insuficincia de gua. O timo varia consideravelmente com o tipo de solo, podendo-se tomar como referncia a da capacidade de reteno do solo. Geralmente as reaes de mineralizao produtoras de NH4+ (a amonificao) so menos sensveis a stress de gua e baixa tempertura. Assim h um acmulo de NH4+ em solos com stress de gua ou baixas temperaturas. Temperatura A estao do ano em que nitrato mais abundante no solo no coincide, necessariamente, com a mxima atividade microbiana devido a absoro pelas plantas, imobilizao microbiana e lixiviao, processos que reduzem o nvel de nitrato. marcadamente afetada pela temperatura sendo baixa em temperatura menores que 5oC ou maiores que 40-50oC. A temperatura tima varia com a estirpe, mas situa-se usualmente entre 30 a 35 oC. A interao da temperatura, umidade, aerao, e, outros fatores marcam um efeito sazonal. em reas temperadas, a nitrificao maior na primavera e outono que no vero ou inverno. Matria orgnica A cultura pode afetar o tamanho e a atividade da microbiota nitrificante. o exemplo das pastagens onde h maior abundncia de amnio que nitrato. As causas ainda no esto bem definidas havendo evidncias de que as razes excretam exudatos que reduzem a taxa de nitrificao. Ex.: corte de reas como rvores e arbustos e onde o crescimento foi impedido com herbicida provocou uma descarga de nitrato no solo (vegetao?). Alternativamente isto pode significar que a vegetao foi capaz de remover o nitrato medida que ele era feito. Por outro lado, o acmulo de produtos secundrios de plantas no solo, tais como taninos e outros compostos fenlicos, podem inibir os microrganismos nitrificantes. Embora os microrganismos nitrificantes apresentem um metabolismo tipicamente autototrfico, ou seja, crescem em meios minerais sem carbono orgnico, estes microrganismos apresentam uma dependncia indireta da matria orgnica do solo, pois, a matria orgnica do solo a nica via de fornecimento de NH4+ para o solo, por meio da amonificao. Nitrificao heterotrfica Vrias bactrias e actinomicetos heterotrficos so capazes de gerar traos de NO2 quando crescidos em meio contendo NH4+. algumas bactrias, como estirpes de Arthrobacter, e fungos, como o Aspergillus flavus, produzem NO3- de NH4+. Os heterotrficos no derivam energia dessas reaes de oxidao e sua significncia na 9

natureza no conhecida. A produo de NO3- nos solos de agricultura pelos heterotrficos parece no ser significativa, comparado com os nitrificantes autotrficos. Poluio por Nitrato O excesso de NO3- pode: 1. Causar o processo de eutroficao de guas, causando excessivo crescimento de plantas e algas. 2. Metehemoglobinemia infantil ou animal. O NO3- ingerido transformado em NO2durante o processo de digesto. Este NO2- ao chegar na corrente sangunea oxida a hemoglobina, formando a metehemoglobina, bloqueando o transporte de O2. 3. Formao de nitrosaminas, compostos carcinognico, mutagnicos e teratognicos, isto , podem causar cncer, mutaes e anomalias e algumas vezes mortes de fetos. A sua formao requer a presena de um segunda amina e nitrato, e a reao de simples condensao. Esta reao pode ser conduzida por reaes enzimticas de microrganismos ou pelo proceso no enzimtico pela presena de matria orgnica do solo. Inibidores da nitrificao O nitrato geralmente no acumula em solos estveis de campo e florestas. H numerosas sugestes que o clmax de um ecossistema produz compostos orgnicos, tais como o tanino, que so txicos ao nitrificantes. Este processo, chamado alelopatia, parece representar um controle natural de nitrognio. Um argumento alternativo mais aceito atualmente que a competio por NH 4+ pelas razes de plantas, fungos micorrzicos e microrganismo imobilizadores de nitrognio mantm a taxa de N inorgnico baixa. Para reduzir as perdas de nitrognio, tem sido desenvolvido pesquisas para se encontrar inibidores qumicos que possam ser aplicados juntos com a amnia ou uria para reduzir a nitrificao. O composto no poderia ser fitotxico nem poluente do ambiente. Um dos melhores o 2-cloro-6 (triclorometil) piridina. Tiouria, isotiocianatos, s-triazinas, etc... (ver tabela de inibidores).
ALGUNS INIBIDORES DE NITRIFICAO PATENTEADOS COMPOSTO QUMICO NOME COMERCIAL 2-Cloro-6(triclorometil)piridina N-serve 4-Amino-1,2,4-6-triazole-HCl ATC 2,4-Diamino-6-triclorometil triazine CL-1580 Dicyandiamide Dicyan Thiourea TU 3-Mercapto-1,2,4-triazole MT 2-Amino-4-Cloro-6-metilpirimidina AM Sulfatiazole ST FABRICANTE Dow Chemical Ishihada Industries American Azanamid Showa Denho Nitto Rejuso Nippon Mitsui Toatsu Mitsui Toatsu INIBIO (% EM 14 DIAS) 82 78 65 53 41 32 31 31

A efetividde dos vrios inibidores governada pelo tipo de solo e temperatura, pH e umidade de solo, entre outros fatores. Outras pesquisas so para desenvolver fertilizantes de baixa liberao. Aqui o objetivo criar material fertilizante que liberar somente pequenas quantidades de nitrognio inorgnico a um dado tempo, aumentando assim a eficincia do fertilizante por evitar uma alta produo de NO3- e sua perda. Um desses exemplos a peletizao da uria com enxofre, porque favorece a gerao de acidez durante a nitrificao. Evitar o acmulo excessivo de NO3- uma prtica importante a ser levada em considerao. 10

DESNITRIFICAO A discusso da desnitrificao est intimamente ligada ao destino do NO3- no solo. Geralmente o NO3- no solo tem 3 destinos: a) Assimilao refere-se a sua assimilao pelas biomassa de plantas. Este processo realizado por enzimas denominadas genericamente de redutases, que convertem o NO3- em NH4+, o qual incorporado em carbono orgnico gerando aminocidos para a sntese protica. b) Desassimilao ou volatilizao refere-se ao processo de desnitrificao. Neste caso os microrganismos heterotrficos utilizam o nitrato como aceptor final de eltrons e prtons, no processo de respirao anaerbia. As enzimas que realizam este processo so tambm denominadas redutases. As primeiras transformaes nesta seqncia de eventos so semelhantes ao processo assimilativo (Nitrato redutase e nitrito redutase). c) Lixiviao O nion NO3- tem grande mobilidade no solo, devido a prevalncia de cargas negativas. Assim, o nitrato presente em horizontes superficiais do solo pode facilmente ser percolado e acumular em lenis freticos. O processo de desnitrificao Consiste na reduo microbiana de nitrito e nitrato com a liberao de nitrognio molecular e xido nitroso (N2O). tambm conhecida como desnitrificao enzimtica. Na desnitrificao o N perdido ou volatilizado para a atmosfera. Ela essencialmente um mecanismo respiratrio em que o nitrato substitue o oxignio molecular, e por isso tambm denominada de respirao de nitrato. NO3- NO2- NO N2O N2 Formas volteis Perdas de N no solo Quando o nitrato e carbono orgnico disponvel so adicionados ao solo, o nitrato aplicado reduzido e h evoluo de N2, N2O e NO (xido ntrico). Estes produtos so volteis e perdidos para a atmosfera. O NO que escapa oxidado por processos no biolgicos pelo O2 e NO2 (dixido de N). A demonstrao quantitativa do desprendimento de N2 no campo no fcil, desde que o N2 um componente da atmosfera. O desprendimento lento e usualmente as quantidades de nitrato e carboidratos ou matria orgnica prontamente uitilizvel no grande. Quando desejamos estabelecer um balano do nitrognio do solo e seu Ni, necessrio avaliar a quantidade de N que est sendo adicionado no solo, atravs da preciptao, das sementes, dos fertilizantes, dos estercos, bem como as quantidades perdidas por lixiviao, eroso e remoo por plantas. Se no h mudana no total, as perdas devem igualar os ganhos. Se as perdas excedem os ganhos, o N est sendo perdido por alguma forma no includa nas variveis consideradas para o preparo do balano. Resultados destas avaliaes mostram que as perdas por volatilizao podem variar de 25 a 50% do total de Ni aplicado princicpalmente na forma de NO3-. Neste aspecto a utilizao de fertilizantes amoniacais com controle de pH, tem uma ntida 11

vantagem em relao aos fertilizantes nticos, pois o NH4+ e mais retido no coloide do solo e a sua volatilizao somente ocorre em valores de pH mais alcalinos. Mecanismos de volatilizao de N So trs as possveis reaes: 1. Perda no biolgica da amnia 2. Decomposio qumica do nitrito 3. Desnitrificao microbiana, com, a liberao de N2, N2O (xido nitroso) e algumas vezes NO (xido ntrico) A primeira, volatilizao de NH3 livre, pode ser aprecivel sob certas condies. Na maioria dos solos esta perda insignificante abaixo de pH 8,0, e a magnitude varia diretamente com o aumento da alcalinidade. Temperaturas altas favorecem o processo, mas as perdas so menores em solos com alta CTC. Em solos em que o nitrito acumula, em locais com alto pH, o nitrito pode decompor espontaneamente atravs de uma reao com a matria orgnica. Produz N2, NO2, e pequenas quantidades de N2O. Contudo, mesmo na circunstncia em que nitrito aumente no solo, a gerao microbiana dos gases deve exceder os processos biolgicos. Nenhuma volatilizao detectada quando NH4+ aplicado em reas muito cidas para a nitrificao porque o nitrito no sintetizado. O mecanismo mais importante de volatilizao de N a desnitrificao microbiana. Embora haja poucos dados disponveis, eles surgerem uma peda considervel. O produto principal da reduo de nitrato em solos pobremente drenados ou solos que tornam-se excessivamente midos parece ser gasoso ao invs de NO 2- ou NH4+. O NO2- reduzido to rpidamente quanto formado. Microbiologia O crescimento dos microrganismos envolvidos na desnitrificao no dependente da reduo do nitrato. Muitas bactrias responsveis so ativas em protelises, amonificao, e outras transformaes. Consequentemente a presena de muitos desnitrificantes no indica que h condies adequadas para a desnitrificao. Assim, a abundncia de organismos sem especificidade por substrato no deve ser entendida como indicao de que a atividade bioqumica proveniente no habitat de onde ele for isolado. Com organismos substrato-especfico, por exemplo, autotrficos nitrificantes, uma populao densa uma boa evidncia da atividade nitrificante. Solos arveis contm abundncia de desnitrificantes o que demonstra somente um potencial para volatilizao rpida do nitrognio. A capacidade para a verdadeira desnitrificao limitada a certas bactrias. As espcies ativas so limitadas aos gneros: Pseudomonas, Bacillus, Paracoccus, embora Thiobacillus denitrificans e ocasionalmente Chromobacterium, Corynebacterium, Hyphomicrobium ou Serratia catalizam a reduo. GNEROS DE BACTRIAS DESNITRIFICANTES GNERO CARACTERSTICAS Alcaligenes Comumente isolada de solos Agrobacterium Algumas espcies so fitopatognicas Azospirillum Fixadores de N2, comumente associado a gramineas Bacillus Desnitrificantes termoflicos Flavobacterium Espcies desnitrificantes Halobacterium Requerem altas concentraes salinas para crescimento 12

Paracoccus Propionibacterium Pseudomonas Rhizobium Rhodopseudomonas Thiobacillus

Capaz de crescimento litotrfico e heterotrfico Denitrificantes com capacidade de fermentar Comumente isolada do solo Fixadores de N2 em simbiose com leguminosas Fotossintticos Geralmente cresce como quimioautotrficos

As bactrias desnitrificantes so aerbias, mas o nitrato pode ser usado como aceptor de eltrons para crescimento na ausncia de O2. T. denitrificans 5S + 6KNO3 + 2H2O 3N2 + K2SO4 + 4KHSO4 (I) 5K2S2O3 + 8KNO3 + H2 4N2 + 9K2SO4 + H2SO4 (II) Quimiodesnitrificao As nitrito redutases so responsveis no s pela dismutao do NO 2 no solo. Ela est tambm sujeita a reaes qumicas que levam a produo de N 2 por vias no enzimticas sob condies de total arejamento. Perdas de N-NO2- devido a sua instabilidade e dismutao a outros xidos de N e a N 2 so geralmente denominados de quimiodesnitrificao. RNH2 + HNO2 ROH + H2O + N2 HNO2 + NH4+ N2 + 2H2O 3 HNO2 HNO3 + H2O + 2NONO2- + NH4+ NH4NO2 N2 + H2O Fatores que afetam a desnitrificao 1- Elevada disponibilidade de NO32- Diminuio da disponibilidade de O2 (aerao fraca) 3- Suprimento de matria orgnica 4- umidade do solo; aerao; pH e temperatura. A taxa de desnitrificao muito menor em solos com pouco carbono que em solos ricos em matria orgnica. A efetividade dos nutrientes orgnicos em promover a desnitrificao em solos inundados proporcional a sua disponibilidade. A aerao afeta a transformao em duas formas aparentemente contratante: 1. Desnitrificao ocorre somente quando o suprimento de O2 insuficiente para satisfazer a demanda biolgica, 2. Ao mesmo tempo, O2 requerido para a formao de nitrito e nitrato, os quais so essenciais para a desnitrificao. A demonstrao de N2 volatilizado de solos mantidos a tenses normais de O2 indicam que os poros e interstios no perfil no so inteiramente oxigenados. Assim, apreciveis perdas podem ser encontradas em solos submersos usados para arroz. A inibio da desnitrificao pelo O2 no pode ser atribuda a influncia detrimental do O2 sobre o crescimento pois as espcies ativas so aerbias. At certo ponto a supresso da reduo do nitrato pode refletir o uso preferencial do O 2 como aceptor de eltrons. Por outro lado pode ser o efeito sobre enzimas de reduo ou mesmo represso sobre a formao das enzimas desnitrificantes. Em solos bem drenados, a volatilizao relacionada com o contedo de umidade. Desnitrificao aprecivel em altos nveis de umidade e em localidades com drenagem imprpria. Nenhuma perda ocorre usualmente em solos com menos que 60% da capacidade de reteno do solo, independente do carboidrato, nitrato ou 13

pH. Acima de 50% a magnitude da desnitrificao correlacionada diretamente com o teor de umidade. Muitas das bactrias desnitrificantes so sensveis acidez (altas concentraes hidrogeninicas). Assim vrios solos cidos possuem uma microbiota esparsa. Essa observao ecolgica est de acordo com estudos efetuados em cultura pura. A acidez governa no somente a taxa de desnitrificao mas tambm a abundncia relativa dos vrios gases. altas concentraes de NO3- e pH > 6,0 --> domnio de N2 baixas concentraes de NO3- e pH 6,0 - 6,5 --> domnio de N2O Em pH baixo, o NO pode aparecer em quantidades significantes. A desnitrificao marcadamente afetada pela temperatura. A transformao lenta a 2oC e aumenta com a temperatura. A tima para a reao de 25 oC ou acima. A desnitrificao ainda rpida a temperaturas elevadas e vai ocorrer at cerca de 60 a 65oC, mas no a 70oC. Assim tem-se uma microbiota termoflica desnitrificante. O fato d a desnitrificao no ocorrer em temperaturas baixas pode ter implicao econmica de importncia, em regies onde no h plantas crescendo no inverno para assimilar o nitrato formado. Bioqumica da reduo do nitrato Na oxidao aerbia de carboidrato tem-se: C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O No metabolismo aerbio dos heterotrficos o poder redutor do carboidrato, representado pelo H+, usado para formar H2O com o O2. Na respirao heterotrfica do nitrato ou desnitrificao, o poder redutor conjugado com estados oxidados do nitrognio. 2NO-3 + 1OH- N2 + 4H2O + 2OH2NO2- + 6H+ N2 + 2H2O + 2OHN2O + 2H N2 + H2O 2HNO3 2HNO2 2NO N2O N2

? (2NH2OH) 2 NH3 As enzimas responsveis so denominadas nitrato redutase , nitrito redutase, xido ntrico redutase e xido nitroso redutase. A nitrato redutase apresenta como cofator o Molibdnio (Mo).

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Fixao Biolgica do Nitrognio (FBN)


O processo de fixao de nitrognio definido como sendo a converso do nitrognio molecular (N2) em amnia ( N2 2 NH3). Existem, bsicamente, duas alternativas para a realizao do processo: a) fixao qumica (industrial) e b) fixao biolgica do nitrognio (FBN). A fixao qumica corresponde a reao do nitrognio com hidrognio, sob alta temperatura e presso, conhecido como processo de Harber-Bosch, desenvolvido no incio do sculo XX na alemanha, que tem sido a base de produo dos adubos nitrogenados para a agricultura moderna: A fixao Biolgica do nitrognio (FBN) corresponde, essencialmente, mesma reao, porm realizada por microrganismos denominados fixadores de nitrognio ou diazotrficos: Nitrogenase (Nase) N2 + (8H+) + (8e-) + 16 ATP ---------------------------- 2NH3 + H2 + 16ADP +P Assim, o processo de FBN a reduo do N2 atmosfrico at N-amoniacal, disponvel para microrganismos e plantas. Devido alta estabilidade do N2 (N N), esta reao tem um custo energtico alto, o que restringe este processo a poucos grupos de microrganismos adaptados condio diazotrfica. Os requerimentos essenciais para este processo so: a) Microrganismos procariticos: todo processo de FBN realizado somente por determinados grupos de bactrias e actinomicetos. b) Presena de nitrogenase (Nase): A nitrogensase um complexo enzimtico responsvel pela reduo do N2 at NH3, e somente alguns grupos de microrganismos procariticos apresentam os determinantes genticos de sua produo. Tais microrganismos so denominados diazotrficos. c) Excluso do Oxignio molecular. A reao de fixao do N2 corresponde a uma reduo. Desse modo a presena de um forte agente oxidante causa a sua inibio. Entretanto, vrios microrganismos aerbios podem realizar a FBN, desde que apresente algum mecanismo de proteo da Nase tais como: produo de leghemoglobina (rizbio-leguminosas), produo de heterocistos (cianobactrias), proteo respiratria (Azotobacter), produo de mucopolissacardeos (Derxia, Beijerickia). d) Fonte de Carbono orgnico: Devido ao alto consumo energtico da reao de fixao, o processo deve estar ligado a um suprimento contnuo e eficaz de carbono orgnico, para gerao de ATP e proder redutor correspondente. Principais Sistemas Fixadores de Nitrognio Existem na natureza trs grandes sistemas fixadores: a) Vida livre; b) Associativo c) Mutualstico. a) Vida livre Correspondem aos microrganismos que podem ser encontrados nos mais diversos ambientes de solos ou mesmo aquticos, no estando necessariamente associado ou fazendo parte de estruturas mutualsticas. Estes micorganismos podem ser organotrficos, ou seja dependentes de fonte de carbono orgnico ou fotossintticos. Podem apresentar tambm um metabolismo diversificado com relao ao oxignio, representado pelos grupos aerbios 15

(Azotobacter, Beijerinckia, Derxia), Facultativos ( Klebsiella, Bacillus, Azospirillum), e anaerbios ( Clostridium, Desulfovibrio, Metanobactrias). Entre os microrganismos fotossintticos de vida livre podemos citar: Cianobactrias (Nostoc), Bactrias prpuras (Rhodospirillum, Chromatium, Thiocapsa). A contribuio desses microrganismos, em termos de seu potencial de adio de Ncombinado (N-NH3) nos ecossistemas pequena, variando de 2,0 a 10,0 kg N h.-1 ano-1 b) Associativo. A superfcie e tecidos de plantas constitui um habitat com fonte de carbono, umidade onde podem se instalar alguns tipos de microrganismos diazotrficos. No caso de Grammeas C4, verificou-se que tanto a rizosfera quanto os tecidos internos de folhas, podem conter microrganismos que alm de promover a fixao de nitrognio podem secretar hormnios de crescimento vegetal , situao que confere grande auxilio no crescimento e desenvolvimento da planta. Os microrganismos de ocorrncia natural nos tecidos das plantas so denominados de endofticos. Como exemplos podemos citar os gneros Azospirillum, Acetobacter (Cana-de-aucar), herbaspirillum. A contribuio dos sistemas associativos em termos de potencial de fixao de nitrognio, ainda est sob estudo, mas, observaes recentes evidenciam o elevado potencial dessa interao, podendo adicionar de 20 a 100 kg N h.-1 ano-1 c) Mutualstico. Neste tipo de interao, ocorre uma interdependncia entre plantas e bactrias, com formao de estruturas especializadas, como por exemplo os Lquens (Cianobactrias + fungos), ndulo radicular ( rizbio + leguminosa), actinorriza ( acinomiceto + essencias florestais), lobulos foliares (Azolla + cianobactria). Os sistemas fixadores mutualsticos apresentam uma alta eficiencia de fixao devido ao suprimento adequado de carbono orgnico aliado com mecanismos especficos de proteo ao oxignio, como por exemplo os ndulos radiculares com produo de leghemoblogina. O potencial deste sistema fixador alto, podendo atingir de 30 a 200 kg N h. -1 ano-1 dependendo do sistema considerado. Estrutura e funcionamento da nitrogenase (Nase) O complexo enzimtico da nitrogenase consiste de duas fraes (I e II). A frao II uma protena com ncleo prosttico de Fe, sendo denominada Nitrogenase redutase. Apresentando uma estrutura dmera (2 subnidades). A frao I contm Molibdnio (Mo) e denominada molibdoproteina ou dinitrogenase., apresentando estrutura tetrmera ( 4 sub-unidades). As fraes I e II esto agrupadas de modo a permitir um contnuo fluxo de eltrons (eo-) da Frao II para I. O funcionamento do complexo nitrogenase depende de um suprimento contnuo de eletrons (eo-) de protons (H+) para promover a reduo do N2 at NH3, por meio de molculas carreadoras denominadas ferrodoxina ou flavodoxinas. Estes eltrons so captados pela nitrogenase redutase (Frao II) que tem 2 molculas de Mg.ATP associada. Este complexo da Frao II mais eletrons e ATP liga-se Frao I, a dinitrogenase contendo Mo, liberando eltrons e ATP. Nos sitios de Molibdnio ocorre a reduo de N N at NH3. O esquema da Figura 1 ilustra o funcionamento da nitrogenase nos sistemas diazotrficos.

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F.ig. 1 Fixao biolgica de Nitrognio pelo sistema nitrogenase: (1) Gerao


de poder redutor (Fonte de Corg e metabolismo oxidativo). (2) Fluxo de protons e eletrons para as fraes I e II da nitrogenase, respectivamente. (3) Transferncia de eletrons da Frao II (Ferro-protena reduzida) para frao I (molibdo-protena) com gerao de ATP. (4) Reduo do N2 ao nvel do cofator Mo da frao I com gero de amonia e hidrognio. (5) Sistema opcional de reciclagem de protons e eletrons pela enzima hidrogenase, que pode promover um aumento da eficiencia do sistema de fixao de nitrognio. Alguns sistemas fixadores de nitrognio apresentam uma eficincia de fixao mais elevada do que outros. Verificou-se que este fato est ligado presena de um sistema enzimtico denominado Hidrogenase. Este sistema converte o H2 produzido na atividade de nitrogenase em protons e eletrons que podem ser reciclados, economizando-se assim o poder redutor da clula, o que se traduz em aumento de eficincia. Tais sistemas j foram identificados e as clulas que apresentam hidrogenase so denominadas Hup+. Assimilao do Nitrognio fixado Todo o nitrognio derivado da fixao obtido na forma de amonia que imediatamente protonada (NH4+) e deve ser assimilada, ou seja, incorporada em cadeias carbonicas para formao de aminoacidos e translocados para as diversas partes da planta. H duas rotas de assimilao de NH4+: a) GDH glutamato deshidorogenase; b) GS-GOGAT Glutamina sintase e glutamina-cetoglutarato amino transferase. Ambas vias levam a incorporaao do N fixado no grupo amida do aminoacido glutamato. A via GDH opera quando aconcentrao de NH4+ est acima de 1,5 mM e a via GS-GOGAT ativada quando esta concentrao mais baixa de 1,5 mM. Uma possvel explicao se fundamenta na energia gasta para esta assimilao, pois a via GDH opera com o gasto de 1 NADPH2, enquanto a via GS opera com gasto de 1NADH + 2 ATP/ mol glutamato formado, sendo, dessa maneira, mais onerosa para a clula. As reaes principais de assimilao esto ilustradas na figura 2 abaixo.

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ESTUDO DIRIGIDO 1. Esquematizar o ciclo do nitrognio. 2. Discuta os seguintes pontos: a) - Mineralizao do N b) - Imobilizao do N c) - Amonificao d) - Nitrificao e) - Assimilao do N pelas plantas e pelos microrganismos f) - Lixiviao do N g) - Volatilizao do N 3. 4. 5. 6. 7. 8. Quais os fatores que afetam a mineralizao do nitrognio? Quais os mecanismos comuns para a degradao inicial dos aminocidos? Como ocorre o metabolismo dos cidos nuclicos? Como se processa a decomposio da Uria? Quais so os manejos que podem reduzir a perda de amnia, por volatilizao? Complete o quadro abaixo: Eficincia de Assimilao de C Relao C/N Bactrias Actnomicetos Fungos 9. O que a nitrificao? 10. Qual a importncia da nitrificao? 11. Como so classificadas as bactrias nitrificantes? como elas atuam? 12. O que caracterizas as bactrias nitrificantes? 13. O nitrito no acumulado no solo. Por que? 14. Quas as condies que podem favorecer o acmulo de nitrito no solo? 15. Quais so os fatores que podem afetar a nitrificao? como esses fatores afetam a nitrificao? 16. Como ocorre a poluio por nitrato? quais as suas consequncias? 17. Como a nitrificao pode ser inibida? 18. Em que situaes pode haver acmulo de nitrito no solo? 19. Por que a nitrificao maior em solos cidos quando se usa uria ao invs de sulfato de amnia? 20. O que o processo de desnitrificao? 21. O que significa respirao de nitrato? 22. Quais os produtos da desnitrificao? 23. Quais os mecanismos de volatilizao de nitrognio? 24. Qual(is) a(s) condio(es) que favorece(m) a desnitrificao? 25. O que caracteriza as bactrias desnitrificantes? 26. Quais so as enzimas envolvidas no processo de desnitrificao? 27. Quais os fatores que afetam a desnitrificao? 28. Diferenciar a fixao quimica e biolgica do N2 29. Caracterizar os principais sistemas de fixao de nitrognio. 30. Enumerar os requerimentos para um sistema fixador de N2 31. Na siestema nitrogenase onde acontece a reduo de N2? Porque? 32. Qual a participao do molibdenio (Mo) na nutrio nitrogenada de plantas? 33. Como o nitrognio fixado assimilado pelos microrganismos e plantas?

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